- ￥100 - 1000
- Xybio
- 上海
- P0543
- 2025年07月10日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pAX01-PPK
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
名称：pAX01-PPK大肠基因质粒
别称: pAX01-PPK
启动子：xylA
复制子: repB
质粒分类: 基因文库质粒
原核抗性: Amp
筛选标记：Erm
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：枯草杆菌
载体用途：蛋白表达
基因种属：大肠杆菌
基因类型：ORF
原核抗性：Amp
真核抗性：
荧光蛋白：
质粒简介
pAX01-PPK质粒由上海烜雅生物科技有限公司提供
质粒图谱
质粒序列：详询
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P3716/pCMV-SPORT6-AGT人源基因质粒 |
| P3717/pCMV-SPORT6-C11orf54人源基因质粒 |
| P3718/pCMV-SPORT6-C14orf104人源基因质粒 |
| P3719/pCMV-SPORT6-TIMD4-T719C人源基因质粒 |
| P4952/pCMV-SPORT6-EIF1AX人源基因质粒 |
| P4953/pCMV-SPORT6-SFTA2（1同义突变）人源基因质粒 |
| P4959/pCMV-SPORT6-UBE3B人源基因质粒 |
| P3720/pCMV-SPORT6-SLC25A4人源基因质粒 |
| P3721/pCMV-SPORT6-GLOD4人源基因质粒 |
| P3722/pCMV-SPORT6-SSBP1人源基因质粒 |
| P3723/pCMV-SPORT6-ATAD2（1-2720bp）人源基因质粒 |
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文献和实验生素都不敏感，比如它的质粒上就没有发现碳青霉烯酶。所以，对于碳青霉烯类抗生素，它无力抵抗。也就是对于 MCR-1 基因本身而言，它并不是无所畏惧的。但是值得注意的是它在大肠杆菌菌株之间的传递速率（MCR-1 基因在不同细菌之间的复制和转移）是非常高的。倘若在 MCR-1 传递的过程中形成一个携带 MCR-1 的细菌又有其他的耐药基因，并对所有药物耐药，那么就可能真的无药可用，成为一个超级耐药菌，这种情况是非常少见的。那对于全世界来说将是一个「SAD STORY」。就目前来看虽然已有 28 个国家宣布发现
需求来确定所用的模板质粒。重组质粒载体构建可以经过酶切酶连、无缝克隆、Gateway 克隆等方式将目的片段连接到目标载体上，或者对载体上的一些元件进行改造。改造好的质粒转入大肠杆菌中进行扩增及抽提。 3、质粒抽提的一般操作流程 从培养的大肠杆菌中抽提质粒，一般需要经过大肠杆菌培养、菌液收集、菌体裂解、基因组 DNA 及蛋白沉淀、质粒吸附、质粒漂洗、质粒洗脱、质粒检测、质粒保存等流程。 内容来源：QIAGEN 凯杰
1. 琼脂糖凝胶电泳检测质粒为何有三条条带 通常完整的质粒电泳会看到多个电泳条带，这与质粒的多种形态有关。质粒可以有超螺旋，线性，开环等多种不同的形态，所以在电泳时常看到三条不同大小的条带，而最下面最亮的条带一般为超螺旋条带。 左图为电镜下的质粒形态，可以看到质粒有不同程度的超螺旋形态；右图为质粒电泳图 2. 质粒纯度不好 质粒中常见的污染杂质有蛋白质、基因组 DNA、RNA、乙醇等。这些杂质有可能是质粒提取过程中操作不当有关，比如： ①在加入裂解缓冲液后，剧烈震荡导致大肠杆菌基因
