pSMART LCKan质粒

基本信息
名称：pSMART LCKan质粒
别称: pSMART LCKan

原核抗性:	Kan
克隆菌株:	DH5a
培养条件:	37度

质粒属性

载体宿主：	大肠杆菌
载体用途：
基因种属：
基因类型：
原核抗性：	Kan
真核抗性：
荧光蛋白：

质粒简介
 pSMART LCKan质粒

质粒图谱


质粒序列
LOCUS       Exported                1969 bp ds-DNA     circular SYN 20-JUL-2018
DEFINITION  synthetic circular DNA
KEYWORDS    pSMART LCKan
SOURCE      synthetic DNA construct
  ORGANISM  synthetic DNA construct
REFERENCE   1  (bases 1 to 1969)
  TITLE     Direct Submission
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..1969
                     /organism="synthetic DNA construct"
                     /mol_type="other DNA"
     terminator      65..96
                     /note="tonB terminator"
                     /note="bidirectional E. coli tonB-P14 transcription 
                     terminator"
     promoter        97..187
                     /note="cat promoter"
                     /note="promoter of the E. coli cat gene encoding 
                     chloramphenicol acetyltransferase"
     CDS             188..1003
                     /codon_start=1
                     /gene="aph(3')-Ia"
                     /product="aminoglycoside phosphotransferase"
                     /note="KanR"
                     /note="confers resistance to kanamycin in bacteria or G418 
                     (Geneticin(R)) in eukaryotes"
                     /translation="MSHIQRETSCSRPRLNSNMDADLYGYKWARDNVGQSGATIYRLYG
                     KPDAPELFLKHGKGSVANDVTDEMVRLNWLTEFMPLPTIKHFIRTPDDAWLLTTAIPGK
                     TAFQVLEEYPDSGENIVDALAVFLRRLHSIPVCNCPFNSDRVFRLAQAQSRMNNGLVDA
                     SDFDDERNGWPVEQVWKEMHKLLPFSPDSVVTHGDFSLDNLIFDEGKLIGCIDVGRVGI
                     ADRYQDLAILWNCLGEFSPSLQKRLFQKYGIDNPDMNKLQFHLMLDEFF"
     CDS             1004..1195
                     /codon_start=1
                     /gene="rop"
                     /product="Rop protein, which maintains plasmids at low copy
                     number"
                     /note="rop"
                     /translation="MTKQEKTALNMARFIRSQTLTLLEKLNELDADEQADICESLHDHA
                     DELYRSCLARFGDDGENL"
     terminator      1219..1246
                     /note="T7Te terminator"
                     /note="phage T7 early transcription terminator"
     rep_origin      complement(1258..1846)
                     /direction=LEFT
                     /note="ori"
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                     replication"
     terminator      1868..1897
                     /note="T3Te terminator"
                     /note="phage T3 early transcription terminator"
ORIGIN
        1 gacgaattct ctagatatcg ctcaatactg accatttaaa tcatacctga cctccatagc
       61 agaaagtcaa aagcctccga ccggaggctt ttgacttgat cggcacgtaa gaggttccaa
      121 ctttcaccat aatgaaataa gatcactacc gggcgtattt tttgagttat cgagattttc
      181 aggagctatg agccatattc aacgggaaac gtcttgctct aggccgcgat taaattccaa
      241 catggatgct gatttatatg ggtataaatg ggctcgcgat aatgtcgggc aatcaggtgc
      301 gacaatctat cgattgtatg ggaagcccga tgcgccagag ttgtttctga aacatggcaa
      361 aggtagcgtt gccaatgatg ttacagatga gatggtcaga ctaaactggc tgacggaatt
      421 tatgcctctt ccgaccatca agcattttat ccgtactcct gatgatgcat ggttactcac
      481 cactgcgatc cccgggaaaa cagcattcca ggtattagaa gaatatcctg attcaggtga
      541 aaatattgtt gatgcgctgg cagtgttcct gcgccggttg cattcgattc ctgtttgtaa
      601 ttgtcctttt aacagcgatc gcgtatttcg tctcgctcag gcgcaatcac gaatgaataa
      661 cggtttggtt gatgcgagtg attttgatga cgagcgtaat ggctggcctg ttgaacaagt
      721 ctggaaagaa atgcataaac ttttgccatt ctcaccggat tcagtcgtca ctcatggtga
      781 tttctcactt gataacctta tttttgacga ggggaaatta ataggttgta ttgatgttgg
      841 acgagtcgga atcgcagacc gataccagga tcttgccatc ctatggaact gcctcggtga
      901 gttttctcct tcattacaga aacggctttt tcaaaaatat ggtattgata atcctgatat
      961 gaataaattg cagtttcatt tgatgctcga tgagtttttc taaatgacca aacaggaaaa
     1021 aaccgccctt aacatggccc gctttatcag aagccagaca ttaacgcttc tggagaaact
     1081 caacgagctg gacgcggatg aacaggcaga catctgtgaa tcgcttcacg accacgctga
     1141 tgagctttac cgcagctgcc tcgcgcgttt cggtgatgac ggtgaaaacc tctgatgagg
     1201 gcccaaatgt aatcacctgg ctcaccttcg ggtgggcctt tctgcgttgc tggcgttttt
     1261 ccataggctc cgcccccctg acgagcatca caaaaatcga cgctcaagtc agaggtggcg
     1321 aaacccgaca ggactataaa gataccaggc gtttccccct ggaagctccc tcgtgcgctc
     1381 tcctgttccg accctgccgc ttaccggata cctgtccgcc tttctccctt cgggaagcgt
     1441 ggcgctttct catagctcac gctgtaggta tctcagttcg gtgtaggtcg ttcgctccaa
     1501 gctgggctgt gtgcacgaac cccccgttca gcccgaccgc tgcgccttat ccggtaacta
     1561 tcgtcttgag tccaacccgg taagacacga cttatcgcca ctggcagcag ccactggtaa
     1621 caggattagc agagcgaggt atgtaggcgg tgctacagag ttcttgaagt ggtggcctaa
     1681 ctacggctac actagaagga cagtatttgg tatctgcgct ctgctgaagc cagttacctt
     1741 cggaaaaaga gttggtagct cttgatccgg caaacaaacc accgctggta gcggtggttt
     1801 ttttgtttgc aagcagcaga ttacgcgcag aaaaaaagga tctcaagaag atcctttgat
     1861 tttctaccga agaaaggccc acccgtgaag gtgagccagt gagttgattg cagtccagtt
     1921 acgctggagt ctgaggctcg tcctgaatga tatcaagctt gaattcgtt
//

质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片

P1525/LBA9402发根农杆菌

P1526/ATCC15834发根农杆菌

P1527/R1000发根农杆菌

P1535/C58C1发根农杆菌

P1528/EHA105根癌农杆菌

P1529/GV3101根癌农杆菌

P1530/AGL1根癌农杆菌

P1531/LBA4404根癌农杆菌

P1532/GV2260根癌农杆菌

P1533/pCAMBIA3301/LBA4404根癌农杆菌

P1534/EHA101根癌农杆菌