pDC312腺病毒质粒

基本信息
名称：pDC312腺病毒质粒
别称: pDC312

质粒大小:	3288bp
原核抗性:	Amp
克隆菌株:	Stbl3
培养条件:	37度

质粒属性

载体宿主：	哺乳细胞,腺病毒
载体用途：	蛋白表达
基因种属：
基因类型：	ORF
原核抗性：	Amp
真核抗性：
荧光蛋白：

质粒简介
 pDC312质粒是一个腺病毒表达载体，MCS处前后无CMV启动子和poly A终止子，方便插入完整表达盒。
质粒图谱


质粒序列
LOCUS       Exported                3288 bp ds-DNA     circular SYN 25-OCT-2017
DEFINITION  synthetic circular DNA
SOURCE      synthetic DNA construct
  ORGANISM  synthetic DNA construct
REFERENCE   1  (bases 1 to 3288)
  TITLE     Direct Submission
            http://www.miaolingbio.com
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..3288
                     /organism="synthetic DNA construct"
                     /mol_type="other DNA"
     misc_signal     190..340
                     /label=Ad5 Psi
                     /note="packaging signal for adenovirus serotype 5"
     misc_feature    455..508
                     /label=MCS
     protein_bind    526..559
                     /label=loxP
                     /bound_moiety="Cre recombinase"
                     /note="Cre-mediated recombination occurs in the 8-bp core 
                     sequence (GCATACAT)."
     rep_origin      complement(1022..1610)
                     /direction=LEFT
                     /label=ori
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                     replication"
     CDS             complement(1781..2641)
                     /codon_start=1
                     /gene="bla"
                     /product="beta-lactamase"
                     /label=AmpR
                     /note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
                     related antibiotics"
                     /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
                     ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRVDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
                     PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
                     EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
                     LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
                     LIKHW"
     promoter        complement(2642..2746)
                     /gene="bla"
                     /label=AmpR promoter
ORIGIN
        1 ttcatcaata atatacctta ttttggattg aagccaatat gataatgagg gggtggagtt
       61 tgtgacgtgg cgcggggcgt gggaacgggg cgggtgacgt agtagtgtgg cggaagtgtg
      121 atgttgcaag tgtggcggaa cacatgtaag cgacggatgt ggcaaaagtg acgtttttgg
      181 tgtgcgccgg tgtacacagg aagtgacaat tttcgcgcgg ttttaggcgg atgttgtagt
      241 aaatttgggc gtaaccgagt aagatttggc cattttcgcg ggaaaactga ataagaggaa
      301 gtgaaatctg aataattttg tgttactcat agcgcgtaat atttgtctag ggccgcgggg
      361 actttgaccg tttacgtgga gactcgccca ggtgtttttc tcaggtgttt tccgcgttcc
      421 gggtcaaagt tggcgtttta ttattatagt cagctctaga gtcgacgagc tcaagcttag
      481 atctgctagc aggcctgaat tcggatccct cgactcgaag atccaataac ttcgtatagc
      541 atacattata cgaagttata agtgccgccc tataccttgt ctgcctcccc gcgttgcgtc
      601 gcggtgcatg gagccgggcc acctcgacct gaatggaagc cggcggcacc tcgctaacgg
      661 attcaccact ccaagaattg gagccaatca attcttgcgg agaactgtga atgcgcaaac
      721 caacccttgg cagaacatat ccatcgcgtc cgccatctcc agcagccgca cgcggcgcat
      781 ctcggctgca ttaatgaatc ggccaacgcg cggggagagg cggtttgcgt attgggcgct
      841 cttccgcttc ctcgctcact gactcgctgc gctcggtcgt tcggctgcgg cgagcggtat
      901 cagctcactc aaaggcggta atacggttat ccacagaatc aggggataac gcaggaaaga
      961 acatgtgagc aaaaggccag caaaaggcca ggaaccgtaa aaaggccgcg ttgctggcgt
     1021 ttttccatag gctccgcccc cctgacgagc atcacaaaaa tcgacgctca agtcagaggt
     1081 ggcgaaaccc gacaggacta taaagatacc aggcgtttcc ccctggaagc tccctcgtgc
     1141 gctctcctgt tccgaccctg ccgcttaccg gatacctgtc cgcctttctc ccttcgggaa
     1201 gcgtggcgct ttctcaatgc tcacgctgta ggtatctcag ttcggtgtag gtcgttcgct
     1261 ccaagctggg ctgtgtgcac gaaccccccg ttcagcccga ccgctgcgcc ttatccggta
     1321 actatcgtct tgagtccaac ccggtaagac acgacttatc gccactggca gcagccactg
     1381 gtaacaggat tagcagagcg aggtatgtag gcggtgctac agagttcttg aagtggtggc
     1441 ctaactacgg ctacactaga aggacagtat ttggtatctg cgctctgctg aagccagtta
     1501 ccttcggaaa aagagttggt agctcttgat ccggcaaaca aaccaccgct ggtagcggtg
     1561 gtttttttgt ttgcaagcag cagattacgc gcagaaaaaa aggatctcaa gaagatcctt
     1621 tgatcttttc tacggggtct gacgctcagt ggaacgaaaa ctcacgttaa gggattttgg
     1681 tcatgagatt atcaaaaagg atcttcacct agatcctttt aaattaaaaa tgaagtttta
     1741 aatcaatcta aagtatatat gagtaaactt ggtctgacag ttaccaatgc ttaatcagtg
     1801 aggcacctat ctcagcgatc tgtctatttc gttcatccat agttgcctga ctccccgtcg
     1861 tgtagataac tacgatacgg gagggcttac catctggccc cagtgctgca atgataccgc
     1921 gagacccacg ctcaccggct ccagatttat cagcaataaa ccagccagcc ggaagggccg
     1981 agcgcagaag tggtcctgca actttatccg cctccatcca gtctattaat tgttgccggg
     2041 aagctagagt aagtagttcg ccagttaata gtttgcgcaa cgttgttgcc attgctacag
     2101 gcatcgtggt gtcacgctcg tcgtttggta tggcttcatt cagctccggt tcccaacgat
     2161 caaggcgagt tacatgatcc cccatgttgt gcaaaaaagc ggttagctcc ttcggtcctc
     2221 cgatcgttgt cagaagtaag ttggccgcag tgttatcact catggttatg gcagcactgc
     2281 ataattctct tactgtcatg ccatccgtaa gatgcttttc tgtgactggt gagtactcaa
     2341 ccaagtcatt ctgagaatag tgtatgcggc gaccgagttg ctcttgcccg gcgtcaacac
     2401 gggataatac cgcgccacat agcagaactt taaaagtgct catcattgga aaacgttctt
     2461 cggggcgaaa actctcaagg atcttaccgc tgttgagatc cagttcgatg taacccactc
     2521 gtgcacccaa ctgatcttca gcatctttta ctttcaccag cgtttctggg tgagcaaaaa
     2581 caggaaggca aaatgccgca aaaaagggaa taagggcgac acggaaatgt tgaatactca
     2641 tactcttcct ttttcaatat tattgaagca tttatcaggg ttattgtctc atgagcggat
     2701 acatatttga atgtatttag aaaaataaac aaataggggt tccgcgcaca tttccccgaa
     2761 aagtgccacc tgacgtctaa gaaaccatta ttatcatgac attaacctat aaaaataggc
     2821 gtatcactct aggcaaaata gcaccctccc gctccagaac aacatacagc gcttcacagc
     2881 ggcagcctaa cagtcagcct taccagtaaa aaagaaaacc tattaaaaaa acaccactcg
     2941 acacggcacc agctcaatca gtcacagtgt aaaaaagggc caagtgcaga gcgagtatat
     3001 ataggactaa aaaatgacgt aacggttaaa gtccacaaaa aacacccaga aaaccgcacg
     3061 cgaacctacg cccagaaacg aaagccaaaa aacccacaac ttcctcaaat cgtcacttcc
     3121 gttttcccac gttacgtaac ttcccatttt aagaaaacta caattcccaa cacatacaag
     3181 ttactccgcc ctaaaaccta cgtcacccgc cccgttccca cgccccgcgc cacgtcacaa
     3241 actccacccc ctcattatca tattggcttc aatccaaaat aaggtata
//

质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片

P2459/pENTR223-POMT2人源基因质粒

P2460/pENTR223-CLPB人源基因质粒

P2461/pENTR223-KIF1B人源基因质粒

P2462/pENTR223-MSTO1人源基因质粒

P2463/pENTR223-ITIH5(3点突变）人源基因质粒

P2464/pENTR223-DVL3人源基因质粒

P2465/pENTR223-IGHM人源基因质粒

P2466/pENTR223-TAP2-1395A人源基因质粒

P2467/pENTR223-OXR1-G3T人源基因质粒

P2468/pENTR223-CFB人源基因质粒

P2469/pENTR223-TTC14人源基因质粒