pMy-BirA-T2A-eGFP生物素酶基因质粒

基本信息
名称：pMy-BirA-T2A-eGFP生物素酶基因质粒
别称: Plasmid #5
复制子: pUC
原核抗性: Amp
筛选标记：绿色荧光蛋白EGFP
克隆菌株: Stbl3
培养条件: 37度

质粒属性
载体宿主：哺乳细胞,逆病毒
载体用途：蛋白表达
基因种属：
基因类型：ORF
原核抗性：Amp
真核抗性：
荧光蛋白：绿色

质粒简介
 pMy-BirA-T2A-eGFP是一个生物素化酶逆转录病毒表达质粒。

质粒图谱


质粒序列
LOCUS       Exported                6380 bp ds-DNA     circular SYN 07-AUG-2017
DEFINITION  synthetic circular DNA
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..6380
                     /organism="synthetic DNA construct"
                     /mol_type="other DNA"
     CDS             1090..1506
                     /label=gag (truncated)
     misc_feature    1516..1890
                     /label=pol region
     CDS             1905..2867
                     /codon_start=1
                     /label=BirA
                     /translation="MKDNTVPLKLIALLANGEFHSGEQLGETLGMSRAAINKHIQTLRD
                     WGVDVFTVPGKGYSLPEPIQLLNAKQILGQLDGGSVAVLPVIDSTNQYLLDRIGELKSG
                     DACIAEYQQAGRGRRGRKWFSPFGANLYLSMFWRLEQGPAAAIGLSLVIGIVMAEVLRK
                     LGADKVRVKWPNDLYLQDRKLAGILVELTGKTGDAAQIVIGAGINMAMRRVEESVVNQG
                     WITLQEAGINLDRNTLAAMLIRELRAALELFEQEGLAPYLSRWEKLDNFINRPVKLIIG
                     DKEIFGISRGIDKQGALLLEQDGIIKPWMGGEISLRSAEK"
     CDS             2868..2921
                     /codon_start=1
                     /label=T2A
                     /translation="EGRGSLLTCGDVEENPGP"
     CDS             2922..3641
                     /codon_start=1
                     /label=EGFP
                     /translation="MVSKGEELFTGVVPILVELDGDVNGHKFSVSGEGEGDATYGKLTL
                     KFICTTGKLPVPWPTLVTTLTYGVQCFSRYPDHMKQHDFFKSAMPEGYVQERTIFFKDD
                     GNYKTRAEVKFEGDTLVNRIELKGIDFKEDGNILGHKLEYNYNSHNVYIMADKQKNGIK
                     VNFKIRHNIEDGSVQLADHYQQNTPIGDGPVLLPDNHYLSTQSALSKDPNEKRDHMVLL
                     EFVTAAGITLGMDELYK"
     rep_origin      complement(4655..5243)
                     /direction=LEFT
                     /label=ori
     CDS             complement(5407..6267)
                     /codon_start=1
                     /label=AmpR
                     /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
                     ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRVDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
                     PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
                     EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
                     LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
                     LIKHW"
     promoter        complement(6268..6372)
                     /label=AmpR promoter
ORIGIN
        1 ctgcataatg aaagacccca cctgtaggtt tggcaagcta gcttaagtaa cgccattttg
       61 caaggcatgg aaaaatacat aactgagaat agaaaagttc agatcaaggt caggaacaga
      121 tggaacagct gaatatgggc caaagcggat atctgtggta agcagttcct gccccggctc
      181 agggccaaga acagatggaa cagctgaata tgggccaaac aggatatctg tggtaagcag
      241 ttcctgcccc ggctcagggc caagaacaga tggtccccag atgcggtcca gccctcagca
      301 gtttctagag aaccatcaga tgtttccagg gtgccccaag gacctgaaat gaccctgtgc
      361 cttatttgaa ctaaccaatc agttcgcttc tcgcttctgt tcgcgcgctt ctgctccccg
      421 agctcaataa aagagcccac aacccctcac tcggggcgcc agtcctccga ttgactgagt
      481 cgcccgggta cccgtattcc caataaagcc tcttgctgtt tgcatccgaa tcgtggactc
      541 gctgatcctt gggagggtct cctcagattg attgactgcc cacctcgggg gtctttcatt
      601 tggaggttcc accgagattt ggagacccca gcccagggac caccgacccc cccgccggga
      661 ggtaagctgg ccagcggtcg tttcgtgtct gtctctgtct ttgtgcgtgt ttgtgccggc
      721 atctaatgtt tgcgcctgcg tctgtactag ttagctaact agctctgtat ctggcggacc
      781 cgtggtggaa ctgacgagtt cggaacaccc ggccgcaacc ctgggagacg tcccaggtcg
      841 ggggccgttt ttgtggcccg acctgagtcc aaaaagcccg atcgttttgg actctttggt
      901 gcacccccct tagaggaggg atatgtggtt ctggtaggag acgagaacct aaaacagttc
      961 ccgcctccgt ctgaattttt gctttcggtt tgggaccgaa gccgcgccgc gcgtcttgtc
     1021 tgctgcagca tcgttctgtg ttgtctctgt ctgactgtgt ttctgtattt gtctgaaaat
     1081 atgggcccgg gccagactgt taccactccc ttaagtttga ccttaggtca ctggaaagat
     1141 gtcgagcgga tcgctcacaa ccagtcggta gatgtcaaga agagacgttg ggttaccttc
     1201 tgctctgcag aatggccaac ctttaacgtc ggatggccgc gagacggcac ctttaaccga
     1261 gacctcatca cccaggttaa gatcaaggtc ttttcacctg gcccgcatgg acacccagac
     1321 caggtcccct acatcgtgac ctgggaagcc ttggcttttg acccccctcc ctgggtcaag
     1381 ccctttgtac accctaagcc tccgcctcct cttcctccat ccgccccgtc tctccccctt
     1441 gaacctcctc gttcgacccc gcctcgatcc tccctttatc cagccctcac tccttctcta
     1501 ggcgccccca tatggccata tgagatctta tatggggcac ccccgcccct tgtaaacttc
     1561 cctgaccctg acatgacaag agttactaac agcccctctc tccaagctca cttacaggct
     1621 ctctacttag tccagcacga agtctggaga cctctggcgg cagcctacca agaacaactg
     1681 gaccgaccgg tggtacctca cccttaccga gtcggcgaca cagtgtgggt ccgccgacac
     1741 cagactaaga acctagaacc tcgctggaaa ggaccttaca cagtcctgct gaccaccccc
     1801 accgccctca aagtagacgg catcgcagct tggatacacg ccgcccacgt gaaggctgcc
     1861 gaccccgggg gtggaccatc ctctagactg ccggatccgc caccatgaag gataacaccg
     1921 tgccactgaa attgattgcc ctgttagcga acggtgaatt tcactctggc gagcagttgg
     1981 gtgaaacgct gggaatgagc cgggcggcta ttaataaaca cattcagaca ctgcgtgact
     2041 ggggcgttga tgtctttacc gttccgggta aaggatacag cctgcctgag cctatccagt
     2101 tacttaatgc taaacagata ttgggtcagc tggatggcgg tagtgtagcc gtgctgccag
     2161 tgattgactc cacgaatcag taccttcttg atcgtatcgg agagcttaaa tcgggcgatg
     2221 cttgcattgc agaataccag caggctggcc gtggtcgccg gggtcggaaa tggttttcgc
     2281 cttttggcgc aaacttatat ttgtcgatgt tctggcgtct ggaacaaggc ccggcggcgg
     2341 cgattggttt aagtctggtt atcggtatcg tgatggcgga agtattacgc aagctgggtg
     2401 cagataaagt tcgtgttaaa tggcctaatg acctctatct gcaggatcgc aagctggcag
     2461 gcattctggt ggagctgact ggcaaaactg gcgatgcggc gcaaatagtc attggagccg
     2521 ggatcaacat ggcaatgcgc cgtgttgaag agagtgtcgt taatcagggg tggatcacgc
     2581 tgcaggaagc ggggatcaat ctcgatcgta atacgttggc ggccatgcta atacgtgaat
     2641 tacgtgctgc gttggaactc ttcgaacaag aaggattggc accttatctg tcgcgctggg
     2701 aaaagctgga taattttatt aatcgcccag tgaaacttat cattggtgat aaagaaatat
     2761 ttggcatttc acgcggaata gacaaacagg gggctttatt acttgagcag gatggaataa
     2821 taaaaccctg gatgggcggt gaaatatcct tgcgtagtgc agaaaaagag ggcagaggaa
     2881 gtcttctaac atgcggtgac gtggaggaga atcccggccc tatggtgagc aagggcgagg
     2941 agctgttcac cggggtggtg cccatcctgg tcgagctgga cggcgacgta aacggccaca
     3001 agttcagcgt gtccggcgag ggcgagggcg atgccaccta cggcaagctg accctgaagt
     3061 tcatctgcac caccggcaag ctgcccgtgc cctggcccac cctcgtgacc accctgacct
     3121 acggcgtgca gtgcttcagc cgctaccccg accacatgaa gcagcacgac ttcttcaagt
     3181 ccgccatgcc cgaaggctac gtccaggagc gcaccatctt cttcaaggac gacggcaact
     3241 acaagacccg cgccgaggtg aagttcgagg gcgacaccct ggtgaaccgc atcgagctga
     3301 agggcatcga cttcaaggag gacggcaaca tcctggggca caagctggag tacaactaca
     3361 acagccacaa cgtctatatc atggccgaca agcagaagaa cggcatcaag gtgaacttca
     3421 agatccgcca caacatcgag gacggcagcg tgcagctcgc cgaccactac cagcagaaca
     3481 cccccatcgg cgacggcccc gtgctgctgc ccgacaacca ctacctgagc acccagtccg
     3541 ccctgagcaa agaccccaac gagaagcgcg atcacatggt cctgctggag ttcgtgaccg
     3601 ccgccgggat cactctcggc atggacgagc tgtacaagta aactcgacat ttcgaccggg
     3661 ccgccagcac agtggggggg ggcccgcgat tagtccaatt tgttaaagac aggatatcag
     3721 tggtccaggc tctagttttg actcaacaat atcaccagct gaagcctata gagtacgagc
     3781 catagataga ataaaagatt ttatttagtc tccagaaaaa ggggggaatg aaagacccca
     3841 cctgtaggtt tggcaagcta gcttaagtaa gccattttgc aaggcatgga aaaatacata
     3901 actgagaata gagaagttca gatcaaggtt aggaacagag agacaggaga atatgggcca
     3961 aacaggatat ctgtggtaag cagttcctgc cccggctcag ggccaagaac agttggaaca
     4021 gcagaatatg ggccaaacag gatatctgtg gtaagcagtt cctgccccgg ctcagggcca
     4081 agaacagatg gtccccagat gcggtcccgc cctcagcagt ttctagagaa ccatcagatg
     4141 tttccagggt gccccaagga cctgaaatga ccctgtgcct tatttgaact aaccaatcag
     4201 ttcgcttctc gcttctgttc gcgcgcttct gctccccgag ctcaataaaa gagcccacaa
     4261 cccctcactc ggcgcgccag tcctccgata gactgcgtcg cccgggtacc cgtgtatcca
     4321 ataaaccctc ttgcagttgc atccgacttg tggtctcgct gttccttggg agggtctcct
     4381 ctgagtgatt gactacccgt cagcgggggt ctttcattct gcattaatga atcggccaac
     4441 gcgcggggag aggcggtttg cgtattgggc gctcttccgc ttcctcgctc actgactcgc
     4501 tgcgctcggt cgttcggctg cggcgagcgg tatcagctca ctcaaaggcg gtaatacggt
     4561 tatccacaga atcaggggat aacgcaggaa agaacatgtg agcaaaaggc cagcaaaagg
     4621 ccaggaaccg taaaaaggcc gcgttgctgg cgtttttcca taggctccgc ccccctgacg
     4681 agcatcacaa aaatcgacgc tcaagtcaga ggtggcgaaa cccgacagga ctataaagat
     4741 accaggcgtt tccccctgga agctccctcg tgcgctctcc tgttccgacc ctgccgctta
     4801 ccggatacct gtccgccttt ctcccttcgg gaagcgtggc gctttctcat agctcacgct
     4861 gtaggtatct cagttcggtg taggtcgttc gctccaagct gggctgtgtg cacgaacccc
     4921 ccgttcagcc cgaccgctgc gccttatccg gtaactatcg tcttgagtcc aacccggtaa
     4981 gacacgactt atagccactg gcagcagcca ctggtaacag gattagcaga gcgaggtatg
     5041 taggcggtgc tacagagttc ttgaagtggt ggcctaacta cggctacact agaaggacag
     5101 tatttggtat ctgcgctctg ctgaagccag ttaccttcgg aaaaagagtt ggtagctctt
     5161 gatccggcaa acaaaccacc gctggtagcg gtggtttttt tgtttgcaag cagcagatta
     5221 cgcgcagaaa aaaaggatct caagaagatc ctttgatctt ttctacgggg tctgacgctc
     5281 agtggaacga aaactcacgt taagggattt tggtcatgag attatcaaaa aggatcttca
     5341 cctagatcct tttgcggccg gccgcaaatc aatctaaagt atatatgagt aaacttggtc
     5401 tgacagttac caatgcttaa tcagtgaggc acctatctca gcgatctgtc tatttcgttc
     5461 atccatagtt gcctgactcc ccgtcgtgta gataactacg atacgggagg gcttaccatc
     5521 tggccccagt gctgcaatga taccgcgaga cccacgctca ccggctccag atttatcagc
     5581 aataaaccag ccagccggaa gggccgagcg cagaagtggt cctgcaactt tatccgcctc
     5641 catccagtct attaattgtt gccgggaagc tagagtaagt agttcgccag ttaatagttt
     5701 gcgcaacgtt gttgccattg ctacaggcat cgtggtgtca cgctcgtcgt ttggtatggc
     5761 ttcattcagc tccggttccc aacgatcaag gcgagttaca tgatccccca tgttgtgcaa
     5821 aaaagcggtt agctccttcg gtcctccgat cgttgtcaga agtaagttgg ccgcagtgtt
     5881 atcactcatg gttatggcag cactgcataa ttctcttact gtcatgccat ccgtaagatg
     5941 cttttctgtg actggtgagt actcaaccaa gtcattctga gaatagtgta tgcggcgacc
     6001 gagttgctct tgcccggcgt caacacggga taataccgcg ccacatagca gaactttaaa
     6061 agtgctcatc attggaaaac gttcttcggg gcgaaaactc tcaaggatct taccgctgtt
     6121 gagatccagt tcgatgtaac ccactcgtgc acccaactga tcttcagcat cttttacttt
     6181 caccagcgtt tctgggtgag caaaaacagg aaggcaaaat gccgcaaaaa agggaataag
     6241 ggcgacacgg aaatgttgaa tactcatact cttccttttt caatattatt gaagcattta
     6301 tcagggttat tgtctcatga gcggatacat atttgaatgt atttagaaaa ataaacaaat
     6361 aggggttccg cgcacatttc
//

质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片

P3642/pCMV-SPORT6-SPAG16人源基因质粒

P3643/pCMV-SPORT6-LMO4人源基因质粒

P3644/pCMV-SPORT6-HVCN1人源基因质粒

P3646/pCMV-SPORT6-EMP3人源基因质粒

P3647/pCMV-SPORT6-FKBP7人源基因质粒

P4894/pCMV-SPORT6-GALNT14（1同义突变）人源基因质粒

P4895/pCMV-SPORT6-EIF4G2（1同义突变）人源基因质粒

P4896/pCMV-SPORT6-FGFR1人源基因质粒

P4897/pCMV-SPORT6-KIAA0408人源基因质粒

P4898/pCMV-SPORT6-AFAP1L2人源基因质粒

P4899/pCMV-SPORT6-SLC38A2人源基因质粒

P4900/pCMV-SPORT6-INTS7人源基因质粒