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- 上海
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
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-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pTRE2pur
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pTRE2pur哺乳调控质粒
别称: pTRE2pur
质粒属性
质粒简介
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 5108 bp ds-DNA circular SYN 05-SEP-2016
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS pTRE2pur
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 5108)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Monday, September 5, 2016 from SnapGene Viewer 3.1.4
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..5108
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
protein_bind 15..285
/bound_moiety="tetracycline repressor TetR"
/note="tetracycline response element"
/note="contains seven copies of the tetracycline operator
tetO"
promoter 318..356
/note="minimal CMV promoter"
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
intron 554..1126
/note="beta-globin intron"
/note="intron from rabbit beta-globin gene"
polyA_site 1323..1378
/note="beta-globin poly(A) signal"
/note="rabbit beta-globin polyadenylation signal"
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/direction=LEFT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(2706..3566)
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/note="AmpR"
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
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ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRVDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
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LIKHW"
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/note="AmpR promoter"
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/note="SV40 promoter"
/note="SV40 enhancer and early promoter"
rep_origin 3956..4091
/note="SV40 ori"
/note="SV40 origin of replication"
CDS 4198..4797
/codon_start=1
/gene="pac from Streptomyces alboniger"
/product="puromycin N-acetyltransferase"
/note="PuroR"
/note="confers resistance to puromycin"
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APRNLPFYERLGFTVTADVEVPEGPRTWCMTRKPGA"
polyA_signal 5027..5108
/note="SV40 poly(A) signal"
/note="SV40 polyadenylation signal"
ORIGIN
1 ctcgagttta ccactcccta tcagtgatag agaaaagtga aagtcgagtt taccactccc
61 tatcagtgat agagaaaagt gaaagtcgag tttaccactc cctatcagtg atagagaaaa
121 gtgaaagtcg agtttaccac tccctatcag tgatagagaa aagtgaaagt cgagtttacc
181 actccctatc agtgatagag aaaagtgaaa gtcgagttta ccactcccta tcagtgatag
241 agaaaagtga aagtcgagtt taccactccc tatcagtgat agagaaaagt gaaagtcgag
301 ctcggtaccc gggtcgaggt aggcgtgtac ggtgggaggc ctatataagc agagctcgtt
361 tagtgaaccg tcagatcgcc tggagacgcc atccacgctg ttttgacctc catagaagac
421 accgggaccg atccagcctc cgcggccccg aattcgagct cggtacccgg ggatcctcta
481 gtcagctgac gcgtgctagc gcggccgcat cgataagctt gtcgacgata tctctagagc
541 tgagaacttc agggtgagtt tggggaccct tgattgttct ttctttttcg ctattgtaaa
601 attcatgtta tatggagggg gcaaagtttt cagggtgttg tttagaatgg gaagatgtcc
661 cttgtatcac catggaccct catgataatt ttgtttcttt cactttctac tctgttgaca
721 accattgtct cctcttattt tcttttcatt ttctgtaact ttttcgttaa actttagctt
781 gcatttgtaa cgaattttta aattcacttt tgtttatttg tcagattgta agtactttct
841 ctaatcactt ttttttcaag gcaatcaggg tatattatat tgtacttcag cacagtttta
901 gagaacaatt gttataatta aatgataagg tagaatattt ctgcatataa attctggctg
961 gcgtggaaat attcttattg gtagaaacaa ctacaccctg gtcatcatcc tgcctttctc
1021 tttatggtta caatgatata cactgtttga gatgaggata aaatactctg agtccaaacc
1081 gggcccctct gctaaccatg ttcatgcctt cttctctttc ctacagctcc tgggcaacgt
1141 gctggttgtt gtgctgtctc atcattttgg caaagaattc actcctcagg tgcaggctgc
1201 ctatcagaag gtggtggctg gtgtggccaa tgccctggct cacaaatacc actgagatct
1261 ttttccctct gccaaaaatt atggggacat catgaagccc cttgagcatc tgacttctgg
1321 ctaataaagg aaatttattt tcattgcaat agtgtgttgg aattttttgt gtctctcact
1381 cggaaggaca tatgggaggg caaatcattt aaaacatcag aatgagtatt tggtttagag
1441 tttggcaaca tatgcccata tgctggctgc catgaacaaa ggttggctat aaagaggtca
1501 tcagtatatg aaacagcccc ctgctgtcca ttccttattc catagaaaag ccttgacttg
1561 aggttagatt ttttttatat tttgttttgt gttatttttt tctttaacat ccctaaaatt
1621 ttccttacat gttttactag ccagattttt cctcctctcc tgactactcc cagtcatagc
1681 tgtccctctt ctcttatgga gatccctcga ctgcattaat gaatcggcca acgcgcgggg
1741 agaggcggtt tgcgtattgg gcgctcttcc gcttcctcgc tcactgactc gctgcgctcg
1801 gtcgttcggc tgcggcgagc ggtatcagct cactcaaagg cggtaatacg gttatccaca
1861 gaatcagggg ataacgcagg aaagaacatg tgagcaaaag gccagcaaaa ggccaggaac
1921 cgtaaaaagg ccgcgttgct ggcgtttttc cataggctcc gcccccctga cgagcatcac
1981 aaaaatcgac gctcaagtca gaggtggcga aacccgacag gactataaag ataccaggcg
2041 tttccccctg gaagctccct cgtgcgctct cctgttccga ccctgccgct taccggatac
2101 ctgtccgcct ttctcccttc gggaagcgtg gcgctttctc atagctcacg ctgtaggtat
2161 ctcagttcgg tgtaggtcgt tcgctccaag ctgggctgtg tgcacgaacc ccccgttcag
2221 cccgaccgct gcgccttatc cggtaactat cgtcttgagt ccaacccggt aagacacgac
2281 ttatcgccac tggcagcagc cactggtaac aggattagca gagcgaggta tgtaggcggt
2341 gctacagagt tcttgaagtg gtggcctaac tacggctaca ctagaagaac agtatttggt
2401 atctgcgctc tgctgaagcc agttaccttc ggaaaaagag ttggtagctc ttgatccggc
2461 aaacaaacca ccgctggtag cggtggtttt tttgtttgca agcagcagat tacgcgcaga
2521 aaaaaaggat ctcaagaaga tcctttgatc ttttctacgg ggtctgacgc tcagtggaac
2581 gaaaactcac gttaagggat tttggtcatg agattatcaa aaaggatctt cacctagatc
2641 cttttaaatt aaaaatgaag ttttaaatca atctaaagta tatatgagta aacttggtct
2701 gacagttacc aatgcttaat cagtgaggca cctatctcag cgatctgtct atttcgttca
2761 tccatagttg cctgactccc cgtcgtgtag ataactacga tacgggaggg cttaccatct
2821 ggccccagtg ctgcaatgat accgcgagac ccacgctcac cggctccaga tttatcagca
2881 ataaaccagc cagccggaag ggccgagcgc agaagtggtc ctgcaacttt atccgcctcc
2941 atccagtcta ttaattgttg ccgggaagct agagtaagta gttcgccagt taatagtttg
3001 cgcaacgttg ttgccattgc tacaggcatc gtggtgtcac gctcgtcgtt tggtatggct
3061 tcattcagct ccggttccca acgatcaagg cgagttacat gatcccccat gttgtgcaaa
3121 aaagcggtta gctccttcgg tcctccgatc gttgtcagaa gtaagttggc cgcagtgtta
3181 tcactcatgg ttatggcagc actgcataat tctcttactg tcatgccatc cgtaagatgc
3241 ttttctgtga ctggtgagta ctcaaccaag tcattctgag aatagtgtat gcggcgaccg
3301 agttgctctt gcccggcgtc aacacgggat aataccgcgc cacatagcag aactttaaaa
3361 gtgctcatca ttggaaaacg ttcttcgggg cgaaaactct caaggatctt accgctgttg
3421 agatccagtt cgatgtaacc cactcgtgca cccaactgat cttcagcatc ttttactttc
3481 accagcgttt ctgggtgagc aaaaacagga aggcaaaatg ccgcaaaaaa gggaataagg
3541 gcgacacgga aatgttgaat actcatactc ttcctttttc aatattattg aagcatttat
3601 cagggttatt gtctcatgag cggatacata tttgaatgta tttagaaaaa taaacaaata
3661 ggggttccgc gcacatttcc ccgaaaagtg ccacctgacg tctaagaaac cattattatc
3721 atgacattaa cctataaaaa taggcgtatc acgaggccct ttcgtcttca ctcgagtgtg
3781 tcagttaggg tgtggaaagt ccccaggctc cccagcaggc agaagtatgc aaagcatgca
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3961 gcccctaact ccgcccagtt ccgcccattc tccgccccat ggctgactaa ttttttttat
4021 ttatgcagag gccgaggccg cctcggcctc tgagctattc cagaagtagt gaggaggctt
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4621 gccgtcgtgc tccccggagt ggaggcggcc gagcgcgccg gggtgcccgc cttcctggag
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4741 gtcgaggtgc ccgaaggacc gcgcacctgg tgcatgaccc gcaagcccgg tgcctgacgc
4801 ccgccccacg acccgcagcg cccgaccgaa aggagcgcac gaccccatgg ctccgaccga
4861 agccacccgg ggcggccccg ccgaccccgc acccgccccc gaggcccacc gactctagag
4921 gatcataatc agccatacca catttgtaga ggttttactt gctttaaaaa acctcccaca
4981 cctccccctg aacctgaaac ataaaatgaa tgcaattgtt gttgttaact tgtttattgc
5041 agcttataat ggttacaaat aaagcaatag catcacaaat ttcacaaata aagcattttt
5101 ttcactgc
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pTRE2pur哺乳调控质粒
别称: pTRE2pur
| 启动子: | TRE |
|---|---|
| 复制子: | pUC |
| 终止子: | SV40 poly(A) signal，beta-globin polyA signal |
| 质粒分类: | 哺乳细胞，四环素调控系统载体 |
| 质粒大小: | 5108bp |
| 原核抗性: | Amp |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
| 表达宿主: | 哺乳细胞 |
| 诱导方式: | 四环素诱导 |
| 5'测序引物: | Sv40-polyA-R：GAAATTTGTGATGCTATTGC |
| 3'测序引物: | 根据序列设计引物 |
质粒属性
| 载体宿主： | 哺乳细胞 |
|---|---|
| 载体用途： | 蛋白表达 |
| 基因种属： | 空载体 |
| 基因类型： | ORF |
| 原核抗性： | Amp |
| 真核抗性： | |
| 荧光蛋白： |
质粒简介
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 5108 bp ds-DNA circular SYN 05-SEP-2016
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS pTRE2pur
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 5108)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Monday, September 5, 2016 from SnapGene Viewer 3.1.4
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..5108
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
protein_bind 15..285
/bound_moiety="tetracycline repressor TetR"
/note="tetracycline response element"
/note="contains seven copies of the tetracycline operator
tetO"
promoter 318..356
/note="minimal CMV promoter"
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
intron 554..1126
/note="beta-globin intron"
/note="intron from rabbit beta-globin gene"
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/note="beta-globin poly(A) signal"
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replication"
CDS complement(2706..3566)
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/product="beta-lactamase"
/note="AmpR"
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRVDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
promoter complement(3567..3671)
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
promoter 3776..4105
/note="SV40 promoter"
/note="SV40 enhancer and early promoter"
rep_origin 3956..4091
/note="SV40 ori"
/note="SV40 origin of replication"
CDS 4198..4797
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AQQQMEGLLAPHRPKEPAWFLATVGVSPDHQGKGLGSAVVLPGVEAAERAGVPAFLETS
APRNLPFYERLGFTVTADVEVPEGPRTWCMTRKPGA"
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ORIGIN
1 ctcgagttta ccactcccta tcagtgatag agaaaagtga aagtcgagtt taccactccc
61 tatcagtgat agagaaaagt gaaagtcgag tttaccactc cctatcagtg atagagaaaa
121 gtgaaagtcg agtttaccac tccctatcag tgatagagaa aagtgaaagt cgagtttacc
181 actccctatc agtgatagag aaaagtgaaa gtcgagttta ccactcccta tcagtgatag
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301 ctcggtaccc gggtcgaggt aggcgtgtac ggtgggaggc ctatataagc agagctcgtt
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781 gcatttgtaa cgaattttta aattcacttt tgtttatttg tcagattgta agtactttct
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1321 ctaataaagg aaatttattt tcattgcaat agtgtgttgg aattttttgt gtctctcact
1381 cggaaggaca tatgggaggg caaatcattt aaaacatcag aatgagtatt tggtttagag
1441 tttggcaaca tatgcccata tgctggctgc catgaacaaa ggttggctat aaagaggtca
1501 tcagtatatg aaacagcccc ctgctgtcca ttccttattc catagaaaag ccttgacttg
1561 aggttagatt ttttttatat tttgttttgt gttatttttt tctttaacat ccctaaaatt
1621 ttccttacat gttttactag ccagattttt cctcctctcc tgactactcc cagtcatagc
1681 tgtccctctt ctcttatgga gatccctcga ctgcattaat gaatcggcca acgcgcgggg
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1861 gaatcagggg ataacgcagg aaagaacatg tgagcaaaag gccagcaaaa ggccaggaac
1921 cgtaaaaagg ccgcgttgct ggcgtttttc cataggctcc gcccccctga cgagcatcac
1981 aaaaatcgac gctcaagtca gaggtggcga aacccgacag gactataaag ataccaggcg
2041 tttccccctg gaagctccct cgtgcgctct cctgttccga ccctgccgct taccggatac
2101 ctgtccgcct ttctcccttc gggaagcgtg gcgctttctc atagctcacg ctgtaggtat
2161 ctcagttcgg tgtaggtcgt tcgctccaag ctgggctgtg tgcacgaacc ccccgttcag
2221 cccgaccgct gcgccttatc cggtaactat cgtcttgagt ccaacccggt aagacacgac
2281 ttatcgccac tggcagcagc cactggtaac aggattagca gagcgaggta tgtaggcggt
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2401 atctgcgctc tgctgaagcc agttaccttc ggaaaaagag ttggtagctc ttgatccggc
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2581 gaaaactcac gttaagggat tttggtcatg agattatcaa aaaggatctt cacctagatc
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2821 ggccccagtg ctgcaatgat accgcgagac ccacgctcac cggctccaga tttatcagca
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3421 agatccagtt cgatgtaacc cactcgtgca cccaactgat cttcagcatc ttttactttc
3481 accagcgttt ctgggtgagc aaaaacagga aggcaaaatg ccgcaaaaaa gggaataagg
3541 gcgacacgga aatgttgaat actcatactc ttcctttttc aatattattg aagcatttat
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P2731/pENTR223-C11orf49人源基因质粒 |
| P2732/pENTR223-ANTXR1人源基因质粒 |
| P2733/pENTR223-P2RY14-A160G人源基因质粒 |
| P2734/pENTR223-DNAJB4人源基因质粒 |
| P2734/pENTR223-DNAJB4人源基因质粒 |
| P2734/pENTR223-DNAJB4人源基因质粒 |
| P2734/pENTR223-DNAJB4人源基因质粒 |
| P2734/pENTR223-DNAJB4人源基因质粒 |
| P2734/pENTR223-DNAJB4人源基因质粒 |
| P2734/pENTR223-DNAJB4人源基因质粒 |
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文献和实验相关实验
1、质粒的概念 质粒（Plasmid）是一种存在于细菌、酵母等微生物细胞中的小型环状双链 DNA 分子，能够独立于宿主染色体进行自我复制，并通常携带对宿主生存非必需但具有特定功能的基因（如抗生素抗性基因）。质粒是分子生物学和基因工程中最重要的工具之一。 质粒根据其用途可以分为多种不同的类型，如用于保存序列信息的克隆质粒（如：pUC 系列质粒），用于表达蛋白的质粒（如哺乳动物细胞表达所用的 pcDNA3.1 系列质粒），用于基因编辑的质粒（如哺乳动物细胞基因编辑所用的 espCas9-2A
基因。实验报告基因用于测试实验条件下基因的表达，而对照报告基因作为内对照，以使实验报告基因测试的结果归一化。作归一化可消除实验过程中减弱实验准确度的变化，如培养细胞的数量、细胞转染 及裂解的效率等。在研究转录调控启动子活性中，具体实验步骤如下。 1. 质粒转染细胞 1) 细胞 铺板：将细胞按70%的汇合度接种到96孔板。 2) 转染：16h后转染萤光素酶报告基因 质粒和RNA，每个样品设置6个复孔 a) 配制DNA和转染试剂 : 96孔板转染质粒时
片段大小。 质粒一般只能容纳小于 10Kb 的外源 DNA 片段。一般来说，外源 DNA 片段越长，越难插入，越不稳定，转化效率越低。 第五步：是否含有表达系统元件。 即启动子－核糖体结合位点－克隆位点－转录终止信号。这是用来区别克隆载体与表达载体。克隆载体中加入一些与表达调控有关的元件即成为表达载体。选用那种载体，还是要以实验目的为准绳。 启动子－核糖体结合位点－克隆位点－转录终止信号 启动子－促进 DNA 转录的 DNA 顺序，这个 DNA 区域常在基因或操纵子编码
pTRE2pur哺乳调控质粒
￥100 - 1000
