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- 详细信息
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-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pBIND
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pBIND哺乳双杂交质粒
别称: pBIND
质粒属性
质粒简介
pBIND是高拷贝质粒的CMV即刻早期启动子在其中的驱动基因表达的酵母GAL4基因在部分（氨基酸1–147）含有DNA结合域。的影响的DNA结合域的序列的载体，是由chimeric flanked多克隆区，内含子，终止密码子和多聚腺苷酸化SV40晚期区一。该融合基因的T7和T3 flanked区是由RNA聚合酶的发起人是目的synthesizing正义和反义RNA的产品，分别。海肾荧光素酶基因的载体，是对本preceded SV40早期启动子的基因的内含子和生长激素。增加蛋白表达的mRNA的内含子可以通过稳定的运输到细胞质和核（9–12）的影响。合成的多聚腺苷酸序列3´睡的海肾荧光素酶基因。在骨干网中包含了一个F1的质粒复制的起源和生产的单链DNA（β-内酰胺酶基因在大肠杆菌中的表）的选择。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 6360 bp ds-DNA circular SYN 05-SEP-2016
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS Untitled 8
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 6360)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Monday, September 5, 2016 from SnapGene Viewer 3.1.4
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..6360
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
enhancer 138..517
/note="CMV enhancer"
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 518..729
/note="CMV promoter"
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
intron 890..1022
/note="chimeric intron"
/note="chimera between introns from human beta-globin and
immunoglobulin heavy chain genes"
promoter 1067..1085
/note="T7 promoter"
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
CDS 1116..1556
/codon_start=1
/gene="Saccharomyces cerevisiae GAL4 (truncated)"
/product="DNA binding domain of the GAL4 transcriptional
activator"
/note="GAL4 DNA binding domain"
/translation="MKLLSSIEQACDICRLKKLKCSKEKPKCAKCLKNNWECRYSPKTK
RSPLTRAHLTEVESRLERLEQLFLLIFPREDLDMILKMDSLQDIKALLTGLFVQDNVNK
DAVTDRLASVETDMPLTLRQHRISATSSSEESSNKGQRQLTVS"
promoter complement(1640..1657)
/note="T3 promoter"
/note="promoter for bacteriophage T3 RNA polymerase"
polyA_signal 1675..1796
/note="SV40 poly(A) signal"
/note="SV40 polyadenylation signal"
rep_origin 1982..2437
/direction=RIGHT
/note="f1 ori"
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
promoter 2509..2866
/note="SV40 promoter"
/note="SV40 enhancer and early promoter"
rep_origin 2717..2852
/note="SV40 ori"
/note="SV40 origin of replication"
CDS 3208..4143
/codon_start=1
/product="luciferase from the anthozoan coelenterate
Renilla reniformis (sea pansy)"
/note="Rluc"
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KGLHFSQEDAPDEMGKYIKSFVERVLKNEQ"
polyA_signal 4201..4249
/note="synthetic polyadenylation signal"
promoter 4563..4667
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
CDS 4668..5528
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/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/note="AmpR"
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
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LIKHW"
rep_origin 5699..6287
/direction=RIGHT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
ORIGIN
1 tcaatattgg ccattagcca tattattcat tggttatata gcataaatca atattggcta
61 ttggccattg catacgttgt atctatatca taatatgtac atttatattg gctcatgtcc
121 aatatgaccg ccatgttggc attgattatt gactagttat taatagtaat caattacggg
181 gtcattagtt catagcccat atatggagtt ccgcgttaca taacttacgg taaatggccc
241 gcctggctga ccgcccaacg acccccgccc attgacgtca ataatgacgt atgttcccat
301 agtaacgcca atagggactt tccattgacg tcaatgggtg gagtatttac ggtaaactgc
361 ccacttggca gtacatcaag tgtatcatat gccaagtccg ccccctattg acgtcaatga
421 cggtaaatgg cccgcctggc attatgccca gtacatgacc ttacgggact ttcctacttg
481 gcagtacatc tacgtattag tcatcgctat taccatggtg atgcggtttt ggcagtacac
541 caatgggcgt ggatagcggt ttgactcacg gggatttcca agtctccacc ccattgacgt
601 caatgggagt ttgttttggc accaaaatca acgggacttt ccaaaatgtc gtaacaactg
661 cgatcgcccg ccccgttgac gcaaatgggc ggtaggcgtg tacggtggga ggtctatata
721 agcagagctc gtttagtgaa ccgtcagatc actagaagct ttattgcggt agtttatcac
781 agttaaattg ctaacgcagt cagtgcttct gacacaacag tctcgaactt aagctgcagt
841 gactctctta aggtagcctt gcagaagttg gtcgtgaggc actgggcagg taagtatcaa
901 ggttacaaga caggtttaag gagaccaata gaaactgggc ttgtcgagac agagaagact
961 cttgcgtttc tgataggcac ctattggtct tactgacatc cactttgcct ttctctccac
1021 aggtgtccac tcccagttca attacagctc ttaaggctag agtacttaat acgactcact
1081 ataggctagc cagcttgaag caagcctcct gaaagatgaa gctactgtct tctatcgaac
1141 aagcatgcga tatttgccga cttaaaaagc tcaagtgctc caaagaaaaa ccgaagtgcg
1201 ccaagtgtct gaagaacaac tgggagtgtc gctactctcc caaaaccaaa aggtctccgc
1261 tgactagggc acatctgaca gaagtggaat caaggctaga aagactggaa cagctatttc
1321 tactgatttt tcctcgagaa gaccttgaca tgattttgaa aatggattct ttacaggata
1381 taaaagcatt gttaacagga ttatttgtac aagataatgt gaataaagat gccgtcacag
1441 atagattggc ttcagtggag actgatatgc ctctaacatt gagacagcat agaataagtg
1501 cgacatcatc atcggaagag agtagtaaca aaggtcaaag acagttgact gtatcgccgg
1561 aattcccggg gatccgtcga cttgacgcgt tgatatcatc tagagcggcc gcaggtacct
1621 gaataactaa ggccgcttcc ctttagtgag ggttaatgct tcgagcagac atgataagat
1681 acattgatga gtttggacaa accacaacta gaatgcagtg aaaaaaatgc tttatttgtg
1741 aaatttgtga tgctattgct ttatttgtaa ccattataag ctgcaataaa caagttaaca
1801 acaacaattg cattcatttt atgtttcagg ttcaggggga gatgtgggag gttttttaaa
1861 gcaagtaaaa cctctacaaa tgtggtaaaa tccgataagg atcgatccgg gctggcgtaa
1921 tagcgaagag gcccgcaccg atcgcccttc ccaacagttg cgcagcctga atggcgaatg
1981 gacgcgccct gtagcggcgc attaagcgcg gcgggtgtgg tggttacgcg cagcgtgacc
2041 gctacacttg ccagcgccct agcgcccgct cctttcgctt tcttcccttc ctttcacgcc
2101 acgttcgccg gctttccccg tcaagctcta aatcgggggc tccctttagg gttccgattt
2161 agtgctttac ggcacctcga ccccaaaaaa cttgattagg gtgatggttc acgtagtggg
2221 ccatcgccct gatagacggt ttttcgccct ttgacgttgg agtccacgtt ctttaatagt
2281 ggactcttgt tccaaactgg aacaacactc aaccctatct cggtctattc ttttgattta
2341 taagggattt tgccgatttc ggcctattgg ttaaaaaatg agctgattta acaaaaattt
2401 aacgcgaatt ttaacaaaat attaacgctt acaatttcct gatgcggtat tttctcctta
2461 cgcatctgtg cggtatttca caccgcatac gcggatcttc cgtaccttct gaggcggaaa
2521 gaaccagctg tggaatgtgt gtcagttagg gtgtggaaag tccccaggct ccccagcagg
2581 cagaagtatg caaagcatgc atctcaatta gtcagcaacc aggtgtggaa agtccccagg
2641 ctccccagca ggcagaagta tgcaaagcat gcatctcaat tagtcagcaa ccatagtccc
2701 gcccctaact ccgcccatcc cgcccctaac tccgcccagt tccgcccatt ctccgcccca
2761 tggctgacta atttttttta tttatgcaga ggccgaggcc gcctcggcct ctgagctatt
2821 ccagaagtag tgaggaggct tttttggagg cctaggcttt tgcaaaaagc ttgattcttc
2881 tgacacaaca gtctcgaact taaggctaga attctggcta caggtaagcg cccctaaaat
2941 ccctttgggc acaatgtgtc ctgaggggag aggcagcgac ctgtagatgg gacgggggca
3001 ctaaccctca ggtttggggc ttctgaatgt gagtatcgcc atgtaagccc agtatttggc
3061 caatctcaga aagctcctgg tccctggagg gatggagaga gaaaaacaaa cagctcctgg
3121 agcagggaga gtgctggcct cttgctctcc ggctccctct gttgccctct ggtttctccc
3181 caggctcccg gacgtcctct agccaccatg acttcgaaag tttatgatcc agaacaaagg
3241 aaacggatga taactggtcc gcagtggtgg gccagatgta aacaaatgaa tgttcttgat
3301 tcatttatta attattatga ttcagaaaaa catgcagaaa atgctgttat ttttttacat
3361 ggtaacgcgg cctcttctta tttatggcga catgttgtgc cacatattga gccagtagcg
3421 cggtgtatta taccagacct tattggtatg ggcaaatcag gcaaatctgg taatggttct
3481 tataggttac ttgatcatta caaatatctt actgcatggt ttgaacttct taatttacca
3541 aagaagatca tttttgtcgg ccatgattgg ggtgcttgtt tggcatttca ttatagctat
3601 gagcatcaag ataagatcaa agcaatagtt cacgctgaaa gtgtagtaga tgtgattgaa
3661 tcatgggatg aatggcctga tattgaagaa gatattgcgt tgatcaaatc tgaagaagga
3721 gaaaaaatgg ttttggagaa taacttcttc gtggaaacca tgttgccatc aaaaatcatg
3781 agaaagttag aaccagaaga atttgcagca tatcttgaac cattcaaaga gaaaggtgaa
3841 gttcgtcgtc caacattatc atggcctcgt gaaatcccgt tagtaaaagg tggtaaacct
3901 gacgttgtac aaattgttag gaattataat gcttatctac gtgcaagtga tgatttacca
3961 aaaatgttta ttgaatcgga cccaggattc ttttccaatg ctattgttga aggtgccaag
4021 aagtttccta atactgaatt tgtcaaagta aaaggtcttc atttttcgca agaagatgca
4081 cctgatgaaa tgggaaaata tatcaaatcg ttcgttgagc gagttctcaa aaatgaacaa
4141 taattctagc cctgaataag tgataataag cggatgaatg gcagaaattc gtcgaagcgc
4201 aataaaatat ctttattttc attacatctg tgtgttggtt ttttgtgtga atcgatagcg
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4321 agttaagcca gccccgacac ccgccaacac ccgctgacgc gccctgacgg gcttgtctgc
4381 tcccggcatc cgcttacaga caagctgtga ccgtctccgg gagctgcatg tgtcagaggt
4441 tttcaccgtc atcaccgaaa cgcgcgagac gaaagggcct cgtgatacgc ctatttttat
4501 aggttaatgt catgataata atggtttctt agacgtcagg tggcactttt cggggaaatg
4561 tgcgcggaac ccctatttgt ttatttttct aaatacattc aaatatgtat ccgctcatga
4621 gacaataacc ctgataaatg cttcaataat attgaaaaag gaagagtatg agtattcaac
4681 atttccgtgt cgcccttatt cccttttttg cggcattttg ccttcctgtt tttgctcacc
4741 cagaaacgct ggtgaaagta aaagatgctg aagatcagtt gggtgcacga gtgggttaca
4801 tcgaactgga tctcaacagc ggtaagatcc ttgagagttt tcgccccgaa gaacgttttc
4861 caatgatgag cacttttaaa gttctgctat gtggcgcggt attatcccgt gttgacgccg
4921 ggcaagagca actcggtcgc cgcatacact attctcagaa tgacttggtt gagtactcac
4981 cagtcacaga aaagcatctt acggatggca tgacagtaag agaattatgc agtgctgcca
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5941 ccagtggcga taagtcgtgt cttaccgggt tggactcaag acgatagtta ccggataagg
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6241 agcgtcgatt tttgtgatgc tcgtcagggg ggcggagcct atggaaaaac gccagcaacg
6301 cggccttttt acggttcctg gccttttgct ggccttttgc tcacatggct cgacagatct
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pBIND哺乳双杂交质粒
别称: pBIND
| 启动子: | CMV |
|---|---|
| 复制子: | pUC |
| 终止子: | SV40 poly(A) signal |
| 质粒分类: | 哺乳细胞，哺乳动物双杂交载体 |
| 质粒大小: | 6360bp |
| 原核抗性: | Amp |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
| 表达宿主: | 哺乳细胞 |
| 诱导方式: | 无须诱导，瞬时表达 |
| 5'测序引物: | CMV-F：CGCAAATGGGCGGTAGGCGTG |
| 3'测序引物: | 根据序列设计引物 |
质粒属性
| 载体宿主： | 哺乳细胞 |
|---|---|
| 载体用途： | 杂交 |
| 基因种属： | 空载体 |
| 基因类型： | ORF |
| 原核抗性： | Amp |
| 真核抗性： | |
| 荧光蛋白： | rLuc |
质粒简介
pBIND是高拷贝质粒的CMV即刻早期启动子在其中的驱动基因表达的酵母GAL4基因在部分（氨基酸1–147）含有DNA结合域。的影响的DNA结合域的序列的载体，是由chimeric flanked多克隆区，内含子，终止密码子和多聚腺苷酸化SV40晚期区一。该融合基因的T7和T3 flanked区是由RNA聚合酶的发起人是目的synthesizing正义和反义RNA的产品，分别。海肾荧光素酶基因的载体，是对本preceded SV40早期启动子的基因的内含子和生长激素。增加蛋白表达的mRNA的内含子可以通过稳定的运输到细胞质和核（9–12）的影响。合成的多聚腺苷酸序列3´睡的海肾荧光素酶基因。在骨干网中包含了一个F1的质粒复制的起源和生产的单链DNA（β-内酰胺酶基因在大肠杆菌中的表）的选择。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 6360 bp ds-DNA circular SYN 05-SEP-2016
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS Untitled 8
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 6360)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Monday, September 5, 2016 from SnapGene Viewer 3.1.4
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FEATURES Location/Qualifiers
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promoter"
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immunoglobulin heavy chain genes"
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1 tcaatattgg ccattagcca tattattcat tggttatata gcataaatca atattggcta
61 ttggccattg catacgttgt atctatatca taatatgtac atttatattg gctcatgtcc
121 aatatgaccg ccatgttggc attgattatt gactagttat taatagtaat caattacggg
181 gtcattagtt catagcccat atatggagtt ccgcgttaca taacttacgg taaatggccc
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361 ccacttggca gtacatcaag tgtatcatat gccaagtccg ccccctattg acgtcaatga
421 cggtaaatgg cccgcctggc attatgccca gtacatgacc ttacgggact ttcctacttg
481 gcagtacatc tacgtattag tcatcgctat taccatggtg atgcggtttt ggcagtacac
541 caatgggcgt ggatagcggt ttgactcacg gggatttcca agtctccacc ccattgacgt
601 caatgggagt ttgttttggc accaaaatca acgggacttt ccaaaatgtc gtaacaactg
661 cgatcgcccg ccccgttgac gcaaatgggc ggtaggcgtg tacggtggga ggtctatata
721 agcagagctc gtttagtgaa ccgtcagatc actagaagct ttattgcggt agtttatcac
781 agttaaattg ctaacgcagt cagtgcttct gacacaacag tctcgaactt aagctgcagt
841 gactctctta aggtagcctt gcagaagttg gtcgtgaggc actgggcagg taagtatcaa
901 ggttacaaga caggtttaag gagaccaata gaaactgggc ttgtcgagac agagaagact
961 cttgcgtttc tgataggcac ctattggtct tactgacatc cactttgcct ttctctccac
1021 aggtgtccac tcccagttca attacagctc ttaaggctag agtacttaat acgactcact
1081 ataggctagc cagcttgaag caagcctcct gaaagatgaa gctactgtct tctatcgaac
1141 aagcatgcga tatttgccga cttaaaaagc tcaagtgctc caaagaaaaa ccgaagtgcg
1201 ccaagtgtct gaagaacaac tgggagtgtc gctactctcc caaaaccaaa aggtctccgc
1261 tgactagggc acatctgaca gaagtggaat caaggctaga aagactggaa cagctatttc
1321 tactgatttt tcctcgagaa gaccttgaca tgattttgaa aatggattct ttacaggata
1381 taaaagcatt gttaacagga ttatttgtac aagataatgt gaataaagat gccgtcacag
1441 atagattggc ttcagtggag actgatatgc ctctaacatt gagacagcat agaataagtg
1501 cgacatcatc atcggaagag agtagtaaca aaggtcaaag acagttgact gtatcgccgg
1561 aattcccggg gatccgtcga cttgacgcgt tgatatcatc tagagcggcc gcaggtacct
1621 gaataactaa ggccgcttcc ctttagtgag ggttaatgct tcgagcagac atgataagat
1681 acattgatga gtttggacaa accacaacta gaatgcagtg aaaaaaatgc tttatttgtg
1741 aaatttgtga tgctattgct ttatttgtaa ccattataag ctgcaataaa caagttaaca
1801 acaacaattg cattcatttt atgtttcagg ttcaggggga gatgtgggag gttttttaaa
1861 gcaagtaaaa cctctacaaa tgtggtaaaa tccgataagg atcgatccgg gctggcgtaa
1921 tagcgaagag gcccgcaccg atcgcccttc ccaacagttg cgcagcctga atggcgaatg
1981 gacgcgccct gtagcggcgc attaagcgcg gcgggtgtgg tggttacgcg cagcgtgacc
2041 gctacacttg ccagcgccct agcgcccgct cctttcgctt tcttcccttc ctttcacgcc
2101 acgttcgccg gctttccccg tcaagctcta aatcgggggc tccctttagg gttccgattt
2161 agtgctttac ggcacctcga ccccaaaaaa cttgattagg gtgatggttc acgtagtggg
2221 ccatcgccct gatagacggt ttttcgccct ttgacgttgg agtccacgtt ctttaatagt
2281 ggactcttgt tccaaactgg aacaacactc aaccctatct cggtctattc ttttgattta
2341 taagggattt tgccgatttc ggcctattgg ttaaaaaatg agctgattta acaaaaattt
2401 aacgcgaatt ttaacaaaat attaacgctt acaatttcct gatgcggtat tttctcctta
2461 cgcatctgtg cggtatttca caccgcatac gcggatcttc cgtaccttct gaggcggaaa
2521 gaaccagctg tggaatgtgt gtcagttagg gtgtggaaag tccccaggct ccccagcagg
2581 cagaagtatg caaagcatgc atctcaatta gtcagcaacc aggtgtggaa agtccccagg
2641 ctccccagca ggcagaagta tgcaaagcat gcatctcaat tagtcagcaa ccatagtccc
2701 gcccctaact ccgcccatcc cgcccctaac tccgcccagt tccgcccatt ctccgcccca
2761 tggctgacta atttttttta tttatgcaga ggccgaggcc gcctcggcct ctgagctatt
2821 ccagaagtag tgaggaggct tttttggagg cctaggcttt tgcaaaaagc ttgattcttc
2881 tgacacaaca gtctcgaact taaggctaga attctggcta caggtaagcg cccctaaaat
2941 ccctttgggc acaatgtgtc ctgaggggag aggcagcgac ctgtagatgg gacgggggca
3001 ctaaccctca ggtttggggc ttctgaatgt gagtatcgcc atgtaagccc agtatttggc
3061 caatctcaga aagctcctgg tccctggagg gatggagaga gaaaaacaaa cagctcctgg
3121 agcagggaga gtgctggcct cttgctctcc ggctccctct gttgccctct ggtttctccc
3181 caggctcccg gacgtcctct agccaccatg acttcgaaag tttatgatcc agaacaaagg
3241 aaacggatga taactggtcc gcagtggtgg gccagatgta aacaaatgaa tgttcttgat
3301 tcatttatta attattatga ttcagaaaaa catgcagaaa atgctgttat ttttttacat
3361 ggtaacgcgg cctcttctta tttatggcga catgttgtgc cacatattga gccagtagcg
3421 cggtgtatta taccagacct tattggtatg ggcaaatcag gcaaatctgg taatggttct
3481 tataggttac ttgatcatta caaatatctt actgcatggt ttgaacttct taatttacca
3541 aagaagatca tttttgtcgg ccatgattgg ggtgcttgtt tggcatttca ttatagctat
3601 gagcatcaag ataagatcaa agcaatagtt cacgctgaaa gtgtagtaga tgtgattgaa
3661 tcatgggatg aatggcctga tattgaagaa gatattgcgt tgatcaaatc tgaagaagga
3721 gaaaaaatgg ttttggagaa taacttcttc gtggaaacca tgttgccatc aaaaatcatg
3781 agaaagttag aaccagaaga atttgcagca tatcttgaac cattcaaaga gaaaggtgaa
3841 gttcgtcgtc caacattatc atggcctcgt gaaatcccgt tagtaaaagg tggtaaacct
3901 gacgttgtac aaattgttag gaattataat gcttatctac gtgcaagtga tgatttacca
3961 aaaatgttta ttgaatcgga cccaggattc ttttccaatg ctattgttga aggtgccaag
4021 aagtttccta atactgaatt tgtcaaagta aaaggtcttc atttttcgca agaagatgca
4081 cctgatgaaa tgggaaaata tatcaaatcg ttcgttgagc gagttctcaa aaatgaacaa
4141 taattctagc cctgaataag tgataataag cggatgaatg gcagaaattc gtcgaagcgc
4201 aataaaatat ctttattttc attacatctg tgtgttggtt ttttgtgtga atcgatagcg
4261 ataaggatcg gaagatccgc gtatggtgca ctctcagtac aatctgctct gatgccgcat
4321 agttaagcca gccccgacac ccgccaacac ccgctgacgc gccctgacgg gcttgtctgc
4381 tcccggcatc cgcttacaga caagctgtga ccgtctccgg gagctgcatg tgtcagaggt
4441 tttcaccgtc atcaccgaaa cgcgcgagac gaaagggcct cgtgatacgc ctatttttat
4501 aggttaatgt catgataata atggtttctt agacgtcagg tggcactttt cggggaaatg
4561 tgcgcggaac ccctatttgt ttatttttct aaatacattc aaatatgtat ccgctcatga
4621 gacaataacc ctgataaatg cttcaataat attgaaaaag gaagagtatg agtattcaac
4681 atttccgtgt cgcccttatt cccttttttg cggcattttg ccttcctgtt tttgctcacc
4741 cagaaacgct ggtgaaagta aaagatgctg aagatcagtt gggtgcacga gtgggttaca
4801 tcgaactgga tctcaacagc ggtaagatcc ttgagagttt tcgccccgaa gaacgttttc
4861 caatgatgag cacttttaaa gttctgctat gtggcgcggt attatcccgt gttgacgccg
4921 ggcaagagca actcggtcgc cgcatacact attctcagaa tgacttggtt gagtactcac
4981 cagtcacaga aaagcatctt acggatggca tgacagtaag agaattatgc agtgctgcca
5041 taaccatgag tgataacact gcggccaact tacttctgac aacgatcgga ggaccgaagg
5101 agctaaccgc ttttttgcac aacatggggg atcatgtaac tcgccttgat cgttgggaac
5161 cggagctgaa tgaagccata ccaaacgacg agcgtgacac cacgatgcct gtagcaatgg
5221 caacaacgtt gcgcaaacta ttaactggcg aactacttac tctagcttcc cggcaacaat
5281 taatagactg gatggaggcg gataaagttg caggaccact tctgcgctcg gcccttccgg
5341 ctggctggtt tattgctgat aaatctggag ccggtgagcg tgggtctcgc ggtatcattg
5401 cagcactggg gccagatggt aagccctccc gtatcgtagt tatctacacg acggggagtc
5461 aggcaactat ggatgaacga aatagacaga tcgctgagat aggtgcctca ctgattaagc
5521 attggtaact gtcagaccaa gtttactcat atatacttta gattgattta aaacttcatt
5581 tttaatttaa aaggatctag gtgaagatcc tttttgataa tctcatgacc aaaatccctt
5641 aacgtgagtt ttcgttccac tgagcgtcag accccgtaga aaagatcaaa ggatcttctt
5701 gagatccttt ttttctgcgc gtaatctgct gcttgcaaac aaaaaaacca ccgctaccag
5761 cggtggtttg tttgccggat caagagctac caactctttt tccgaaggta actggcttca
5821 gcagagcgca gataccaaat actgttcttc tagtgtagcc gtagttaggc caccacttca
5881 agaactctgt agcaccgcct acatacctcg ctctgctaat cctgttacca gtggctgctg
5941 ccagtggcga taagtcgtgt cttaccgggt tggactcaag acgatagtta ccggataagg
6001 cgcagcggtc gggctgaacg gggggttcgt gcacacagcc cagcttggag cgaacgacct
6061 acaccgaact gagataccta cagcgtgagc tatgagaaag cgccacgctt cccgaaggga
6121 gaaaggcgga caggtatccg gtaagcggca gggtcggaac aggagagcgc acgagggagc
6181 ttccaggggg aaacgcctgg tatctttata gtcctgtcgg gtttcgccac ctctgacttg
6241 agcgtcgatt tttgtgatgc tcgtcagggg ggcggagcct atggaaaaac gccagcaacg
6301 cggccttttt acggttcctg gccttttgct ggccttttgc tcacatggct cgacagatct
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P3465/pENTR223-ARMC10人源基因质粒 |
| P3466/pENTR223-MPI(2点突变）人源基因质粒 |
| P3467/pENTR223-HSPA8（1同义突变1点突变）人源基因质粒 |
| P3478/pENTR223-TTC33人源基因质粒 |
| P3479/pENTR223-IGFBP5人源基因质粒 |
| P3480/pENTR223-CTDSP1（1同义突变）人源基因质粒 |
| P3481/pENTR223-PSME3人源基因质粒 |
| P3482/pENTR223-HMOX1（2点突变）人源基因质粒 |
| P3483/pENTR223-HYLS1（1点突变）人源基因质粒 |
| P3484/pENTR223-GLIPR1人源基因质粒 |
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文献和实验相关实验
GENETICS：用于检测哺乳动物细胞中 DNA-蛋白质交联质粒修复的简单、快速的定量分析
该方法的目的是提供灵活，快速和定量的技术来检测哺乳动物细胞系中DNA-蛋白质交联（DPC）修复的动力学。该测定不是全局测定异种生物诱导的或自发的染色体DPC去除的去除，而是检查在质粒DNA底物内的一个位点处特异性引入的均匀的，化学定义的损伤的修复。这种方法避免了放射性物质的使用，并且不依赖昂贵的或高度专业化的技术。相反，它依赖于标准的重组DNA程序和广泛可用的实时定量聚合酶链式反应（qPCR）仪器。考虑到所用策略的固有灵活性，可以改变交联蛋白的大小以及化学连接的性质和连接位点的精确 DNA
表达的调控，单单靠GLA4不知道能不能起到调控蛋白表达的目的？有这方面的文献吗？先谢谢各位大侠的帮助了！！！！ shilei5794749 类似GAL4-UAS系统，楼主可以借鉴这个系统。GLA4可以用pGBKT7或者pBIND上的，做成删除NLS序列的GAL4(BD+AD)或者GAL4BD-VP16。此质粒还可融合你要研究的蛋白，上游可以加调控元件。 另一个质粒用UAS序列打头，后置报告基因就行啦！ 版主dnazyme留言:
1、质粒的概念 质粒（Plasmid）是一种存在于细菌、酵母等微生物细胞中的小型环状双链 DNA 分子，能够独立于宿主染色体进行自我复制，并通常携带对宿主生存非必需但具有特定功能的基因（如抗生素抗性基因）。质粒是分子生物学和基因工程中最重要的工具之一。 质粒根据其用途可以分为多种不同的类型，如用于保存序列信息的克隆质粒（如：pUC 系列质粒），用于表达蛋白的质粒（如哺乳动物细胞表达所用的 pcDNA3.1 系列质粒），用于基因编辑的质粒（如哺乳动物细胞基因编辑所用的 espCas9-2A
pBIND哺乳双杂交质粒
￥100 - 1000
