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- P1157
- 2026年04月17日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pET28a-PPK
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pET28a-PPK大肠基因质粒
别称: pET28a-PPK
启动子：T7
复制子: pBR322
终止子: T7 terminator
质粒分类: 基因文库质粒；其它基因质粒；其它种源质粒
质粒大小：7297bp
质粒标签：C-6×His
原核抗性: Kan
筛选标记：G418
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：大肠杆菌
载体用途：蛋白表达
基因种属：大肠杆菌
基因类型：ORF
原核抗性：Kan
真核抗性：
荧光蛋白：
质粒简介
pET28a-PPK质粒可以转化到含DE3的大肠杆菌中，通过IPTG的诱导表达PPK基因。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 7297 bp ds-DNA circular SYN 15-AUG-2017
DEFINITION synthetic circular DNA
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..7297
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
terminator 26..73
/label=T7 terminator
/note="transcription terminator for bacteriophage T7 RNA
polymerase"
CDS complement(140..157)
/codon_start=1
/product="6xHis affinity tag"
/label=6xHis
/translation="HHHHHH"
misc_feature complement(164..2227)
/label=PPK
RBS 2234..2256
/note="efficient ribosome binding site from bacteriophage
T7 gene 10 (Olins and Rangwala, 1989)"
protein_bind 2271..2295
/label=lac operator
/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
promoter complement(2296..2314)
/label=T7 promoter
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
promoter 2623..2700
/gene="lacI"
/label=lacI promoter
CDS 2701..3783
/codon_start=1
/gene="lacI"
/product="lac repressor"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
/translation="MKPVTLYDVAEYAGVSYQTVSRVVNQASHVSAKTREKVEAAMAEL
NYIPNRVAQQLAGKQSLLIGVATSSLALHAPSQIVAAIKSRADQLGASVVVSMVERSGV
EACKAAVHNLLAQRVSGLIINYPLDDQDAIAVEAACTNVPALFLDVSDQTPINSIIFSH
EDGTRLGVEHLVALGHQQIALLAGPLSSVSARLRLAGWHKYLTRNQIQPIAEREGDWSA
MSGFQQTMQMLNEGIVPTAMLVANDQMALGAMRAITESGLRVGADISVVGYDDTEDSSC
YIPPLTTIKQDFRLLGQTSVDRLLQLSQGQAVKGNQLLPVSLVKRKTTLAPNTQTASPR
ALADSLMQLARQVSRLESGQ"
CDS 4592..4783
/codon_start=1
/gene="rop"
/product="Rop protein, which maintains plasmids at low copy
number"
/translation="MTKQEKTALNMARFIRSQTLTLLEKLNELDADEQADICESLHDHA
DELYRSCLARFGDDGENL"
misc_feature 4885..5027
/label=bom
/note="basis of mobility region from pBR322"
rep_origin complement(5213..5801)
/direction=LEFT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS 5923..6738
/codon_start=1
/gene="aph(3')-Ia"
/product="aminoglycoside phosphotransferase"
/label=KanR
/note="confers resistance to kanamycin in bacteria or G418
(Geneticin(R)) in eukaryotes"
/translation="MSHIQRETSCSRPRLNSNMDADLYGYKWARDNVGQSGATIYRLYG
KPDAPELFLKHGKGSVANDVTDEMVRLNWLTEFMPLPTIKHFIRTPDDAWLLTTAIPGK
TAFQVLEEYPDSGENIVDALAVFLRRLHSIPVCNCPFNSDRVFRLAQAQSRMNNGLVDA
SDFDDERNGWPVEQVWKEMHKLLPFSPDSVVTHGDFSLDNLIFDEGKLIGCIDVGRVGI
ADRYQDLAILWNCLGEFSPSLQKRLFQKYGIDNPDMNKLQFHLMLDEFF"
rep_origin complement(6831..7286)
/direction=LEFT
/label=f1 ori
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
ORIGIN
1 atccggatat agttcctcct ttcagcaaaa aacccctcaa gacccgttta gaggccccaa
61 ggggttatgc tagttattgc tcagcggtgg cagcagccaa ctcagcttcc tttcgggctt
121 tgttagcagc cggatctcag tggtggtggt ggtggtgctc gagttcaggt tgttcaagag
181 atttgatgta atcgtagata gcaagttgag cacgaacttt acgacggttg ccacgaggaa
241 cgtaacggtt agaaagttct ttatcgatgt aacgagcttt aactgtatca gagaaaagga
301 tatcgatgat atcaagaaca cgttgtttaa gacgaggatc aagaagaggt gtagcaactt
361 cgatacggta atcgatgtta cgtgtcatcc aatcagcaga agaaaggtaa acttttttat
421 cgccgccgtt ttcgaagatg taaacacgat catgttcaag gtaacgatca acgatagaga
481 tagcacggat gttatcagag atgccttcaa ggttagggat aagagagcac atgccacgaa
541 caagaaggtt aacaggaacg ccagaagaag aagcagcgta aagacgatca acaaggcctt
601 tatcaacaag gttgttaagt ttaagtgtga tgccagaagg aaggccttgt tgagcgttag
661 cgatttcacg atcaaccatt tcgtaaagaa gacgacgaga gttttgagga gaaaccataa
721 ggtaatcgaa tgtaacagga cggtaagggt tttcgatgaa gttgaaaaca cgacgaactt
781 cgtttgtgat acgagcatca gctgtaagaa gagagtaatc tgtgtaaaga cgagctgttt
841 tttcgttgaa gttgcctgtg ccgatatgag cgtaacgaac aacttcgccg ttttctttac
901 gagagataag gaaaagttta gcatggattt taaggccagg agcagagaag ataacatgaa
961 cgccagcttc tgtaagacgt ttagcccaat ggatgttagc ttcttcatcg aaacgagctt
1021 gaagttcaac aacaactgta acttttttgc cgttatgagc agcatggatc atagaatcga
1081 tgatacgaga atctttagca acacggtaga tgttgatttt gatagcaaga acagaaggat
1141 cgaaagaagc ttgacgaaga agttcaagaa catgttcgaa tgtatggtaa gggtagtaaa
1201 gaagaacatc acgttcacgg atagcatcga agccgttacg gaattgagct ttatcgaacc
1261 agatatgacg aagacgagga agaggtttgt taacaaggtt agctttgcca acgttaggga
1321 agttgatgaa atctttgaag ttatggtaac ggccgccagg aacgatagaa tcgtaacgag
1381 agattgtaag tttttcacga agaacttcaa caagagcgtt aggcatatca cgttggtaaa
1441 cgaaacgaac aggttcagct gtaagacgtt gtttaagaga agaagacata agttccataa
1501 gagaagcttc catttcatga acaagatcgt attcagcatc acgtgtcatt ttcatagagt
1561 aagcgttaag agcatcgtaa tcgaagaagc ctttgaagat atcatcaagg cagtaacgaa
1621 ggatgttatc aagaaggatc ataggtttac gacgacgagg agcttcagga ggaaggttaa
1681 cgaaacgagg aactttatca gaagggattt caagaagagc gtaacggatt gtatcgccac
1741 ggatgatttc aacagcaagg tatgtgtaat catctttaag gaattgaaca agatctgtat
1801 cagggttgat aaggataggt gtgatatgtt gacgaaggta ttgtttgaag taatgacgaa
1861 gccagttttg ttggttaaca gaaagttgac gttcgttgat aaggaagatt tggttacgag
1921 ccatttcaag aagaagttcg ttgtaaaggc catcgaattc ttgatcagct ttaagaacac
1981 gagattggat tttgccaaga agatgacgag aatgagagtt agagccttgt tcttcagaga
2041 tgatgatacg acgtttaagt tcagcgaaac gaactttgta gaattcatca aggttgttag
2101 agtagatgcc aaggaaacgc atacgttcga taagagggtt agatttatca gcagcttctt
2161 gaagaacacg ttcgttgaaa gaaagccaag aaagttcttt ttcgatgtaa agtttttctt
2221 ggcccatggt atatctcctt cttaaagtta aacaaaatta tttctagagg ggaattgtta
2281 tccgctcaca attcccctat agtgagtcgt attaatttcg cgggatcgag atctcgatcc
2341 tctacgccgg acgcatcgtg gccggcatca ccggcgccac aggtgcggtt gctggcgcct
2401 atatcgccga catcaccgat ggggaagatc gggctcgcca cttcgggctc atgagcgctt
2461 gtttcggcgt gggtatggtg gcaggccccg tggccggggg actgttgggc gccatctcct
2521 tgcatgcacc attccttgcg gcggcggtgc tcaacggcct caacctacta ctgggctgct
2581 tcctaatgca ggagtcgcat aagggagagc gtcgagatcc cggacaccat cgaatggcgc
2641 aaaacctttc gcggtatggc atgatagcgc ccggaagaga gtcaattcag ggtggtgaat
2701 gtgaaaccag taacgttata cgatgtcgca gagtatgccg gtgtctctta tcagaccgtt
2761 tcccgcgtgg tgaaccaggc cagccacgtt tctgcgaaaa cgcgggaaaa agtggaagcg
2821 gcgatggcgg agctgaatta cattcccaac cgcgtggcac aacaactggc gggcaaacag
2881 tcgttgctga ttggcgttgc cacctccagt ctggccctgc acgcgccgtc gcaaattgtc
2941 gcggcgatta aatctcgcgc cgatcaactg ggtgccagcg tggtggtgtc gatggtagaa
3001 cgaagcggcg tcgaagcctg taaagcggcg gtgcacaatc ttctcgcgca acgcgtcagt
3061 gggctgatca ttaactatcc gctggatgac caggatgcca ttgctgtgga agctgcctgc
3121 actaatgttc cggcgttatt tcttgatgtc tctgaccaga cacccatcaa cagtattatt
3181 ttctcccatg aagacggtac gcgactgggc gtggagcatc tggtcgcatt gggtcaccag
3241 caaatcgcgc tgttagcggg cccattaagt tctgtctcgg cgcgtctgcg tctggctggc
3301 tggcataaat atctcactcg caatcaaatt cagccgatag cggaacggga aggcgactgg
3361 agtgccatgt ccggttttca acaaaccatg caaatgctga atgagggcat cgttcccact
3421 gcgatgctgg ttgccaacga tcagatggcg ctgggcgcaa tgcgcgccat taccgagtcc
3481 gggctgcgcg ttggtgcgga tatctcggta gtgggatacg acgataccga agacagctca
3541 tgttatatcc cgccgttaac caccatcaaa caggattttc gcctgctggg gcaaaccagc
3601 gtggaccgct tgctgcaact ctctcagggc caggcggtga agggcaatca gctgttgccc
3661 gtctcactgg tgaaaagaaa aaccaccctg gcgcccaata cgcaaaccgc ctctccccgc
3721 gcgttggccg attcattaat gcagctggca cgacaggttt cccgactgga aagcgggcag
3781 tgagcgcaac gcaattaatg taagttagct cactcattag gcaccgggat ctcgaccgat
3841 gcccttgaga gccttcaacc cagtcagctc cttccggtgg gcgcggggca tgactatcgt
3901 cgccgcactt atgactgtct tctttatcat gcaactcgta ggacaggtgc cggcagcgct
3961 ctgggtcatt ttcggcgagg accgctttcg ctggagcgcg acgatgatcg gcctgtcgct
4021 tgcggtattc ggaatcttgc acgccctcgc tcaagccttc gtcactggtc ccgccaccaa
4081 acgtttcggc gagaagcagg ccattatcgc cggcatggcg gccccacggg tgcgcatgat
4141 cgtgctcctg tcgttgagga cccggctagg ctggcggggt tgccttactg gttagcagaa
4201 tgaatcaccg atacgcgagc gaacgtgaag cgactgctgc tgcaaaacgt ctgcgacctg
4261 agcaacaaca tgaatggtct tcggtttccg tgtttcgtaa agtctggaaa cgcggaagtc
4321 agcgccctgc accattatgt tccggatctg catcgcagga tgctgctggc taccctgtgg
4381 aacacctaca tctgtattaa cgaagcgctg gcattgaccc tgagtgattt ttctctggtc
4441 ccgccgcatc cataccgcca gttgtttacc ctcacaacgt tccagtaacc gggcatgttc
4501 atcatcagta acccgtatcg tgagcatcct ctctcgtttc atcggtatca ttacccccat
4561 gaacagaaat cccccttaca cggaggcatc agtgaccaaa caggaaaaaa ccgcccttaa
4621 catggcccgc tttatcagaa gccagacatt aacgcttctg gagaaactca acgagctgga
4681 cgcggatgaa caggcagaca tctgtgaatc gcttcacgac cacgctgatg agctttaccg
4741 cagctgcctc gcgcgtttcg gtgatgacgg tgaaaacctc tgacacatgc agctcccgga
4801 gacggtcaca gcttgtctgt aagcggatgc cgggagcaga caagcccgtc agggcgcgtc
4861 agcgggtgtt ggcgggtgtc ggggcgcagc catgacccag tcacgtagcg atagcggagt
4921 gtatactggc ttaactatgc ggcatcagag cagattgtac tgagagtgca ccatatatgc
4981 ggtgtgaaat accgcacaga tgcgtaagga gaaaataccg catcaggcgc tcttccgctt
5041 cctcgctcac tgactcgctg cgctcggtcg ttcggctgcg gcgagcggta tcagctcact
5101 caaaggcggt aatacggtta tccacagaat caggggataa cgcaggaaag aacatgtgag
5161 caaaaggcca gcaaaaggcc aggaaccgta aaaaggccgc gttgctggcg tttttccata
5221 ggctccgccc ccctgacgag catcacaaaa atcgacgctc aagtcagagg tggcgaaacc
5281 cgacaggact ataaagatac caggcgtttc cccctggaag ctccctcgtg cgctctcctg
5341 ttccgaccct gccgcttacc ggatacctgt ccgcctttct cccttcggga agcgtggcgc
5401 tttctcatag ctcacgctgt aggtatctca gttcggtgta ggtcgttcgc tccaagctgg
5461 gctgtgtgca cgaacccccc gttcagcccg accgctgcgc cttatccggt aactatcgtc
5521 ttgagtccaa cccggtaaga cacgacttat cgccactggc agcagccact ggtaacagga
5581 ttagcagagc gaggtatgta ggcggtgcta cagagttctt gaagtggtgg cctaactacg
5641 gctacactag aaggacagta tttggtatct gcgctctgct gaagccagtt accttcggaa
5701 aaagagttgg tagctcttga tccggcaaac aaaccaccgc tggtagcggt ggtttttttg
5761 tttgcaagca gcagattacg cgcagaaaaa aaggatctca agaagatcct ttgatctttt
5821 ctacggggtc tgacgctcag tggaacgaaa actcacgtta agggattttg gtcatgaaca
5881 ataaaactgt ctgcttacat aaacagtaat acaaggggtg ttatgagcca tattcaacgg
5941 gaaacgtctt gctctaggcc gcgattaaat tccaacatgg atgctgattt atatgggtat
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6061 cccgatgcgc cagagttgtt tctgaaacat ggcaaaggta gcgttgccaa tgatgttaca
6121 gatgagatgg tcagactaaa ctggctgacg gaatttatgc ctcttccgac catcaagcat
6181 tttatccgta ctcctgatga tgcatggtta ctcaccactg cgatccccgg gaaaacagca
6241 ttccaggtat tagaagaata tcctgattca ggtgaaaata ttgttgatgc gctggcagtg
6301 ttcctgcgcc ggttgcattc gattcctgtt tgtaattgtc cttttaacag cgatcgcgta
6361 tttcgtctcg ctcaggcgca atcacgaatg aataacggtt tggttgatgc gagtgatttt
6421 gatgacgagc gtaatggctg gcctgttgaa caagtctgga aagaaatgca taaacttttg
6481 ccattctcac cggattcagt cgtcactcat ggtgatttct cacttgataa ccttattttt
6541 gacgagggga aattaatagg ttgtattgat gttggacgag tcggaatcgc agaccgatac
6601 caggatcttg ccatcctatg gaactgcctc ggtgagtttt ctccttcatt acagaaacgg
6661 ctttttcaaa aatatggtat tgataatcct gatatgaata aattgcagtt tcatttgatg
6721 ctcgatgagt ttttctaaga attaattcat gagcggatac atatttgaat gtatttagaa
6781 aaataaacaa ataggggttc cgcgcacatt tccccgaaaa gtgccacctg aaattgtaaa
6841 cgttaatatt ttgttaaaat tcgcgttaaa tttttgttaa atcagctcat tttttaacca
6901 ataggccgaa atcggcaaaa tcccttataa atcaaaagaa tagaccgaga tagggttgag
6961 tgttgttcca gtttggaaca agagtccact attaaagaac gtggactcca acgtcaaagg
7021 gcgaaaaacc gtctatcagg gcgatggccc actacgtgaa ccatcaccct aatcaagttt
7081 tttggggtcg aggtgccgta aagcactaaa tcggaaccct aaagggagcc cccgatttag
7141 agcttgacgg ggaaagccgg cgaacgtggc gagaaaggaa gggaagaaag cgaaaggagc
7201 gggcgctagg gcgctggcaa gtgtagcggt cacgctgcgc gtaaccacca cacccgccgc
7261 gcttaatgcg ccgctacagg gcgcgtccca ttcgcca
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pET28a-PPK大肠基因质粒
别称: pET28a-PPK
启动子：T7
复制子: pBR322
终止子: T7 terminator
质粒分类: 基因文库质粒；其它基因质粒；其它种源质粒
质粒大小：7297bp
质粒标签：C-6×His
原核抗性: Kan
筛选标记：G418
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
| 表达宿主: | BL21(DE3)大肠杆菌 |
|---|---|
| 培养条件: | 37℃，有氧，LB |
| 诱导方式: | IPTG或乳糖及其类似物 |
质粒属性
载体宿主：大肠杆菌
载体用途：蛋白表达
基因种属：大肠杆菌
基因类型：ORF
原核抗性：Kan
真核抗性：
荧光蛋白：
质粒简介
pET28a-PPK质粒可以转化到含DE3的大肠杆菌中，通过IPTG的诱导表达PPK基因。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 7297 bp ds-DNA circular SYN 15-AUG-2017
DEFINITION synthetic circular DNA
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..7297
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
terminator 26..73
/label=T7 terminator
/note="transcription terminator for bacteriophage T7 RNA
polymerase"
CDS complement(140..157)
/codon_start=1
/product="6xHis affinity tag"
/label=6xHis
/translation="HHHHHH"
misc_feature complement(164..2227)
/label=PPK
RBS 2234..2256
/note="efficient ribosome binding site from bacteriophage
T7 gene 10 (Olins and Rangwala, 1989)"
protein_bind 2271..2295
/label=lac operator
/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
promoter complement(2296..2314)
/label=T7 promoter
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
promoter 2623..2700
/gene="lacI"
/label=lacI promoter
CDS 2701..3783
/codon_start=1
/gene="lacI"
/product="lac repressor"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
/translation="MKPVTLYDVAEYAGVSYQTVSRVVNQASHVSAKTREKVEAAMAEL
NYIPNRVAQQLAGKQSLLIGVATSSLALHAPSQIVAAIKSRADQLGASVVVSMVERSGV
EACKAAVHNLLAQRVSGLIINYPLDDQDAIAVEAACTNVPALFLDVSDQTPINSIIFSH
EDGTRLGVEHLVALGHQQIALLAGPLSSVSARLRLAGWHKYLTRNQIQPIAEREGDWSA
MSGFQQTMQMLNEGIVPTAMLVANDQMALGAMRAITESGLRVGADISVVGYDDTEDSSC
YIPPLTTIKQDFRLLGQTSVDRLLQLSQGQAVKGNQLLPVSLVKRKTTLAPNTQTASPR
ALADSLMQLARQVSRLESGQ"
CDS 4592..4783
/codon_start=1
/gene="rop"
/product="Rop protein, which maintains plasmids at low copy
number"
/translation="MTKQEKTALNMARFIRSQTLTLLEKLNELDADEQADICESLHDHA
DELYRSCLARFGDDGENL"
misc_feature 4885..5027
/label=bom
/note="basis of mobility region from pBR322"
rep_origin complement(5213..5801)
/direction=LEFT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS 5923..6738
/codon_start=1
/gene="aph(3')-Ia"
/product="aminoglycoside phosphotransferase"
/label=KanR
/note="confers resistance to kanamycin in bacteria or G418
(Geneticin(R)) in eukaryotes"
/translation="MSHIQRETSCSRPRLNSNMDADLYGYKWARDNVGQSGATIYRLYG
KPDAPELFLKHGKGSVANDVTDEMVRLNWLTEFMPLPTIKHFIRTPDDAWLLTTAIPGK
TAFQVLEEYPDSGENIVDALAVFLRRLHSIPVCNCPFNSDRVFRLAQAQSRMNNGLVDA
SDFDDERNGWPVEQVWKEMHKLLPFSPDSVVTHGDFSLDNLIFDEGKLIGCIDVGRVGI
ADRYQDLAILWNCLGEFSPSLQKRLFQKYGIDNPDMNKLQFHLMLDEFF"
rep_origin complement(6831..7286)
/direction=LEFT
/label=f1 ori
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
ORIGIN
1 atccggatat agttcctcct ttcagcaaaa aacccctcaa gacccgttta gaggccccaa
61 ggggttatgc tagttattgc tcagcggtgg cagcagccaa ctcagcttcc tttcgggctt
121 tgttagcagc cggatctcag tggtggtggt ggtggtgctc gagttcaggt tgttcaagag
181 atttgatgta atcgtagata gcaagttgag cacgaacttt acgacggttg ccacgaggaa
241 cgtaacggtt agaaagttct ttatcgatgt aacgagcttt aactgtatca gagaaaagga
301 tatcgatgat atcaagaaca cgttgtttaa gacgaggatc aagaagaggt gtagcaactt
361 cgatacggta atcgatgtta cgtgtcatcc aatcagcaga agaaaggtaa acttttttat
421 cgccgccgtt ttcgaagatg taaacacgat catgttcaag gtaacgatca acgatagaga
481 tagcacggat gttatcagag atgccttcaa ggttagggat aagagagcac atgccacgaa
541 caagaaggtt aacaggaacg ccagaagaag aagcagcgta aagacgatca acaaggcctt
601 tatcaacaag gttgttaagt ttaagtgtga tgccagaagg aaggccttgt tgagcgttag
661 cgatttcacg atcaaccatt tcgtaaagaa gacgacgaga gttttgagga gaaaccataa
721 ggtaatcgaa tgtaacagga cggtaagggt tttcgatgaa gttgaaaaca cgacgaactt
781 cgtttgtgat acgagcatca gctgtaagaa gagagtaatc tgtgtaaaga cgagctgttt
841 tttcgttgaa gttgcctgtg ccgatatgag cgtaacgaac aacttcgccg ttttctttac
901 gagagataag gaaaagttta gcatggattt taaggccagg agcagagaag ataacatgaa
961 cgccagcttc tgtaagacgt ttagcccaat ggatgttagc ttcttcatcg aaacgagctt
1021 gaagttcaac aacaactgta acttttttgc cgttatgagc agcatggatc atagaatcga
1081 tgatacgaga atctttagca acacggtaga tgttgatttt gatagcaaga acagaaggat
1141 cgaaagaagc ttgacgaaga agttcaagaa catgttcgaa tgtatggtaa gggtagtaaa
1201 gaagaacatc acgttcacgg atagcatcga agccgttacg gaattgagct ttatcgaacc
1261 agatatgacg aagacgagga agaggtttgt taacaaggtt agctttgcca acgttaggga
1321 agttgatgaa atctttgaag ttatggtaac ggccgccagg aacgatagaa tcgtaacgag
1381 agattgtaag tttttcacga agaacttcaa caagagcgtt aggcatatca cgttggtaaa
1441 cgaaacgaac aggttcagct gtaagacgtt gtttaagaga agaagacata agttccataa
1501 gagaagcttc catttcatga acaagatcgt attcagcatc acgtgtcatt ttcatagagt
1561 aagcgttaag agcatcgtaa tcgaagaagc ctttgaagat atcatcaagg cagtaacgaa
1621 ggatgttatc aagaaggatc ataggtttac gacgacgagg agcttcagga ggaaggttaa
1681 cgaaacgagg aactttatca gaagggattt caagaagagc gtaacggatt gtatcgccac
1741 ggatgatttc aacagcaagg tatgtgtaat catctttaag gaattgaaca agatctgtat
1801 cagggttgat aaggataggt gtgatatgtt gacgaaggta ttgtttgaag taatgacgaa
1861 gccagttttg ttggttaaca gaaagttgac gttcgttgat aaggaagatt tggttacgag
1921 ccatttcaag aagaagttcg ttgtaaaggc catcgaattc ttgatcagct ttaagaacac
1981 gagattggat tttgccaaga agatgacgag aatgagagtt agagccttgt tcttcagaga
2041 tgatgatacg acgtttaagt tcagcgaaac gaactttgta gaattcatca aggttgttag
2101 agtagatgcc aaggaaacgc atacgttcga taagagggtt agatttatca gcagcttctt
2161 gaagaacacg ttcgttgaaa gaaagccaag aaagttcttt ttcgatgtaa agtttttctt
2221 ggcccatggt atatctcctt cttaaagtta aacaaaatta tttctagagg ggaattgtta
2281 tccgctcaca attcccctat agtgagtcgt attaatttcg cgggatcgag atctcgatcc
2341 tctacgccgg acgcatcgtg gccggcatca ccggcgccac aggtgcggtt gctggcgcct
2401 atatcgccga catcaccgat ggggaagatc gggctcgcca cttcgggctc atgagcgctt
2461 gtttcggcgt gggtatggtg gcaggccccg tggccggggg actgttgggc gccatctcct
2521 tgcatgcacc attccttgcg gcggcggtgc tcaacggcct caacctacta ctgggctgct
2581 tcctaatgca ggagtcgcat aagggagagc gtcgagatcc cggacaccat cgaatggcgc
2641 aaaacctttc gcggtatggc atgatagcgc ccggaagaga gtcaattcag ggtggtgaat
2701 gtgaaaccag taacgttata cgatgtcgca gagtatgccg gtgtctctta tcagaccgtt
2761 tcccgcgtgg tgaaccaggc cagccacgtt tctgcgaaaa cgcgggaaaa agtggaagcg
2821 gcgatggcgg agctgaatta cattcccaac cgcgtggcac aacaactggc gggcaaacag
2881 tcgttgctga ttggcgttgc cacctccagt ctggccctgc acgcgccgtc gcaaattgtc
2941 gcggcgatta aatctcgcgc cgatcaactg ggtgccagcg tggtggtgtc gatggtagaa
3001 cgaagcggcg tcgaagcctg taaagcggcg gtgcacaatc ttctcgcgca acgcgtcagt
3061 gggctgatca ttaactatcc gctggatgac caggatgcca ttgctgtgga agctgcctgc
3121 actaatgttc cggcgttatt tcttgatgtc tctgaccaga cacccatcaa cagtattatt
3181 ttctcccatg aagacggtac gcgactgggc gtggagcatc tggtcgcatt gggtcaccag
3241 caaatcgcgc tgttagcggg cccattaagt tctgtctcgg cgcgtctgcg tctggctggc
3301 tggcataaat atctcactcg caatcaaatt cagccgatag cggaacggga aggcgactgg
3361 agtgccatgt ccggttttca acaaaccatg caaatgctga atgagggcat cgttcccact
3421 gcgatgctgg ttgccaacga tcagatggcg ctgggcgcaa tgcgcgccat taccgagtcc
3481 gggctgcgcg ttggtgcgga tatctcggta gtgggatacg acgataccga agacagctca
3541 tgttatatcc cgccgttaac caccatcaaa caggattttc gcctgctggg gcaaaccagc
3601 gtggaccgct tgctgcaact ctctcagggc caggcggtga agggcaatca gctgttgccc
3661 gtctcactgg tgaaaagaaa aaccaccctg gcgcccaata cgcaaaccgc ctctccccgc
3721 gcgttggccg attcattaat gcagctggca cgacaggttt cccgactgga aagcgggcag
3781 tgagcgcaac gcaattaatg taagttagct cactcattag gcaccgggat ctcgaccgat
3841 gcccttgaga gccttcaacc cagtcagctc cttccggtgg gcgcggggca tgactatcgt
3901 cgccgcactt atgactgtct tctttatcat gcaactcgta ggacaggtgc cggcagcgct
3961 ctgggtcatt ttcggcgagg accgctttcg ctggagcgcg acgatgatcg gcctgtcgct
4021 tgcggtattc ggaatcttgc acgccctcgc tcaagccttc gtcactggtc ccgccaccaa
4081 acgtttcggc gagaagcagg ccattatcgc cggcatggcg gccccacggg tgcgcatgat
4141 cgtgctcctg tcgttgagga cccggctagg ctggcggggt tgccttactg gttagcagaa
4201 tgaatcaccg atacgcgagc gaacgtgaag cgactgctgc tgcaaaacgt ctgcgacctg
4261 agcaacaaca tgaatggtct tcggtttccg tgtttcgtaa agtctggaaa cgcggaagtc
4321 agcgccctgc accattatgt tccggatctg catcgcagga tgctgctggc taccctgtgg
4381 aacacctaca tctgtattaa cgaagcgctg gcattgaccc tgagtgattt ttctctggtc
4441 ccgccgcatc cataccgcca gttgtttacc ctcacaacgt tccagtaacc gggcatgttc
4501 atcatcagta acccgtatcg tgagcatcct ctctcgtttc atcggtatca ttacccccat
4561 gaacagaaat cccccttaca cggaggcatc agtgaccaaa caggaaaaaa ccgcccttaa
4621 catggcccgc tttatcagaa gccagacatt aacgcttctg gagaaactca acgagctgga
4681 cgcggatgaa caggcagaca tctgtgaatc gcttcacgac cacgctgatg agctttaccg
4741 cagctgcctc gcgcgtttcg gtgatgacgg tgaaaacctc tgacacatgc agctcccgga
4801 gacggtcaca gcttgtctgt aagcggatgc cgggagcaga caagcccgtc agggcgcgtc
4861 agcgggtgtt ggcgggtgtc ggggcgcagc catgacccag tcacgtagcg atagcggagt
4921 gtatactggc ttaactatgc ggcatcagag cagattgtac tgagagtgca ccatatatgc
4981 ggtgtgaaat accgcacaga tgcgtaagga gaaaataccg catcaggcgc tcttccgctt
5041 cctcgctcac tgactcgctg cgctcggtcg ttcggctgcg gcgagcggta tcagctcact
5101 caaaggcggt aatacggtta tccacagaat caggggataa cgcaggaaag aacatgtgag
5161 caaaaggcca gcaaaaggcc aggaaccgta aaaaggccgc gttgctggcg tttttccata
5221 ggctccgccc ccctgacgag catcacaaaa atcgacgctc aagtcagagg tggcgaaacc
5281 cgacaggact ataaagatac caggcgtttc cccctggaag ctccctcgtg cgctctcctg
5341 ttccgaccct gccgcttacc ggatacctgt ccgcctttct cccttcggga agcgtggcgc
5401 tttctcatag ctcacgctgt aggtatctca gttcggtgta ggtcgttcgc tccaagctgg
5461 gctgtgtgca cgaacccccc gttcagcccg accgctgcgc cttatccggt aactatcgtc
5521 ttgagtccaa cccggtaaga cacgacttat cgccactggc agcagccact ggtaacagga
5581 ttagcagagc gaggtatgta ggcggtgcta cagagttctt gaagtggtgg cctaactacg
5641 gctacactag aaggacagta tttggtatct gcgctctgct gaagccagtt accttcggaa
5701 aaagagttgg tagctcttga tccggcaaac aaaccaccgc tggtagcggt ggtttttttg
5761 tttgcaagca gcagattacg cgcagaaaaa aaggatctca agaagatcct ttgatctttt
5821 ctacggggtc tgacgctcag tggaacgaaa actcacgtta agggattttg gtcatgaaca
5881 ataaaactgt ctgcttacat aaacagtaat acaaggggtg ttatgagcca tattcaacgg
5941 gaaacgtctt gctctaggcc gcgattaaat tccaacatgg atgctgattt atatgggtat
6001 aaatgggctc gcgataatgt cgggcaatca ggtgcgacaa tctatcgatt gtatgggaag
6061 cccgatgcgc cagagttgtt tctgaaacat ggcaaaggta gcgttgccaa tgatgttaca
6121 gatgagatgg tcagactaaa ctggctgacg gaatttatgc ctcttccgac catcaagcat
6181 tttatccgta ctcctgatga tgcatggtta ctcaccactg cgatccccgg gaaaacagca
6241 ttccaggtat tagaagaata tcctgattca ggtgaaaata ttgttgatgc gctggcagtg
6301 ttcctgcgcc ggttgcattc gattcctgtt tgtaattgtc cttttaacag cgatcgcgta
6361 tttcgtctcg ctcaggcgca atcacgaatg aataacggtt tggttgatgc gagtgatttt
6421 gatgacgagc gtaatggctg gcctgttgaa caagtctgga aagaaatgca taaacttttg
6481 ccattctcac cggattcagt cgtcactcat ggtgatttct cacttgataa ccttattttt
6541 gacgagggga aattaatagg ttgtattgat gttggacgag tcggaatcgc agaccgatac
6601 caggatcttg ccatcctatg gaactgcctc ggtgagtttt ctccttcatt acagaaacgg
6661 ctttttcaaa aatatggtat tgataatcct gatatgaata aattgcagtt tcatttgatg
6721 ctcgatgagt ttttctaaga attaattcat gagcggatac atatttgaat gtatttagaa
6781 aaataaacaa ataggggttc cgcgcacatt tccccgaaaa gtgccacctg aaattgtaaa
6841 cgttaatatt ttgttaaaat tcgcgttaaa tttttgttaa atcagctcat tttttaacca
6901 ataggccgaa atcggcaaaa tcccttataa atcaaaagaa tagaccgaga tagggttgag
6961 tgttgttcca gtttggaaca agagtccact attaaagaac gtggactcca acgtcaaagg
7021 gcgaaaaacc gtctatcagg gcgatggccc actacgtgaa ccatcaccct aatcaagttt
7081 tttggggtcg aggtgccgta aagcactaaa tcggaaccct aaagggagcc cccgatttag
7141 agcttgacgg ggaaagccgg cgaacgtggc gagaaaggaa gggaagaaag cgaaaggagc
7201 gggcgctagg gcgctggcaa gtgtagcggt cacgctgcgc gtaaccacca cacccgccgc
7261 gcttaatgcg ccgctacagg gcgcgtccca ttcgcca
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P3693/pCMV-SPORT6-FRS3人源基因质粒 |
| P3694/pCMV-SPORT6-NDRG2（1点突变）人源基因质粒 |
| P3695/pCMV-SPORT6-TAZ人源基因质粒 |
| P3696/pCMV-SPORT6-BCAN（1点突变）人源基因质粒 |
| P3697/pCMV-SPORT6-TMEM248人源基因质粒 |
| P3698/pCMV-SPORT6-TUBA1B人源基因质粒 |
| P3699/pCMV-SPORT6-METTL18人源基因质粒 |
| P3700/pCMV-SPORT6-RSRC2人源基因质粒 |
| P3701/pCMV-SPORT6-GAPDH人源基因质粒 |
| P3702/pCMV-SPORT6-BRF2人源基因质粒 |
| P3703/pCMV-SPORT6-PIK3IP1（3点突变 )人源基因质粒 |
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文献和实验相关实验
查、基因筛选及图位克隆有益基因的最好材料，也是永久保存基因资源的最好方法之一。 至于作用就太多了，你自己google一下，发现的是你好多做不了，而不是不知道怎么做？ huangyuan62 楼主,请问能交换你的BAC质粒吗？pBACe3.6,pBeloBAC11等都可以。 本人有以下质粒和菌种,可全部用于交换 pET28a,pET32a,pETDsb,pETGST,pETTrx，pTrc—CKS, pGEX4T
需求来确定所用的模板质粒。重组质粒载体构建可以经过酶切酶连、无缝克隆、Gateway 克隆等方式将目的片段连接到目标载体上，或者对载体上的一些元件进行改造。改造好的质粒转入大肠杆菌中进行扩增及抽提。 3、质粒抽提的一般操作流程 从培养的大肠杆菌中抽提质粒，一般需要经过大肠杆菌培养、菌液收集、菌体裂解、基因组 DNA 及蛋白沉淀、质粒吸附、质粒漂洗、质粒洗脱、质粒检测、质粒保存等流程。 内容来源：QIAGEN 凯杰
1. 琼脂糖凝胶电泳检测质粒为何有三条条带 通常完整的质粒电泳会看到多个电泳条带，这与质粒的多种形态有关。质粒可以有超螺旋，线性，开环等多种不同的形态，所以在电泳时常看到三条不同大小的条带，而最下面最亮的条带一般为超螺旋条带。 左图为电镜下的质粒形态，可以看到质粒有不同程度的超螺旋形态；右图为质粒电泳图 2. 质粒纯度不好 质粒中常见的污染杂质有蛋白质、基因组 DNA、RNA、乙醇等。这些杂质有可能是质粒提取过程中操作不当有关，比如： ①在加入裂解缓冲液后，剧烈震荡导致大肠杆菌基因
pET28a-PPK大肠基因质粒
￥100 - 1000
