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- 详细信息
- 文献和实验
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- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pCDNA3.1-EGFP-2
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pCDNA3.1-EGFP②哺乳荧光质粒
别称: pCDNA3.1-EGFP-2
质粒属性
质粒简介
pCDNA3.1-EGFP②是一个哺乳细胞绿色荧光表达质粒，
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 6095 bp ds-DNA circular SYN 08-DEC-2017
DEFINITION synthetic circular DNA
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..6095
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
enhancer 202..581
/label=CMV enhancer
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 582..785
/label=CMV promoter
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
promoter 830..848
/label=T7 promoter
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
CDS 902..1618
/codon_start=1
/product="enhanced GFP"
/label=EGFP
/note="mammalian codon-optimized"
/translation="MVSKGEELFTGVVPILVELDGDVNGHKFSVSGEGEGDATYGKLTL
KFICTTGKLPVPWPTLVTTLTYGVQCFSRYPDHMKQHDFFKSAMPEGYVQERTIFFKDD
GNYKTRAEVKFEGDTLVNRIELKGIDFKEDGNILGHKLEYNYNSHNVYIMADKQKNGIK
VNFKIRHNIEDGSVQLADHYQQNTPIGDGPVLLPDNHYLSTQSALSKDPNEKRDHMVLL
EFVTAAGITLGMDELYK"
polyA_signal 1662..1886
/label=bGH poly(A) signal
/note="bovine growth hormone polyadenylation signal"
rep_origin 1932..2360
/direction=RIGHT
/label=f1 ori
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
promoter 2374..2703
/label=SV40 promoter
/note="SV40 enhancer and early promoter"
rep_origin 2554..2689
/label=SV40 ori
/note="SV40 origin of replication"
CDS 2770..3564
/codon_start=1
/gene="aph(3')-II (or nptII)"
/product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
/label=NeoR/KanR
/note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418
(Geneticin(R))"
/translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPATC-PFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
GLAPAELFARLKARMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
polyA_signal 3738..3859
/label=SV40 poly(A) signal
/note="SV40 polyadenylation signal"
protein_bind 3932..3948
/label=lac operator
/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
promoter complement(3956..3986)
/label=lac promoter
/note="promoter for the E. coli lac operon"
protein_bind 4001..4022
/label=CAP binding site
/bound_moiety="E. coli catabolite activator protein"
/note="CAP binding activates transcription in the presence
of cAMP."
rep_origin complement(4310..4895)
/direction=LEFT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(5066..5926)
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/label=AmpR
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
promoter complement(5927..6031)
/gene="bla"
/label=AmpR promoter
ORIGIN
1 gcactctcag tacaatctgc tctgatgccg catagttaag ccagtatctg ctccctgctt
61 gtgtgttgga ggtcgctgag tagtgcgcga gcaaaattta agctacaaca aggcaaggct
121 tgaccgacaa ttgcatgaag aatctgctta gggttaggcg ttttgcgctg cttcgcgatg
181 tacgggccag atatacgcgt tgacattgat tattgactag ttattaatag taatcaatta
241 cggggtcatt agttcatagc ccatatatgg agttccgcgt tacataactt acggtaaatg
301 gcccgcctgg ctgaccgccc aacgaccccc gcccattgac gtcaataatg acgtatgttc
361 ccatagtaac gccaataggg actttccatt gacgtcaatg ggtggagtat ttacggtaaa
421 ctgcccactt ggcagtacat caagtgtatc atatgccaag tacgccccct attgacgtca
481 atgacggtaa atggcccgcc tggcattatg cccagtacat gaccttatgg gactttccta
541 cttggcagta catctacgta ttagtcatcg ctattaccat ggtgatgcgg ttttggcagt
601 acatcaatgg gcgtggatag cggtttgact cacggggatt tccaagtctc caccccattg
661 acgtcaatgg gagtttgttt tggcaccaaa atcaacggga ctttccaaaa tgtcgtaaca
721 actccgcccc attgacgcaa atgggcggta ggcgtgtacg gtgggaggtc tatataagca
781 gagctctctg gctaactaga gaacccactg cttactggct tatcgaaatt aatacgactc
841 actataggga gacccaagct ggctagcgtt taaacttaag cttggtaccg agctcggatc
901 catggtgagc aagggcgagg agctgttcac cggggtggtg cccatcctgg tcgagctgga
961 cggcgacgta aacggccaca agttcagcgt gtccggcgag ggcgagggcg atgccaccta
1021 cggcaagctg accctgaagt tcatctgcac caccggcaag ctgcccgtgc cctggcccac
1081 cctcgtgacc accctgacct acggcgtgca gtgcttcagc cgctaccccg accacatgaa
1141 gcagcacgac ttcttcaagt ccgccatgcc cgaaggctac gtccaggagc gcaccatctt
1201 cttcaaggac gacggcaact acaagacccg cgccgaggtg aagttcgagg gcgacaccct
1261 ggtgaaccgc atcgagctga agggcatcga cttcaaggag gacggcaaca tcctggggca
1321 caagctggag tacaactaca acagccacaa cgtctatatc atggccgaca agcagaagaa
1381 cggcatcaag gtgaacttca agatccgcca caacatcgag gacggcagcg tgcagctcgc
1441 cgaccactac cagcagaaca cccccatcgg cgacggcccc gtgctgctgc ccgacaacca
1501 ctacctgagc acccagtccg ccctgagcaa agaccccaac gagaagcgcg atcacatggt
1561 cctgctggag ttcgtgaccg ccgccgggat cactctcggc atggacgagc tgtacaagct
1621 cgagtctaga gggcccgttt aaacccgctg atcagcctcg actgtgcctt ctagttgcca
1681 gccatctgtt gtttgcccct cccccgtgcc ttccttgacc ctggaaggtg ccactcccac
1741 tgtcctttcc taataaaatg aggaaattgc atcgcattgt ctgagtaggt gtcattctat
1801 tctggggggt ggggtggggc aggacagcaa gggggaggat tgggaagaca atagcaggca
1861 tgctggggat gcggtgggct ctatggcttc tgaggcggaa agaaccagct ggggctctag
1921 ggggtatccc cacgcgccct gtagcggcgc attaagcgcg gcgggtgtgg tggttacgcg
1981 cagcgtgacc gctacacttg ccagcgccct agcgcccgct cctttcgctt tcttcccttc
2041 ctttctcgcc acgttcgccg gctttccccg tcaagctcta aatcgggggc tccctttagg
2101 gttccgattt agtgctttac ggcacctcga ccccaaaaaa cttgattagg gtgatggttc
2161 acgtagtggg ccatcgccct gatagacggt ttttcgccct ttgacgttgg agtccacgtt
2221 ctttaatagt ggactcttgt tccaaactgg aacaacactc aaccctatct cggtctattc
2281 ttttgattta taagggattt tgccgatttc ggcctattgg ttaaaaaatg agctgattta
2341 acaaaaattt aacgcgaatt aattctgtgg aatgtgtgtc agttagggtg tggaaagtcc
2401 ccaggctccc cagcaggcag aagtatgcaa agcatgcatc tcaattagtc agcaaccagg
2461 tgtggaaagt ccccaggctc cccagcaggc agaagtatgc aaagcatgca tctcaattag
2521 tcagcaacca tagtcccgcc cctaactccg cccatcccgc ccctaactcc gcccagttcc
2581 gcccattctc cgccccatgg ctgactaatt ttttttattt atgcagaggc cgaggccgcc
2641 tctgcctctg agctattcca gaagtagtga ggaggctttt ttggaggcct aggcttttgc
2701 aaaaagctcc cgggagcttg tatatccatt ttcggatctg atcaagagac aggatgagga
2761 tcgtttcgca tgattgaaca agatggattg cacgcaggtt ctccggccgc ttgggtggag
2821 aggctattcg gctatgactg ggcacaacag acaatcggct gctctgatgc cgccgtgttc
2881 cggctgtcag cgcaggggcg cccggttctt tttgtcaaga ccgacctgtc cggtgccctg
2941 aatgaactgc aggacgaggc agcgcggcta tcgtggctgg ccacgacggg cgttccttgc
3001 gcagctgtgc tcgacgttgt cactgaagcg ggaagggact ggctgctatt gggcgaagtg
3061 ccggggcagg atctcctgtc atctcacctt gctcctgccg agaaagtatc catcatggct
3121 gatgcaatgc ggcggctgca tacgcttgat ccggctacct gcccattcga ccaccaagcg
3181 aaacatcgca tcgagcgagc acgtactcgg atggaagccg gtcttgtcga tcaggatgat
3241 ctggacgaag agcatcaggg gctcgcgcca gccgaactgt tcgccaggct caaggcgcgc
3301 atgcccgacg gcgaggatct cgtcgtgacc catggcgatg cctgcttgcc gaatatcatg
3361 gtggaaaatg gccgcttttc tggattcatc gactgtggcc ggctgggtgt ggcggaccgc
3421 tatcaggaca tagcgttggc tacccgtgat attgctgaag agcttggcgg cgaatgggct
3481 gaccgcttcc tcgtgcttta cggtatcgcc gctcccgatt cgcagcgcat cgccttctat
3541 cgccttcttg acgagttctt ctgagcggga ctctggggtt cgaaatgacc gaccaagcga
3601 cgcccaacct gccatcacga gatttcgatt ccaccgccgc cttctatgaa aggttgggct
3661 tcggaatcgt tttccgggac gccggctgga tgatcctcca gcgcggggat ctcatgctgg
3721 agttcttcgc ccaccccaac ttgtttattg cagcttataa tggttacaaa taaagcaata
3781 gcatcacaaa tttcacaaat aaagcatttt tttcactgca ttctagttgt ggtttgtcca
3841 aactcatcaa tgtatcttat catgtctgta taccgtcgac ctctagctag agcttggcgt
3901 aatcatggtc atagctgttt cctgtgtgaa attgttatcc gctcacaatt ccacacaaca
3961 tacgagccgg aagcataaag tgtaaagcct ggggtgccta atgagtgagc taactcacat
4021 taattgcgtt gcgctcactg cccgctttcc agtcgggaaa cctgtcgtgc cagctgcatt
4081 aatgaatcgg ccaacgcgcg gggagaggcg gtttgcgtat tgggcgctct tccgcttcct
4141 cgctcactga ctcgctgcgc tcggtcgttc ggctgcggcg agcggtatca gctcactcaa
4201 aggcggtaat acggttatcc acagaatcag gggataacgc aggaaagaac atgtgagcaa
4261 aaggccagca aaaggccagg aaccgtaaaa aggccgcgtt gctggcgttt ttccataggc
4321 tccgcccccc tgacgagcat cacaaaaatc gacgctcaag tcagaggtgg cgaaacccga
4381 caggactata aagataccag gcgtttcccc ctggaagctc cctcgtgcgc tctcctgttc
4441 cgaccctgcc gcttaccgga tacctgtccg cctttctccc ttcgggaagc gtggcgcttt
4501 ctcatagctc acgctgtagg tatctcagtt cggtgtaggt cgttcgctcc aagctgggct
4561 gtgtgcacga accccccgtt cagcccgacc gctgcgcctt atccggtaac tatcgtcttg
4621 agtccaaccc ggtaagacac gacttatcgc cactggcagc agccactggt aacaggatta
4681 gcagagcgag gtatgtaggc ggtgctacag agttcttgaa gtggtggcct aactacggct
4741 acactagaag aacagtattt ggtatctgcg ctctgctgaa gccagttacc ttcggaaaaa
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4861 agcagcagat tacgcgcaga aaaaaaggat ctcaagaaga tcctttgatc ttttctacgg
4921 ggtctgacgc tcagtggaac gaaaactcac gttaagggat tttggtcatg agattatcaa
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5041 tatatgagta aacttggtct gacagttacc aatgcttaat cagtgaggca cctatctcag
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6001 tttagaaaaa taaacaaata ggggttccgc gcacatttcc ccgaaaagtg ccacctgacg
6061 tcgacggatc gggagatctc ccgatcccct atggt
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pCDNA3.1-EGFP②哺乳荧光质粒
别称: pCDNA3.1-EGFP-2
| 启动子: | CMV |
|---|---|
| 复制子: | pUC |
| 原核抗性: | Amp |
| 筛选标记: | G418 |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
质粒属性
| 载体宿主： | 哺乳细胞 |
|---|---|
| 载体用途： | 蛋白表达 |
| 基因种属： | |
| 基因类型： | ORF |
| 原核抗性： | Amp |
| 真核抗性： | Neo/G418 |
| 荧光蛋白： |
质粒简介
pCDNA3.1-EGFP②是一个哺乳细胞绿色荧光表达质粒，
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 6095 bp ds-DNA circular SYN 08-DEC-2017
DEFINITION synthetic circular DNA
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..6095
/organism="synthetic DNA construct"
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enhancer 202..581
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promoter 582..785
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promoter"
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indicates direction of (+) strand synthesis"
promoter 2374..2703
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/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
promoter complement(3956..3986)
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of cAMP."
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replication"
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LIKHW"
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ORIGIN
1 gcactctcag tacaatctgc tctgatgccg catagttaag ccagtatctg ctccctgctt
61 gtgtgttgga ggtcgctgag tagtgcgcga gcaaaattta agctacaaca aggcaaggct
121 tgaccgacaa ttgcatgaag aatctgctta gggttaggcg ttttgcgctg cttcgcgatg
181 tacgggccag atatacgcgt tgacattgat tattgactag ttattaatag taatcaatta
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301 gcccgcctgg ctgaccgccc aacgaccccc gcccattgac gtcaataatg acgtatgttc
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421 ctgcccactt ggcagtacat caagtgtatc atatgccaag tacgccccct attgacgtca
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541 cttggcagta catctacgta ttagtcatcg ctattaccat ggtgatgcgg ttttggcagt
601 acatcaatgg gcgtggatag cggtttgact cacggggatt tccaagtctc caccccattg
661 acgtcaatgg gagtttgttt tggcaccaaa atcaacggga ctttccaaaa tgtcgtaaca
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781 gagctctctg gctaactaga gaacccactg cttactggct tatcgaaatt aatacgactc
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1261 ggtgaaccgc atcgagctga agggcatcga cttcaaggag gacggcaaca tcctggggca
1321 caagctggag tacaactaca acagccacaa cgtctatatc atggccgaca agcagaagaa
1381 cggcatcaag gtgaacttca agatccgcca caacatcgag gacggcagcg tgcagctcgc
1441 cgaccactac cagcagaaca cccccatcgg cgacggcccc gtgctgctgc ccgacaacca
1501 ctacctgagc acccagtccg ccctgagcaa agaccccaac gagaagcgcg atcacatggt
1561 cctgctggag ttcgtgaccg ccgccgggat cactctcggc atggacgagc tgtacaagct
1621 cgagtctaga gggcccgttt aaacccgctg atcagcctcg actgtgcctt ctagttgcca
1681 gccatctgtt gtttgcccct cccccgtgcc ttccttgacc ctggaaggtg ccactcccac
1741 tgtcctttcc taataaaatg aggaaattgc atcgcattgt ctgagtaggt gtcattctat
1801 tctggggggt ggggtggggc aggacagcaa gggggaggat tgggaagaca atagcaggca
1861 tgctggggat gcggtgggct ctatggcttc tgaggcggaa agaaccagct ggggctctag
1921 ggggtatccc cacgcgccct gtagcggcgc attaagcgcg gcgggtgtgg tggttacgcg
1981 cagcgtgacc gctacacttg ccagcgccct agcgcccgct cctttcgctt tcttcccttc
2041 ctttctcgcc acgttcgccg gctttccccg tcaagctcta aatcgggggc tccctttagg
2101 gttccgattt agtgctttac ggcacctcga ccccaaaaaa cttgattagg gtgatggttc
2161 acgtagtggg ccatcgccct gatagacggt ttttcgccct ttgacgttgg agtccacgtt
2221 ctttaatagt ggactcttgt tccaaactgg aacaacactc aaccctatct cggtctattc
2281 ttttgattta taagggattt tgccgatttc ggcctattgg ttaaaaaatg agctgattta
2341 acaaaaattt aacgcgaatt aattctgtgg aatgtgtgtc agttagggtg tggaaagtcc
2401 ccaggctccc cagcaggcag aagtatgcaa agcatgcatc tcaattagtc agcaaccagg
2461 tgtggaaagt ccccaggctc cccagcaggc agaagtatgc aaagcatgca tctcaattag
2521 tcagcaacca tagtcccgcc cctaactccg cccatcccgc ccctaactcc gcccagttcc
2581 gcccattctc cgccccatgg ctgactaatt ttttttattt atgcagaggc cgaggccgcc
2641 tctgcctctg agctattcca gaagtagtga ggaggctttt ttggaggcct aggcttttgc
2701 aaaaagctcc cgggagcttg tatatccatt ttcggatctg atcaagagac aggatgagga
2761 tcgtttcgca tgattgaaca agatggattg cacgcaggtt ctccggccgc ttgggtggag
2821 aggctattcg gctatgactg ggcacaacag acaatcggct gctctgatgc cgccgtgttc
2881 cggctgtcag cgcaggggcg cccggttctt tttgtcaaga ccgacctgtc cggtgccctg
2941 aatgaactgc aggacgaggc agcgcggcta tcgtggctgg ccacgacggg cgttccttgc
3001 gcagctgtgc tcgacgttgt cactgaagcg ggaagggact ggctgctatt gggcgaagtg
3061 ccggggcagg atctcctgtc atctcacctt gctcctgccg agaaagtatc catcatggct
3121 gatgcaatgc ggcggctgca tacgcttgat ccggctacct gcccattcga ccaccaagcg
3181 aaacatcgca tcgagcgagc acgtactcgg atggaagccg gtcttgtcga tcaggatgat
3241 ctggacgaag agcatcaggg gctcgcgcca gccgaactgt tcgccaggct caaggcgcgc
3301 atgcccgacg gcgaggatct cgtcgtgacc catggcgatg cctgcttgcc gaatatcatg
3361 gtggaaaatg gccgcttttc tggattcatc gactgtggcc ggctgggtgt ggcggaccgc
3421 tatcaggaca tagcgttggc tacccgtgat attgctgaag agcttggcgg cgaatgggct
3481 gaccgcttcc tcgtgcttta cggtatcgcc gctcccgatt cgcagcgcat cgccttctat
3541 cgccttcttg acgagttctt ctgagcggga ctctggggtt cgaaatgacc gaccaagcga
3601 cgcccaacct gccatcacga gatttcgatt ccaccgccgc cttctatgaa aggttgggct
3661 tcggaatcgt tttccgggac gccggctgga tgatcctcca gcgcggggat ctcatgctgg
3721 agttcttcgc ccaccccaac ttgtttattg cagcttataa tggttacaaa taaagcaata
3781 gcatcacaaa tttcacaaat aaagcatttt tttcactgca ttctagttgt ggtttgtcca
3841 aactcatcaa tgtatcttat catgtctgta taccgtcgac ctctagctag agcttggcgt
3901 aatcatggtc atagctgttt cctgtgtgaa attgttatcc gctcacaatt ccacacaaca
3961 tacgagccgg aagcataaag tgtaaagcct ggggtgccta atgagtgagc taactcacat
4021 taattgcgtt gcgctcactg cccgctttcc agtcgggaaa cctgtcgtgc cagctgcatt
4081 aatgaatcgg ccaacgcgcg gggagaggcg gtttgcgtat tgggcgctct tccgcttcct
4141 cgctcactga ctcgctgcgc tcggtcgttc ggctgcggcg agcggtatca gctcactcaa
4201 aggcggtaat acggttatcc acagaatcag gggataacgc aggaaagaac atgtgagcaa
4261 aaggccagca aaaggccagg aaccgtaaaa aggccgcgtt gctggcgttt ttccataggc
4321 tccgcccccc tgacgagcat cacaaaaatc gacgctcaag tcagaggtgg cgaaacccga
4381 caggactata aagataccag gcgtttcccc ctggaagctc cctcgtgcgc tctcctgttc
4441 cgaccctgcc gcttaccgga tacctgtccg cctttctccc ttcgggaagc gtggcgcttt
4501 ctcatagctc acgctgtagg tatctcagtt cggtgtaggt cgttcgctcc aagctgggct
4561 gtgtgcacga accccccgtt cagcccgacc gctgcgcctt atccggtaac tatcgtcttg
4621 agtccaaccc ggtaagacac gacttatcgc cactggcagc agccactggt aacaggatta
4681 gcagagcgag gtatgtaggc ggtgctacag agttcttgaa gtggtggcct aactacggct
4741 acactagaag aacagtattt ggtatctgcg ctctgctgaa gccagttacc ttcggaaaaa
4801 gagttggtag ctcttgatcc ggcaaacaaa ccaccgctgg tagcggtttt tttgtttgca
4861 agcagcagat tacgcgcaga aaaaaaggat ctcaagaaga tcctttgatc ttttctacgg
4921 ggtctgacgc tcagtggaac gaaaactcac gttaagggat tttggtcatg agattatcaa
4981 aaaggatctt cacctagatc cttttaaatt aaaaatgaag ttttaaatca atctaaagta
5041 tatatgagta aacttggtct gacagttacc aatgcttaat cagtgaggca cctatctcag
5101 cgatctgtct atttcgttca tccatagttg cctgactccc cgtcgtgtag ataactacga
5161 tacgggaggg cttaccatct ggccccagtg ctgcaatgat accgcgagac ccacgctcac
5221 cggctccaga tttatcagca ataaaccagc cagccggaag ggccgagcgc agaagtggtc
5281 ctgcaacttt atccgcctcc atccagtcta ttaattgttg ccgggaagct agagtaagta
5341 gttcgccagt taatagtttg cgcaacgttg ttgccattgc tacaggcatc gtggtgtcac
5401 gctcgtcgtt tggtatggct tcattcagct ccggttccca acgatcaagg cgagttacat
5461 gatcccccat gttgtgcaaa aaagcggtta gctccttcgg tcctccgatc gttgtcagaa
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5701 cacatagcag aactttaaaa gtgctcatca ttggaaaacg ttcttcgggg cgaaaactct
5761 caaggatctt accgctgttg agatccagtt cgatgtaacc cactcgtgca cccaactgat
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5941 aatattattg aagcatttat cagggttatt gtctcatgag cggatacata tttgaatgta
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
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文献和实验相关实验
2)、哺乳动物/真核表达载体 pcDNA3.1+ 不含任何标签的真核表达载体 amp/neo 5.4kb E. coli/mammals pcDNA3.1- 不含任何标签的真核表达载体 amp/neo 5.4kb E. coli/mammals pcDNA4/V5-His A, amp 含His标签的真核表达载体 amp/neo pcDNA 3.1(-) myc-hisA 含His标签的真核表达载体 amp/neo pcDNA 3.1(-) myc-hisB 含His标签
pCDNA3.1- 哺乳细胞质粒 Amp 真核表达 pCDNA3.1+ 哺乳细胞质粒 Amp 真核表达 pCDNA3.1(+)-EGFP 哺乳细胞质粒 Amp 检测转染效率 pCDNA3
1-212孔培养板φ22.6mm）4 1．3×105 0．5-124孔培养板（φ8mm）0．5 0．6×105 0．25-0．53、SHG-44细胞的转染：(1)转染当天，加入脂质体/ DNA混合物之前的短时间内，更换1ml新鲜的有血清或无血清培养基。(2)准备不同比例的DOSPER/ DNA混合物，以确定每个细胞系的最佳比例。① 溶液A：用HBS稀释DNA（pcDNA3、重组pcDNA3）各1.5μg 到总体积50μl（30μg/ml）。②溶液B：用HBS稀释6μl脂质体到终容积50μl（120μg
pCDNA3.1-EGFP②哺乳荧光质粒
￥100 - 1000
