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- 详细信息
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-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
NM_178642.5
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pEGFP-ANO1-m小鼠基因质粒
别称: NM_178642.5
启动子：CMV
复制子: pUC
质粒大小: 7778bp
质粒标签：C-EGFP
原核抗性: Kan
筛选标记：G418
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Kan
真核抗性：Neo/G418
荧光蛋白：绿色
质粒简介
pEGFP-ANO1-m是一个小鼠ANO1基因的哺乳细胞过表达质粒。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 7778 bp ds-DNA circular SYN 29-SEP-2017
DEFINITION synthetic circular DNA
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 7778)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Sep 29, 2017 from MiaoLingPlasmid
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..7778
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
enhancer 61..364
/label=CMV enhancer
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 365..568
/label=CMV promoter
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
misc_feature 619..624
/label=Kozak
misc_feature 625..3675
/label=Ano1-m
misc_feature 3676..3702
/label=Linker
regulatory 3718..3727
/regulatory_class="other"
/note="vertebrate consensus sequence for strong initiation
of translation (Kozak, 1987)"
CDS 3724..4443
/codon_start=1
/product="enhanced GFP"
/label=EGFP
/note="mammalian codon-optimized"
/translation="MVSKGEELFTGVVPILVELDGDVNGHKFSVSGEGEGDATYGKLTL
KFICTTGKLPVPWPTLVTTLTYGVQCFSRYPDHMKQHDFFKSAMPEGYVQERTIFFKDD
GNYKTRAEVKFEGDTLVNRIELKGIDFKEDGNILGHKLEYNYNSHNVYIMADKQKNGIK
VNFKIRHNIEDGSVQLADHYQQNTPIGDGPVLLPDNHYLSTQSALSKDPNEKRDHMVLL
EFVTAAGITLGMDELYK"
polyA_signal 4566..4687
/label=SV40 poly(A) signal
/note="SV40 polyadenylation signal"
rep_origin complement(4694..5149)
/direction=LEFT
/label=f1 ori
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
promoter 5176..5280
/gene="bla"
/label=AmpR promoter
promoter 5282..5639
/label=SV40 promoter
/note="SV40 enhancer and early promoter"
rep_origin 5490..5625
/label=SV40 ori
/note="SV40 origin of replication"
CDS 5674..6468
/codon_start=1
/gene="aph(3')-II (or nptII)"
/product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
/label=NeoR/KanR
/note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418
(Geneticin(R))"
/translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPAT-CPFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
GLAPAELFARLKASMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
polyA_signal 6700..6747
/label=HSV TK poly(A) signal
/note="herpes simplex virus thymidine kinase
polyadenylation signal (Cole and Stacy, 1985)"
rep_origin 7076..7664
/direction=RIGHT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
ORIGIN
1 tagttattaa tagtaatcaa ttacggggtc attagttcat agcccatata tggagttccg
61 cgttacataa cttacggtaa atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc cccgcccatt
121 gacgtcaata atgacgtatg ttcccatagt aacgccaata gggactttcc attgacgtca
181 atgggtggag tatttacggt aaactgccca cttggcagta catcaagtgt atcatatgcc
241 aagtacgccc cctattgacg tcaatgacgg taaatggccc gcctggcatt atgcccagta
301 catgacctta tgggactttc ctacttggca gtacatctac gtattagtca tcgctattac
361 catggtgatg cggttttggc agtacatcaa tgggcgtgga tagcggtttg actcacgggg
421 atttccaagt ctccacccca ttgacgtcaa tgggagtttg ttttggcacc aaaatcaacg
481 ggactttcca aaatgtcgta acaactccgc cccattgacg caaatgggcg gtaggcgtgt
541 acggtgggag gtctatataa gcagagctgg tttagtgaac cgtcagatcc gctagcgcta
601 ccggactcag atctcgaggc caccatgcag gacgcgcagg acagcgacat cggcctggag
661 ggcttgaccc cagagggaac ctctgcggac cgagagtgcc agcggggacc ggaaacaatc
721 gcgcacgagg cacaggacgc aggaaccccc aactcagacg ccaccggggt tgtggatggg
781 gagcgcgagg ccaccatgag ggtccccgag aagtactcga cgctcccggc ggaggaccgc
841 agcgtccaca tcgtgaacat ctgcgccatc gaggacctgg gctacctgcc gtccgagggc
901 acgttgctga actctctgtc cgtggacccc gacgccgaat gcaagtatgg actatacttc
961 agggatggca aacggaaggt ggactacatc ttggtatacc atcacaagag agcctcaggg
1021 agcaggactc tggccaggag gggactacaa aatgacatgg tcctggggac ccgcagcgtc
1081 aggcaggacc agccccttcc cgggaagggg agccctgtgg atgcaggctc accggaagtc
1141 cccatggatt accatgaaga tgacaaacgc ttcagacggg aggaatatga gggcaacctg
1201 ttggaggcag gcctggagtt ggagaatgac gaggatacca aaatccatgg tgtcgggttt
1261 gtgaagatcc atgcgccctg gcatgtgctc tgtagggaag ctgagttttt gaaactaaag
1321 atgcccacaa agaaggtgta ccacatcagt gagacgcgag gcctcctgaa aaccatcaac
1381 tcggttctgc agaagatcac agaccccatc cagcccaagg tggctgagca caggccacag
1441 accacaaaga ggctctccta tcccttctcc cgggagaagc aacacctatt cgacctgact
1501 gacagggact cttttttcga cagcaaaacc cggagcacaa tagtctatga aatcctgaag
1561 agaacaacgt gcaccaaggc caagtacagc atgggtatca ccagcctcct ggccaatggc
1621 gtatactcag ctgcataccc tctgcacgat ggggactatg agggtgacaa cgttgagttc
1681 aacgacagga aactcctgta tgaggaatgg gcaagttacg gagtcttcta caaataccag
1741 cccattgacc tggtcaggaa atactttggt gagaaggttg gcctgtactt tgcctggctt
1801 ggagcctaca cccagatgct catccctgcc tcgatcgtgg gtgtcattgt ctttctctat
1861 ggatgtgcca ctgtggacga aaacatcccc agtatggaga tgtgtgacca gagatacaac
1921 atcaccatgt gtcctctgtg tgacaagacc tgcagctact ggaagatgag ctcagcctgt
1981 gccacagccc gtgccagtca cctttttgat aaccctgcca ccgtcttctt ctctgtgttt
2041 atggccctct gggctgccac tttcatggag cactggaaac ggaagcagat gaggctcaac
2101 taccgatggg acctcacagg cttcgaggag gaggaggaag ctgtcaagga tcatcccaga
2161 gcagagtatg aagccagagt cttagagaag tcactgagaa aagaatccag aaacaaagag
2221 accgacaagg tgaagctgac ctggagggac cgattcccag cctatttcac caatcttgtc
2281 tccatcatct tcatgatcgc agtgacattt gcaatcgtcc tcggagttat catctataga
2341 atctccacag ctgcagcctt ggccatgaac tcctccccgt ctgtgcggtc caacatccgg
2401 gttacagtca cggccaccgc tgttatcatc aacctcgtgg tcatcattct gctggatgaa
2461 gtttacggct gcattgccag gtggctcacc aagattgagg tcccaaagac agagaagagc
2521 tttgaggaga ggctaacctt caaggccttc ctgctcaagt ttgtgaactc ttacactccc
2581 atcttctatg tcgccttctt caaaggccgg tttgttggtc ggcccggtga ctacgtgtac
2641 atcttccgct ctttccggat ggaggagtgt gccccgggcg gctgcctcat ggagctctgt
2701 atccagctga gcatcattat gctgggcaag cagctaatcc agaacaatct cttcgagatt
2761 ggcatcccga agatgaaaaa gttcatccgc tacctgaagc tgcgcagaca gagcccctca
2821 gaccgtgaag agtacgtgaa gcggaagcag cgctatgagg tggacttcaa cctcgaacct
2881 ttcgccggcc tcacgcccga gtacatggaa atgatcattc agttcggctt tgtcaccctg
2941 tttgttgcgt ccttccctct ggctccactc ttcgccctgc taaacaacat cattgagatc
3001 cgcctggatg ccaaaaagtt tgtcaccgag ctacggaggc cagtagccat cagagccaaa
3061 gacatcggca tctggtataa catcctcaga ggtgttggga agctggctgt catcattaat
3121 gcctttgtga tctccttcac gtctgacttc atccctcgcc tggtgtacct ctacatgtac
3181 agtcagaatg ggaccatgca cggcttcgtc aatcacacgc tctcttcctt caatgtcagc
3241 gacttccaga atggcacagc acccaatgac ccactggacc tgggctatga ggttcagatc
3301 tgcaggtata aagattaccg ggaaccccca tggtcagaac acaagtatga catctccaaa
3361 gacttctggg ctgtcctggc cgcccgactg gcatttgtca ttgtcttcca gaacctggtg
3421 atgttcatga gtgactttgt ggactgggtg atccctgata tccccaaaga catcagccag
3481 cagatccaca aagagaaggt tctcatggtg gagctgttta tgcgtgagga gcagggcaag
3541 cagcagctac tggacacatg gatggagaag gagaagccaa gggatgtgcc ttgtaacaac
3601 cacagcccca caacccaccc agaggcaggc gacggcagcc cagtccccag ctacgagtac
3661 catggggacg cgctgggtgg tggatcaggt ggtggaggat ctcgggatcc accggtcgcc
3721 accatggtga gcaagggcga ggagctgttc accggggtgg tgcccatcct ggtcgagctg
3781 gacggcgacg taaacggcca caagttcagc gtgtccggcg agggcgaggg cgatgccacc
3841 tacggcaagc tgaccctgaa gttcatctgc accaccggca agctgcccgt gccctggccc
3901 accctcgtga ccaccctgac ctacggcgtg cagtgcttca gccgctaccc cgaccacatg
3961 aagcagcacg acttcttcaa gtccgccatg cccgaaggct acgtccagga gcgcaccatc
4021 ttcttcaagg acgacggcaa ctacaagacc cgcgccgagg tgaagttcga gggcgacacc
4081 ctggtgaacc gcatcgagct gaagggcatc gacttcaagg aggacggcaa catcctgggg
4141 cacaagctgg agtacaacta caacagccac aacgtctata tcatggccga caagcagaag
4201 aacggcatca aggtgaactt caagatccgc cacaacatcg aggacggcag cgtgcagctc
4261 gccgaccact accagcagaa cacccccatc ggcgacggcc ccgtgctgct gcccgacaac
4321 cactacctga gcacccagtc cgccctgagc aaagacccca acgagaagcg cgatcacatg
4381 gtcctgctgg agttcgtgac cgccgccggg atcactctcg gcatggacga gctgtacaag
4441 taaagcggcc gcgactctag atcataatca gccataccac atttgtagag gttttacttg
4501 ctttaaaaaa cctcccacac ctccccctga acctgaaaca taaaatgaat gcaattgttg
4561 ttgttaactt gtttattgca gcttataatg gttacaaata aagcaatagc atcacaaatt
4621 tcacaaataa agcatttttt tcactgcatt ctagttgtgg tttgtccaaa ctcatcaatg
4681 tatcttaagg cgtaaattgt aagcgttaat attttgttaa aattcgcgtt aaatttttgt
4741 taaatcagct cattttttaa ccaataggcc gaaatcggca aaatccctta taaatcaaaa
4801 gaatagaccg agatagggtt gagtgttgtt ccagtttgga acaagagtcc actattaaag
4861 aacgtggact ccaacgtcaa agggcgaaaa accgtctatc agggcgatgg cccactacgt
4921 gaaccatcac cctaatcaag ttttttgggg tcgaggtgcc gtaaagcact aaatcggaac
4981 cctaaaggga gcccccgatt tagagcttga cggggaaagc cggcgaacgt ggcgagaaag
5041 gaagggaaga aagcgaaagg agcgggcgct agggcgctgg caagtgtagc ggtcacgctg
5101 cgcgtaacca ccacacccgc cgcgcttaat gcgccgctac agggcgcgtc aggtggcact
5161 tttcggggaa atgtgcgcgg aacccctatt tgtttatttt tctaaataca ttcaaatatg
5221 tatccgctca tgagacaata accctgataa atgcttcaat aatattgaaa aaggaagagt
5281 cctgaggcgg aaagaaccag ctgtggaatg tgtgtcagtt agggtgtgga aagtccccag
5341 gctccccagc aggcagaagt atgcaaagca tgcatctcaa ttagtcagca accaggtgtg
5401 gaaagtcccc aggctcccca gcaggcagaa gtatgcaaag catgcatctc aattagtcag
5461 caaccatagt cccgccccta actccgccca tcccgcccct aactccgccc agttccgccc
5521 attctccgcc ccatggctga ctaatttttt ttatttatgc agaggccgag gccgcctcgg
5581 cctctgagct attccagaag tagtgaggag gcttttttgg aggcctaggc ttttgcaaag
5641 atcgatcaag agacaggatg aggatcgttt cgcatgattg aacaagatgg attgcacgca
5701 ggttctccgg ccgcttgggt ggagaggcta ttcggctatg actgggcaca acagacaatc
5761 ggctgctctg atgccgccgt gttccggctg tcagcgcagg ggcgcccggt tctttttgtc
5821 aagaccgacc tgtccggtgc cctgaatgaa ctgcaagacg aggcagcgcg gctatcgtgg
5881 ctggccacga cgggcgttcc ttgcgcagct gtgctcgacg ttgtcactga agcgggaagg
5941 gactggctgc tattgggcga agtgccgggg caggatctcc tgtcatctca ccttgctcct
6001 gccgagaaag tatccatcat ggctgatgca atgcggcggc tgcatacgct tgatccggct
6061 acctgcccat tcgaccacca agcgaaacat cgcatcgagc gagcacgtac tcggatggaa
6121 gccggtcttg tcgatcagga tgatctggac gaagagcatc aggggctcgc gccagccgaa
6181 ctgttcgcca ggctcaaggc gagcatgccc gacggcgagg atctcgtcgt gacccatggc
6241 gatgcctgct tgccgaatat catggtggaa aatggccgct tttctggatt catcgactgt
6301 ggccggctgg gtgtggcgga ccgctatcag gacatagcgt tggctacccg tgatattgct
6361 gaagagcttg gcggcgaatg ggctgaccgc ttcctcgtgc tttacggtat cgccgctccc
6421 gattcgcagc gcatcgcctt ctatcgcctt cttgacgagt tcttctgagc gggactctgg
6481 ggttcgaaat gaccgaccaa gcgacgccca acctgccatc acgagatttc gattccaccg
6541 ccgccttcta tgaaaggttg ggcttcggaa tcgttttccg ggacgccggc tggatgatcc
6601 tccagcgcgg ggatctcatg ctggagttct tcgcccaccc tagggggagg ctaactgaaa
6661 cacggaagga gacaataccg gaaggaaccc gcgctatgac ggcaataaaa agacagaata
6721 aaacgcacgg tgttgggtcg tttgttcata aacgcggggt tcggtcccag ggctggcact
6781 ctgtcgatac cccaccgaga ccccattggg gccaatacgc ccgcgtttct tccttttccc
6841 caccccaccc cccaagttcg ggtgaaggcc cagggctcgc agccaacgtc ggggcggcag
6901 gccctgccat agcctcaggt tactcatata tactttagat tgatttaaaa cttcattttt
6961 aatttaaaag gatctaggtg aagatccttt ttgataatct catgaccaaa atcccttaac
7021 gtgagttttc gttccactga gcgtcagacc ccgtagaaaa gatcaaagga tcttcttgag
7081 atcctttttt tctgcgcgta atctgctgct tgcaaacaaa aaaaccaccg ctaccagcgg
7141 tggtttgttt gccggatcaa gagctaccaa ctctttttcc gaaggtaact ggcttcagca
7201 gagcgcagat accaaatact gtccttctag tgtagccgta gttaggccac cacttcaaga
7261 actctgtagc accgcctaca tacctcgctc tgctaatcct gttaccagtg gctgctgcca
7321 gtggcgataa gtcgtgtctt accgggttgg actcaagacg atagttaccg gataaggcgc
7381 agcggtcggg ctgaacgggg ggttcgtgca cacagcccag cttggagcga acgacctaca
7441 ccgaactgag atacctacag cgtgagctat gagaaagcgc cacgcttccc gaagggagaa
7501 aggcggacag gtatccggta agcggcaggg tcggaacagg agagcgcacg agggagcttc
7561 cagggggaaa cgcctggtat ctttatagtc ctgtcgggtt tcgccacctc tgacttgagc
7621 gtcgattttt gtgatgctcg tcaggggggc ggagcctatg gaaaaacgcc agcaacgcgg
7681 cctttttacg gttcctggcc ttttgctggc cttttgctca catgttcttt cctgcgttat
7741 cccctgattc tgtggataac cgtattaccg ccatgcat
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pEGFP-ANO1-m小鼠基因质粒
别称: NM_178642.5
启动子：CMV
复制子: pUC
质粒大小: 7778bp
质粒标签：C-EGFP
原核抗性: Kan
筛选标记：G418
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Kan
真核抗性：Neo/G418
荧光蛋白：绿色
质粒简介
pEGFP-ANO1-m是一个小鼠ANO1基因的哺乳细胞过表达质粒。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 7778 bp ds-DNA circular SYN 29-SEP-2017
DEFINITION synthetic circular DNA
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 7778)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Sep 29, 2017 from MiaoLingPlasmid
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..7778
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
enhancer 61..364
/label=CMV enhancer
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 365..568
/label=CMV promoter
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
misc_feature 619..624
/label=Kozak
misc_feature 625..3675
/label=Ano1-m
misc_feature 3676..3702
/label=Linker
regulatory 3718..3727
/regulatory_class="other"
/note="vertebrate consensus sequence for strong initiation
of translation (Kozak, 1987)"
CDS 3724..4443
/codon_start=1
/product="enhanced GFP"
/label=EGFP
/note="mammalian codon-optimized"
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KFICTTGKLPVPWPTLVTTLTYGVQCFSRYPDHMKQHDFFKSAMPEGYVQERTIFFKDD
GNYKTRAEVKFEGDTLVNRIELKGIDFKEDGNILGHKLEYNYNSHNVYIMADKQKNGIK
VNFKIRHNIEDGSVQLADHYQQNTPIGDGPVLLPDNHYLSTQSALSKDPNEKRDHMVLL
EFVTAAGITLGMDELYK"
polyA_signal 4566..4687
/label=SV40 poly(A) signal
/note="SV40 polyadenylation signal"
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/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
promoter 5176..5280
/gene="bla"
/label=AmpR promoter
promoter 5282..5639
/label=SV40 promoter
/note="SV40 enhancer and early promoter"
rep_origin 5490..5625
/label=SV40 ori
/note="SV40 origin of replication"
CDS 5674..6468
/codon_start=1
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/label=NeoR/KanR
/note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418
(Geneticin(R))"
/translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPAT-CPFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
GLAPAELFARLKASMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
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rep_origin 7076..7664
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replication"
ORIGIN
1 tagttattaa tagtaatcaa ttacggggtc attagttcat agcccatata tggagttccg
61 cgttacataa cttacggtaa atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc cccgcccatt
121 gacgtcaata atgacgtatg ttcccatagt aacgccaata gggactttcc attgacgtca
181 atgggtggag tatttacggt aaactgccca cttggcagta catcaagtgt atcatatgcc
241 aagtacgccc cctattgacg tcaatgacgg taaatggccc gcctggcatt atgcccagta
301 catgacctta tgggactttc ctacttggca gtacatctac gtattagtca tcgctattac
361 catggtgatg cggttttggc agtacatcaa tgggcgtgga tagcggtttg actcacgggg
421 atttccaagt ctccacccca ttgacgtcaa tgggagtttg ttttggcacc aaaatcaacg
481 ggactttcca aaatgtcgta acaactccgc cccattgacg caaatgggcg gtaggcgtgt
541 acggtgggag gtctatataa gcagagctgg tttagtgaac cgtcagatcc gctagcgcta
601 ccggactcag atctcgaggc caccatgcag gacgcgcagg acagcgacat cggcctggag
661 ggcttgaccc cagagggaac ctctgcggac cgagagtgcc agcggggacc ggaaacaatc
721 gcgcacgagg cacaggacgc aggaaccccc aactcagacg ccaccggggt tgtggatggg
781 gagcgcgagg ccaccatgag ggtccccgag aagtactcga cgctcccggc ggaggaccgc
841 agcgtccaca tcgtgaacat ctgcgccatc gaggacctgg gctacctgcc gtccgagggc
901 acgttgctga actctctgtc cgtggacccc gacgccgaat gcaagtatgg actatacttc
961 agggatggca aacggaaggt ggactacatc ttggtatacc atcacaagag agcctcaggg
1021 agcaggactc tggccaggag gggactacaa aatgacatgg tcctggggac ccgcagcgtc
1081 aggcaggacc agccccttcc cgggaagggg agccctgtgg atgcaggctc accggaagtc
1141 cccatggatt accatgaaga tgacaaacgc ttcagacggg aggaatatga gggcaacctg
1201 ttggaggcag gcctggagtt ggagaatgac gaggatacca aaatccatgg tgtcgggttt
1261 gtgaagatcc atgcgccctg gcatgtgctc tgtagggaag ctgagttttt gaaactaaag
1321 atgcccacaa agaaggtgta ccacatcagt gagacgcgag gcctcctgaa aaccatcaac
1381 tcggttctgc agaagatcac agaccccatc cagcccaagg tggctgagca caggccacag
1441 accacaaaga ggctctccta tcccttctcc cgggagaagc aacacctatt cgacctgact
1501 gacagggact cttttttcga cagcaaaacc cggagcacaa tagtctatga aatcctgaag
1561 agaacaacgt gcaccaaggc caagtacagc atgggtatca ccagcctcct ggccaatggc
1621 gtatactcag ctgcataccc tctgcacgat ggggactatg agggtgacaa cgttgagttc
1681 aacgacagga aactcctgta tgaggaatgg gcaagttacg gagtcttcta caaataccag
1741 cccattgacc tggtcaggaa atactttggt gagaaggttg gcctgtactt tgcctggctt
1801 ggagcctaca cccagatgct catccctgcc tcgatcgtgg gtgtcattgt ctttctctat
1861 ggatgtgcca ctgtggacga aaacatcccc agtatggaga tgtgtgacca gagatacaac
1921 atcaccatgt gtcctctgtg tgacaagacc tgcagctact ggaagatgag ctcagcctgt
1981 gccacagccc gtgccagtca cctttttgat aaccctgcca ccgtcttctt ctctgtgttt
2041 atggccctct gggctgccac tttcatggag cactggaaac ggaagcagat gaggctcaac
2101 taccgatggg acctcacagg cttcgaggag gaggaggaag ctgtcaagga tcatcccaga
2161 gcagagtatg aagccagagt cttagagaag tcactgagaa aagaatccag aaacaaagag
2221 accgacaagg tgaagctgac ctggagggac cgattcccag cctatttcac caatcttgtc
2281 tccatcatct tcatgatcgc agtgacattt gcaatcgtcc tcggagttat catctataga
2341 atctccacag ctgcagcctt ggccatgaac tcctccccgt ctgtgcggtc caacatccgg
2401 gttacagtca cggccaccgc tgttatcatc aacctcgtgg tcatcattct gctggatgaa
2461 gtttacggct gcattgccag gtggctcacc aagattgagg tcccaaagac agagaagagc
2521 tttgaggaga ggctaacctt caaggccttc ctgctcaagt ttgtgaactc ttacactccc
2581 atcttctatg tcgccttctt caaaggccgg tttgttggtc ggcccggtga ctacgtgtac
2641 atcttccgct ctttccggat ggaggagtgt gccccgggcg gctgcctcat ggagctctgt
2701 atccagctga gcatcattat gctgggcaag cagctaatcc agaacaatct cttcgagatt
2761 ggcatcccga agatgaaaaa gttcatccgc tacctgaagc tgcgcagaca gagcccctca
2821 gaccgtgaag agtacgtgaa gcggaagcag cgctatgagg tggacttcaa cctcgaacct
2881 ttcgccggcc tcacgcccga gtacatggaa atgatcattc agttcggctt tgtcaccctg
2941 tttgttgcgt ccttccctct ggctccactc ttcgccctgc taaacaacat cattgagatc
3001 cgcctggatg ccaaaaagtt tgtcaccgag ctacggaggc cagtagccat cagagccaaa
3061 gacatcggca tctggtataa catcctcaga ggtgttggga agctggctgt catcattaat
3121 gcctttgtga tctccttcac gtctgacttc atccctcgcc tggtgtacct ctacatgtac
3181 agtcagaatg ggaccatgca cggcttcgtc aatcacacgc tctcttcctt caatgtcagc
3241 gacttccaga atggcacagc acccaatgac ccactggacc tgggctatga ggttcagatc
3301 tgcaggtata aagattaccg ggaaccccca tggtcagaac acaagtatga catctccaaa
3361 gacttctggg ctgtcctggc cgcccgactg gcatttgtca ttgtcttcca gaacctggtg
3421 atgttcatga gtgactttgt ggactgggtg atccctgata tccccaaaga catcagccag
3481 cagatccaca aagagaaggt tctcatggtg gagctgttta tgcgtgagga gcagggcaag
3541 cagcagctac tggacacatg gatggagaag gagaagccaa gggatgtgcc ttgtaacaac
3601 cacagcccca caacccaccc agaggcaggc gacggcagcc cagtccccag ctacgagtac
3661 catggggacg cgctgggtgg tggatcaggt ggtggaggat ctcgggatcc accggtcgcc
3721 accatggtga gcaagggcga ggagctgttc accggggtgg tgcccatcct ggtcgagctg
3781 gacggcgacg taaacggcca caagttcagc gtgtccggcg agggcgaggg cgatgccacc
3841 tacggcaagc tgaccctgaa gttcatctgc accaccggca agctgcccgt gccctggccc
3901 accctcgtga ccaccctgac ctacggcgtg cagtgcttca gccgctaccc cgaccacatg
3961 aagcagcacg acttcttcaa gtccgccatg cccgaaggct acgtccagga gcgcaccatc
4021 ttcttcaagg acgacggcaa ctacaagacc cgcgccgagg tgaagttcga gggcgacacc
4081 ctggtgaacc gcatcgagct gaagggcatc gacttcaagg aggacggcaa catcctgggg
4141 cacaagctgg agtacaacta caacagccac aacgtctata tcatggccga caagcagaag
4201 aacggcatca aggtgaactt caagatccgc cacaacatcg aggacggcag cgtgcagctc
4261 gccgaccact accagcagaa cacccccatc ggcgacggcc ccgtgctgct gcccgacaac
4321 cactacctga gcacccagtc cgccctgagc aaagacccca acgagaagcg cgatcacatg
4381 gtcctgctgg agttcgtgac cgccgccggg atcactctcg gcatggacga gctgtacaag
4441 taaagcggcc gcgactctag atcataatca gccataccac atttgtagag gttttacttg
4501 ctttaaaaaa cctcccacac ctccccctga acctgaaaca taaaatgaat gcaattgttg
4561 ttgttaactt gtttattgca gcttataatg gttacaaata aagcaatagc atcacaaatt
4621 tcacaaataa agcatttttt tcactgcatt ctagttgtgg tttgtccaaa ctcatcaatg
4681 tatcttaagg cgtaaattgt aagcgttaat attttgttaa aattcgcgtt aaatttttgt
4741 taaatcagct cattttttaa ccaataggcc gaaatcggca aaatccctta taaatcaaaa
4801 gaatagaccg agatagggtt gagtgttgtt ccagtttgga acaagagtcc actattaaag
4861 aacgtggact ccaacgtcaa agggcgaaaa accgtctatc agggcgatgg cccactacgt
4921 gaaccatcac cctaatcaag ttttttgggg tcgaggtgcc gtaaagcact aaatcggaac
4981 cctaaaggga gcccccgatt tagagcttga cggggaaagc cggcgaacgt ggcgagaaag
5041 gaagggaaga aagcgaaagg agcgggcgct agggcgctgg caagtgtagc ggtcacgctg
5101 cgcgtaacca ccacacccgc cgcgcttaat gcgccgctac agggcgcgtc aggtggcact
5161 tttcggggaa atgtgcgcgg aacccctatt tgtttatttt tctaaataca ttcaaatatg
5221 tatccgctca tgagacaata accctgataa atgcttcaat aatattgaaa aaggaagagt
5281 cctgaggcgg aaagaaccag ctgtggaatg tgtgtcagtt agggtgtgga aagtccccag
5341 gctccccagc aggcagaagt atgcaaagca tgcatctcaa ttagtcagca accaggtgtg
5401 gaaagtcccc aggctcccca gcaggcagaa gtatgcaaag catgcatctc aattagtcag
5461 caaccatagt cccgccccta actccgccca tcccgcccct aactccgccc agttccgccc
5521 attctccgcc ccatggctga ctaatttttt ttatttatgc agaggccgag gccgcctcgg
5581 cctctgagct attccagaag tagtgaggag gcttttttgg aggcctaggc ttttgcaaag
5641 atcgatcaag agacaggatg aggatcgttt cgcatgattg aacaagatgg attgcacgca
5701 ggttctccgg ccgcttgggt ggagaggcta ttcggctatg actgggcaca acagacaatc
5761 ggctgctctg atgccgccgt gttccggctg tcagcgcagg ggcgcccggt tctttttgtc
5821 aagaccgacc tgtccggtgc cctgaatgaa ctgcaagacg aggcagcgcg gctatcgtgg
5881 ctggccacga cgggcgttcc ttgcgcagct gtgctcgacg ttgtcactga agcgggaagg
5941 gactggctgc tattgggcga agtgccgggg caggatctcc tgtcatctca ccttgctcct
6001 gccgagaaag tatccatcat ggctgatgca atgcggcggc tgcatacgct tgatccggct
6061 acctgcccat tcgaccacca agcgaaacat cgcatcgagc gagcacgtac tcggatggaa
6121 gccggtcttg tcgatcagga tgatctggac gaagagcatc aggggctcgc gccagccgaa
6181 ctgttcgcca ggctcaaggc gagcatgccc gacggcgagg atctcgtcgt gacccatggc
6241 gatgcctgct tgccgaatat catggtggaa aatggccgct tttctggatt catcgactgt
6301 ggccggctgg gtgtggcgga ccgctatcag gacatagcgt tggctacccg tgatattgct
6361 gaagagcttg gcggcgaatg ggctgaccgc ttcctcgtgc tttacggtat cgccgctccc
6421 gattcgcagc gcatcgcctt ctatcgcctt cttgacgagt tcttctgagc gggactctgg
6481 ggttcgaaat gaccgaccaa gcgacgccca acctgccatc acgagatttc gattccaccg
6541 ccgccttcta tgaaaggttg ggcttcggaa tcgttttccg ggacgccggc tggatgatcc
6601 tccagcgcgg ggatctcatg ctggagttct tcgcccaccc tagggggagg ctaactgaaa
6661 cacggaagga gacaataccg gaaggaaccc gcgctatgac ggcaataaaa agacagaata
6721 aaacgcacgg tgttgggtcg tttgttcata aacgcggggt tcggtcccag ggctggcact
6781 ctgtcgatac cccaccgaga ccccattggg gccaatacgc ccgcgtttct tccttttccc
6841 caccccaccc cccaagttcg ggtgaaggcc cagggctcgc agccaacgtc ggggcggcag
6901 gccctgccat agcctcaggt tactcatata tactttagat tgatttaaaa cttcattttt
6961 aatttaaaag gatctaggtg aagatccttt ttgataatct catgaccaaa atcccttaac
7021 gtgagttttc gttccactga gcgtcagacc ccgtagaaaa gatcaaagga tcttcttgag
7081 atcctttttt tctgcgcgta atctgctgct tgcaaacaaa aaaaccaccg ctaccagcgg
7141 tggtttgttt gccggatcaa gagctaccaa ctctttttcc gaaggtaact ggcttcagca
7201 gagcgcagat accaaatact gtccttctag tgtagccgta gttaggccac cacttcaaga
7261 actctgtagc accgcctaca tacctcgctc tgctaatcct gttaccagtg gctgctgcca
7321 gtggcgataa gtcgtgtctt accgggttgg actcaagacg atagttaccg gataaggcgc
7381 agcggtcggg ctgaacgggg ggttcgtgca cacagcccag cttggagcga acgacctaca
7441 ccgaactgag atacctacag cgtgagctat gagaaagcgc cacgcttccc gaagggagaa
7501 aggcggacag gtatccggta agcggcaggg tcggaacagg agagcgcacg agggagcttc
7561 cagggggaaa cgcctggtat ctttatagtc ctgtcgggtt tcgccacctc tgacttgagc
7621 gtcgattttt gtgatgctcg tcaggggggc ggagcctatg gaaaaacgcc agcaacgcgg
7681 cctttttacg gttcctggcc ttttgctggc cttttgctca catgttcttt cctgcgttat
7741 cccctgattc tgtggataac cgtattaccg ccatgcat
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P0640/pEGFP-CXCL1人源基因质粒 |
| P0641/pEGFP-TGFB1人源基因质粒 |
| P0613/pEGFP-MD2①人源基因质粒 |
| P0614/pEGFP-MD2②人源基因质粒 |
| P0615/pEGFP-IFITM3人源基因质粒 |
| P0633/pEGFP-IL17A人源基因质粒 |
| P0634/pEGFP-MMP9（2同义突变）人源基因质粒 |
| P0635/pEGFP-Timp1人源基因质粒 |
| P0577/pEGFP-IL1A人源基因质粒 |
| P0578/pEGFP-IL12B人源基因质粒 |
| P0579/pEGFP-FAK人源基因质粒 |
| P0580/pEGFP-ICAM1人源基因质粒 |
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文献和实验相关实验
，并且 EST12-RACK1 诱导的细胞焦亡在 M.tb 诱导的免疫中起关键作用。 研究内容： 1、RD 区编码蛋白筛选：对 40 种 RD 区（RD1-3、11-14）重组蛋白进行筛选（巨噬细胞焦磷酸相关蛋白），通过 LDH 释放实验细胞毒性分析，发现 EST12 对巨噬细胞有显著焦解作用。 2、菌株构建：构建 M. tb H37Rv ΔEST12（Rv1579c 敲除菌株）、BCG-EST12（Rv1579c 过表达菌株）、M. smeg–EST12（Rv1579c 过表达菌株）。 3、小鼠基因
，Chl pTALEN_v2 (NN) 基因敲除质粒 Amp，Chl pTALEN_v2 (ND) 基因敲除质粒 Amp，Chl pEGFP-1 哺乳细胞质粒 Kan 真核表达载体,表达
工作设计的一套台式工作站。一次处理10张芯片，采用接触式点样技术，使用标准的CHipMaker或Stealth点样针，可放置1块96/384孔样品板，并配有一套载片真空固定系统和一套针头清洗真空干燥系统。价格低廉，非常适合经费紧缺的研究部门做芯片应用的中小型研究项目使用。 对于中型到大型的用户则可以选择美国Cartesian Technology公司PA系列、SQ系列生物芯片点样制作系统。这家公司在芯片技术刚出现时就致力于开发能将生物芯片变为现实的点样制作系统，并得到生物芯片技术的开创者M
pEGFP-ANO1-m小鼠基因质粒
￥100 - 1000
