pFLAG-CMV-6a哺乳表达质粒

基本信息
名称：pFLAG-CMV-6a哺乳表达质粒
别称: pFLAG-CMV-6a

启动子:	CMV
复制子:	pUC
原核抗性:	Amp
克隆菌株:	DH5a
培养条件:	37度

质粒属性

载体宿主：	哺乳细胞
载体用途：	蛋白表达
基因种属：	空载体
基因类型：	ORF
原核抗性：	Amp
真核抗性：
荧光蛋白：

质粒简介
  pFLAG-CMV-6a是一个哺乳细胞pCMV系列表达质粒。

质粒图谱


质粒序列
LOCUS       Exported                4697 bp ds-DNA     circular SYN 06-JAN-2018
DEFINITION  synthetic circular DNA
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..4697
                     /organism="synthetic DNA construct"
                     /mol_type="other DNA"
     enhancer        318..697
                     /label=CMV enhancer
                     /note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
     promoter        698..901
                     /label=CMV promoter
                     /note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early 
                     promoter"
     CDS             936..959
                     /codon_start=1
                     /product="FLAG(R) epitope tag, followed by an enterokinase 
                     cleavage site"
                     /label=FLAG
                     /translation="DYKDDDDK"
     misc_feature    963..1040
                     /label=MCS
     polyA_signal    1038..1660
                     /label=hGH poly(A) signal
                     /note="human growth hormone polyadenylation signal"
     promoter        1689..2018
                     /label=SV40 promoter
                     /note="SV40 enhancer and early promoter"
     rep_origin      1869..2004
                     /label=SV40 ori
                     /note="SV40 origin of replication"
     rep_origin      complement(2491..3079)
                     /direction=LEFT
                     /label=ori
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                     replication"
     CDS             complement(3250..4110)
                     /codon_start=1
                     /gene="bla"
                     /product="beta-lactamase"
                     /label=AmpR
                     /note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
                     related antibiotics"
                     /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
                     ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
                     PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
                     EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
                     LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
                     LIKHW"
     promoter        complement(4111..4215)
                     /gene="bla"
                     /label=AmpR promoter
     rep_origin      4242..4697
                     /direction=RIGHT
                     /label=f1 ori
                     /note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow 
                     indicates direction of (+) strand synthesis"
ORIGIN
        1 ccattcgcca ttcaggctgc gcaactgttg ggaagggcga tcggtgcggg cctcttcgct
       61 attacgccag ctggcgaaag ggggatgtgc tgcaaggcga ttaagttggg taacgccagg
      121 gttttcccag tcacgacgtt gtaaaacgac ggccagtgcc aagctgatct atacattgaa
      181 tcaatattgg caattagcca tattagtcat tggttatata gcataaatca atattggcta
      241 ttggccattg catacgttgt atctatatca taatatgtac atttatattg gctcatgtcc
      301 aatatgaccg ccatgttgac attgattatt gactagttat taatagtaat caattacggg
      361 gtcattagtt catagcccat atatggagtt ccgcgttaca taacttacgg taaatggccc
      421 gcctggctga ccgcccaacg acccccgccc attgacgtca ataatgacgt atgttcccat
      481 agtaacgcca atagggactt tccattgacg tcaatgggtg gagtatttac ggtaaactgc
      541 ccacttggca gtacatcaag tgtatcatat gccaagtccg ccccctattg acgtcaatga
      601 cggtaaatgg cccgcctggc attatgccca gtacatgacc ttacgggact ttcctacttg
      661 gcagtacatc tacgtattag tcatcgctat taccatggtg atgcggtttt ggcagtacac
      721 caatgggcgt ggatagcggt ttgactcacg gggatttcca agtctccacc ccattgacgt
      781 caatgggagt ttgttttggc accaaaatca acgggacttt ccaaaatgtc gtaataaccc
      841 cgccccgttg acgcaaatgg gcggtaggcg tgtacggtgg gaggtctata taagcagagc
      901 tcgtttagtg aaccgtcaga attacgcgta ccatggacta caaagacgat gacgacaagc
      961 tcaagcttgc ggccgcgaat tcagatctct gcaggatatc gtcgacggat ccggtaccat
     1021 cgatagataa ttgacccggg tggcatccct gtgacccctc cccagtgcct ctcctggccc
     1081 tggaagttgc cactccagtg cccaccagcc ttgtcctaat aaaattaagt tgcatcattt
     1141 tgtctgacta ggtgtccttc tataatatta tggggtggag gggggtggta tggagcaagg
     1201 ggcaagttgg gaagacaacc tgtagggcct gcggggtcta ttgggaacca agctggagtg
     1261 cagtggcaca atcttggctc actgcaatct ccgcctcctg ggttcaagcg attctcctgc
     1321 ctcagcctcc cgagttgttg ggattccagg catgcatgac caggctcagc taatttttgt
     1381 ttttttggta gagacggggt ttcaccatat tggccaggct ggtctccaac tcctaatctc
     1441 aggtgatcta cccaccttgg cctcccaaat tgctgggatt acaggcgtga accactgctc
     1501 ccttccctgt ccttctgatt ttaaaataac tataccagca ggaggacgtc cagacacagc
     1561 ataggctacc tggccatgcc caaccggtgg gacatttgag ttgcttgctt ggcactgtcc
     1621 tctcatgcgt tgggtccact cagtagatgc ctgttgaatt gggtacgcgg ccagcttggc
     1681 tgtggaatgt gtgtcagtta gggtgtggaa agtccccagg ctccccagca ggcagaagta
     1741 tgcaaagcat gcatctcaat tagtcagcaa ccaggtgtgg aaagtcccca ggctccccag
     1801 caggcagaag tatgcaaagc atgcatctca attagtcagc aaccatagtc ccgcccctaa
     1861 ctccgcccat cccgccccta actccgccca gttccgccca ttctccgccc catggctgac
     1921 taattttttt tatttatgca gaggccgagg ccgcctcggc ctctgagcta ttccagaagt
     1981 agtgaggagg cttttttgga ggcctaggct tttgcaaaaa gctcctcgag gaactgaaaa
     2041 accagaaagt taattcccta tagtgagtcg tattaaattc gtaatcatgt catagctgtt
     2101 tcctgtgtga aattgttatc cgctcacaat tccacacaac atacgagccg gaagcataaa
     2161 gtgtaaagcc tggggtgcct aatgagtgag ctaactcaca ttaattgcgt tgcgctcact
     2221 gcccgctttc cagtcgggaa acctgtcgtg ccagctgcat taatgaatcg gccaacgcgc
     2281 ggggagaggc ggtttgcgta ttgggcgctc ttccgcttcc tcgctcactg actcgctgcg
     2341 ctcggtcgtt cggctgcggc gagcggtatc agctcactca aaggcggtaa tacggttatc
     2401 cacagaatca ggggataacg caggaaagaa catgtgagca aaaggccagc aaaaggccag
     2461 gaaccgtaaa aaggccgcgt tgctggcgtt tttccatagg ctccgccccc ctgacgagca
     2521 tcacaaaaat cgacgctcaa gtcagaggtg gcgaaacccg acaggactat aaagatacca
     2581 ggcgtttccc cctggaagct ccctcgtgcg ctctcctgtt ccgaccctgc cgcttaccgg
     2641 atacctgtcc gcctttctcc cttcgggaag cgtggcgctt tctcatagct cacgctgtag
     2701 gtatctcagt tcggtgtagg tcgttcgctc caagctgggc tgtgtgcacg aaccccccgt
     2761 tcagcccgac cgctgcgcct tatccggtaa ctatcgtctt gagtccaacc cggtaagaca
     2821 cgacttatcg ccactggcag cagccactgg taacaggatt agcagagcga ggtatgtagg
     2881 cggtgctaca gagttcttga agtggtggcc taactacggc tacactagaa gaacagtatt
     2941 tggtatctgc gctctgctga agccagttac cttcggaaaa agagttggta gctcttgatc
     3001 cggcaaacaa accaccgctg gtagcggtgg tttttttgtt tgcaagcagc agattacgcg
     3061 cagaaaaaaa ggatctcaag aagatccttt gatcttttct acggggtctg acgctcagtg
     3121 gaacgaaaac tcacgttaag ggattttggt catgagatta tcaaaaagga tcttcaccta
     3181 gatcctttta aattaaaaat gaagttttaa atcaatctaa agtatatatg agtaaacttg
     3241 gtctgacagt taccaatgct taatcagtga ggcacctatc tcagcgatct gtctatttcg
     3301 ttcatccata gttgcctgac tccccgtcgt gtagataact acgatacggg agggcttacc
     3361 atctggcccc agtgctgcaa tgataccgcg agacccacgc tcaccggctc cagatttatc
     3421 agcaataaac cagccagccg gaagggccga gcgcagaagt ggtcctgcaa ctttatccgc
     3481 ctccatccag tctattaatt gttgccggga agctagagta agtagttcgc cagttaatag
     3541 tttgcgcaac gttgttgcca ttgctacagg catcgtggtg tcacgctcgt cgtttggtat
     3601 ggcttcattc agctccggtt cccaacgatc aaggcgagtt acatgatccc ccatgttgtg
     3661 caaaaaagcg gttagctcct tcggtcctcc gatcgttgtc agaagtaagt tggccgcagt
     3721 gttatcactc atggttatgg cagcactgca taattctctt actgtcatgc catccgtaag
     3781 atgcttttct gtgactggtg agtactcaac caagtcattc tgagaatagt gtatgcggcg
     3841 accgagttgc tcttgcccgg cgtcaatacg ggataatacc gcgccacata gcagaacttt
     3901 aaaagtgctc atcattggaa aacgttcttc ggggcgaaaa ctctcaagga tcttaccgct
     3961 gttgagatcc agttcgatgt aacccactcg tgcacccaac tgatcttcag catcttttac
     4021 tttcaccagc gtttctgggt gagcaaaaac aggaaggcaa aatgccgcaa aaaagggaat
     4081 aagggcgaca cggaaatgtt gaatactcat actcttcctt tttcaatatt attgaagcat
     4141 ttatcagggt tattgtctca tgagcggata catatttgaa tgtatttaga aaaataaaca
     4201 aataggggtt ccgcgcacat ttccccgaaa agtgccacct gacgcgccct gtagcggcgc
     4261 attaagcgcg gcgggtgtgg tggttacgcg cagcgtgacc gctacacttg ccagcgccct
     4321 agcgcccgct cctttcgctt tcttcccttc ctttctcgcc acgttcgccg gctttccccg
     4381 tcaagctcta aatcgggggc tccctttagg gttccgattt agtgctttac ggcacctcga
     4441 ccccaaaaaa cttgattagg gtgatggttc acgtagtggg ccatcgccct gatagacggt
     4501 ttttcgccct ttgacgttgg agtccacgtt ctttaatagt ggactcttgt tccaaactgg
     4561 aacaacactc aaccctatct cggtctattc ttttgattta taagggattt tgccgatttc
     4621 ggcctattgg ttaaaaaatg agctgattta acaaaaattt aacgcgaatt ttaacaaaat
     4681 attaacgctt acaattt
//

质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片

P2687/pENTR223-PLEK-A1019G人源基因质粒

P2688/pENTR223-TMEM185B人源基因质粒

P2689/pENTR223-SIRT2人源基因质粒

P2690/pENTR223-GPD1L-G3A人源基因质粒

P2691/pENTR223-TAF8人源基因质粒

P2692/pENTR223-HNRNPD（有缺失）人源基因质粒

P2693/pENTR223-SCAND1人源基因质粒

P2694/pENTR223-TNFSF14人源基因质粒

P2695/pENTR223-ARL4D人源基因质粒

P2696/pENTR223-EWSR1人源基因质粒

P2697/pENTR223-SQSTM1人源基因质粒