pAX01-PPK大肠基因质粒

调皮的基因——人类的「生死簿」

生素都不敏感，比如它的质粒上就没有发现碳青霉烯酶。所以，对于碳青霉烯类抗生素，它无力抵抗。也就是对于 MCR-1 基因本身而言，它并不是无所畏惧的。但是值得注意的是它在大肠杆菌菌株之间的传递速率（MCR-1 基因在不同细菌之间的复制和转移）是非常高的。倘若在 MCR-1 传递的过程中形成一个携带 MCR-1 的细菌又有其他的耐药基因，并对所有药物耐药，那么就可能真的无药可用，成为一个超级耐药菌，这种情况是非常少见的。那对于全世界来说将是一个「SAD STORY」。就目前来看虽然已有 28 个国家宣布发现

质粒构建及提取概述

需求来确定所用的模板质粒。重组质粒载体构建可以经过酶切酶连、无缝克隆、Gateway 克隆等方式将目的片段连接到目标载体上，或者对载体上的一些元件进行改造。改造好的质粒转入大肠杆菌中进行扩增及抽提。 3、质粒抽提的一般操作流程 从培养的大肠杆菌中抽提质粒，一般需要经过大肠杆菌培养、菌液收集、菌体裂解、基因组 DNA 及蛋白沉淀、质粒吸附、质粒漂洗、质粒洗脱、质粒检测、质粒保存等流程。   内容来源：QIAGEN 凯杰

结果分析篇

1. 琼脂糖凝胶电泳检测质粒为何有三条条带 通常完整的质粒电泳会看到多个电泳条带，这与质粒的多种形态有关。质粒可以有超螺旋，线性，开环等多种不同的形态，所以在电泳时常看到三条不同大小的条带，而最下面最亮的条带一般为超螺旋条带。 左图为电镜下的质粒形态，可以看到质粒有不同程度的超螺旋形态；右图为质粒电泳图   2. 质粒纯度不好 质粒中常见的污染杂质有蛋白质、基因组 DNA、RNA、乙醇等。这些杂质有可能是质粒提取过程中操作不当有关，比如： ①在加入裂解缓冲液后，剧烈震荡导致大肠杆菌基因