pECMV-3×FLAG-RBM4人源基因质粒

基本信息
名称：pECMV-3×FLAG-RBM4人源基因质粒
别称: LARK;RBM4A;ZCRB3A;ZCCHC21
启动子：CMV
复制子: pUC
原核抗性: Amp
筛选标记：G418
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度

质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Amp
真核抗性：Neo/G418
荧光蛋白：

质粒简介：详询

质粒图谱


质粒序列
LOCUS       Exported                6547 bp ds-DNA     circular SYN 12-JUN-2017
DEFINITION  synthetic circular DNA
ACCESSION   .
VERSION     .
KEYWORDS    pCDNA3.1-3×FLAG-RBM4
SOURCE      synthetic DNA construct
  ORGANISM  synthetic DNA construct
REFERENCE   1  (bases 1 to 6547)
  AUTHORS   .
  TITLE     Direct Submission
  JOURNAL   Exported Sep 28, 2017 from MiaoLingPlasmid
            http://www.miaolingbio.com
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..6547
                     /organism="synthetic DNA construct"
                     /mol_type="other DNA"
     enhancer        235..614
                     /label=CMV enhancer
                     /note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
     promoter        615..818
                     /label=CMV promoter
                     /note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early 
                     promoter"
     promoter        863..881
                     /label=T7 promoter
                     /note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
     primer_bind     863..881
                     /label=T7
     CDS             922..987
                     /codon_start=1
                     /product="three tandem FLAG(R) epitope tags, followed by an
                     enterokinase cleavage site"
                     /label=3xFLAG
                     /translation="DYKDHDGDYKDHDIDYKDDDDK"
     primer_bind     1002..1026
                     /label=GC87-F
     CDS             1009..2103
                     /codon_start=1
                     /product="Homo sapiens RNA binding motif protein 4, mRNA 
                     (cDNA clone MGC:45319 
                     IMAGE:5540605), complete cds
                     GenBank: BC032735.1"
                     /label=RBM4
                     /translation="MVKLFIGNLPREATEQEIRSLFEQYGKVLECDIIKNYGFVHIEDK
                     TAAEDAIRNLHHYKLHGVNINVEASKNKSKTSTKLHVGNISPTCTNKELRAKFEEYGPV
                     IECDIVKDYAFVHMERAEDAVEAIRGLDNTEFQGKRMHVQLSTSRLRTAPGMGDQSGCY
                     RCGKEGHWSKECPIDRSGRVADLTEQYNEQYGAVRTPYTMSYGDSLYYNNAYGALDAYY
                     KRCRAARSYEAVAAAAASVYNYAEQTLSQLPQVQNTAMASHLTSTSLDPYDRHLLPTSG
                     AAATAAAAAAAAAAVTAASTSYYGRDRSPLRRATAPVPTVGEGYGYGHESELSQASAAA
                     RNSLYD-MARYEREQYADRARYSAF"
     primer_bind     complement(2084..2109)
                     /label=GC87-R
     primer_bind     complement(2141..2158)
                     /label=BGH
     polyA_signal    2147..2371
                     /label=bGH poly(A) signal
                     /note="bovine growth hormone polyadenylation signal"
     rep_origin      2417..2845
                     /direction=RIGHT
                     /label=f1 ori
                     /note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow 
                     indicates direction of (+) strand synthesis"
     promoter        2859..3188
                     /label=SV40 promoter
                     /note="SV40 enhancer and early promoter"
     rep_origin      3039..3174
                     /label=SV40 ori
                     /note="SV40 origin of replication"
     CDS             3255..4049
                     /codon_start=1
                     /gene="aph(3')-II (or nptII)"
                     /product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
                     /label=Neo
                     /note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418 
                     (Geneticin(R))"
                     /translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
                     VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
                     SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPATC-PFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
                     GLAPAELFARLKARMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
                     LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
     polyA_signal    4223..4344
                     /label=SV40 poly(A) signal
                     /note="SV40 polyadenylation signal"
     primer_bind     complement(4393..4409)
                     /label=M13 rev
                     /note="common sequencing primer, one of multiple similar 
                     variants"
     protein_bind    4417..4433
                     /label=lac operator
                     /bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
                     /note="The lac repressor binds to the lac operator to 
                     inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be 
                     relieved by adding lactose or 
                     isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
     promoter        complement(4441..4471)
                     /label=lac promoter
                     /note="promoter for the E. coli lac operon"
     protein_bind    4486..4507
                     /label=CAP binding site
                     /bound_moiety="E. coli catabolite activator protein"
                     /note="CAP binding activates transcription in the presence 
                     of cAMP."
     rep_origin      complement(4795..5380)
                     /direction=LEFT
                     /label=ori
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                     replication"
     CDS             complement(5551..6411)
                     /codon_start=1
                     /gene="bla"
                     /product="beta-lactamase"
                     /label=AmpR
                     /note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
                     related antibiotics"
                     /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
                     ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
                     PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
                     EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
                     LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
                     LIKHW"
     promoter        complement(6412..6516)
                     /gene="bla"
                     /label=AmpR promoter
ORIGIN
        1 gacggatcgg gagatctccc gatcccctat ggtgcactct cagtacaatc tgctctgatg
       61 ccgcatagtt aagccagtat ctgctccctg cttgtgtgtt ggaggtcgct gagtagtgcg
      121 cgagcaaaat ttaagctaca acaaggcaag gcttgaccga caattgcatg aagaatctgc
      181 ttagggttag gcgttttgcg ctgcttcgcg atgtacgggc cagatatacg cgttgacatt
      241 gattattgac tagttattaa tagtaatcaa ttacggggtc attagttcat agcccatata
      301 tggagttccg cgttacataa cttacggtaa atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc
      361 cccgcccatt gacgtcaata atgacgtatg ttcccatagt aacgccaata gggactttcc
      421 attgacgtca atgggtggag tatttacggt aaactgccca cttggcagta catcaagtgt
      481 atcatatgcc aagtacgccc cctattgacg tcaatgacgg taaatggccc gcctggcatt
      541 atgcccagta catgacctta tgggactttc ctacttggca gtacatctac gtattagtca
      601 tcgctattac catggtgatg cggttttggc agtacatcaa tgggcgtgga tagcggtttg
      661 actcacgggg atttccaagt ctccacccca ttgacgtcaa tgggagtttg ttttggcacc
      721 aaaatcaacg ggactttcca aaatgtcgta acaactccgc cccattgacg caaatgggcg
      781 gtaggcgtgt acggtgggag gtctatataa gcagagctct ctggctaact agagaaccca
      841 ctgcttactg gcttatcgaa attaatacga ctcactatag ggagacccaa gctggctagc
      901 gtttaaactt aagccaccat ggactacaaa gaccatgacg gtgattataa agatcatgac
      961 atcgactaca aggatgacga tgacaagctt ggtaccgagc tcggatccat ggtgaagctg
     1021 ttcatcggaa acctgccccg ggaggctaca gagcaggaga ttcgctcact cttcgagcag
     1081 tatgggaagg tgctggaatg tgacatcatt aagaattacg gctttgtgca catagaagac
     1141 aagacggcag ctgaggatgc catacgcaac ctgcaccatt acaagcttca tggggtgaac
     1201 atcaacgtgg aagccagcaa gaataagagc aaaacctcaa caaagttgca tgtgggcaac
     1261 atcagtccca cctgcaccaa taaggagctt cgagccaagt ttgaggagta tggtccggtc
     1321 atcgaatgtg acatcgtgaa agattatgcc ttcgtacaca tggagcgggc agaggatgca
     1381 gtggaggcca tcaggggcct tgataacaca gagtttcaag gcaaacgaat gcacgtgcag
     1441 ttgtccacca gccggcttag gactgcgccc gggatgggag accagagcgg ctgctatcgg
     1501 tgcgggaaag aggggcactg gtccaaagag tgtccgatag atcgttcagg ccgcgtggca
     1561 gacttgaccg agcaatataa tgagcaatac ggagcagtgc gtacgcctta caccatgagc
     1621 tatggggatt cattgtatta caacaacgcg tacggagcgc tcgatgccta ctacaagcgc
     1681 tgccgtgctg cccggtccta tgaggcagtg gcagctgcag ctgcctccgt gtataattac
     1741 gcagagcaga ccctgtccca gctgccacaa gtccagaata cagccatggc cagtcacctc
     1801 acctccacct ctctcgatcc ctacgataga cacctgttgc cgacctcagg agctgctgcc
     1861 acagctgctg ctgcagcagc agccgctgct gctgttactg cagcttccac ttcatattac
     1921 gggcgggatc ggagccccct gcgtcgcgct acagccccag tccccactgt tggagagggc
     1981 tacggttacg ggcatgagag tgagttgtcc caagcttcag cagccgcgcg gaattctctg
     2041 tacgacatgg cccggtatga gcgggagcag tatgccgatc gggcgcggta ctcagccttt
     2101 taactcgagt ctagagggcc cgtttaaacc cgctgatcag cctcgactgt gccttctagt
     2161 tgccagccat ctgttgtttg cccctccccc gtgccttcct tgaccctgga aggtgccact
     2221 cccactgtcc tttcctaata aaatgaggaa attgcatcgc attgtctgag taggtgtcat
     2281 tctattctgg ggggtggggt ggggcaggac agcaaggggg aggattggga agacaatagc
     2341 aggcatgctg gggatgcggt gggctctatg gcttctgagg cggaaagaac cagctggggc
     2401 tctagggggt atccccacgc gccctgtagc ggcgcattaa gcgcggcggg tgtggtggtt
     2461 acgcgcagcg tgaccgctac acttgccagc gccctagcgc ccgctccttt cgctttcttc
     2521 ccttcctttc tcgccacgtt cgccggcttt ccccgtcaag ctctaaatcg ggggctccct
     2581 ttagggttcc gatttagtgc tttacggcac ctcgacccca aaaaacttga ttagggtgat
     2641 ggttcacgta gtgggccatc gccctgatag acggtttttc gccctttgac gttggagtcc
     2701 acgttcttta atagtggact cttgttccaa actggaacaa cactcaaccc tatctcggtc
     2761 tattcttttg atttataagg gattttgccg atttcggcct attggttaaa aaatgagctg
     2821 atttaacaaa aatttaacgc gaattaattc tgtggaatgt gtgtcagtta gggtgtggaa
     2881 agtccccagg ctccccagca ggcagaagta tgcaaagcat gcatctcaat tagtcagcaa
     2941 ccaggtgtgg aaagtcccca ggctccccag caggcagaag tatgcaaagc atgcatctca
     3001 attagtcagc aaccatagtc ccgcccctaa ctccgcccat cccgccccta actccgccca
     3061 gttccgccca ttctccgccc catggctgac taattttttt tatttatgca gaggccgagg
     3121 ccgcctctgc ctctgagcta ttccagaagt agtgaggagg cttttttgga ggcctaggct
     3181 tttgcaaaaa gctcccggga gcttgtatat ccattttcgg atctgatcaa gagacaggat
     3241 gaggatcgtt tcgcatgatt gaacaagatg gattgcacgc aggttctccg gccgcttggg
     3301 tggagaggct attcggctat gactgggcac aacagacaat cggctgctct gatgccgccg
     3361 tgttccggct gtcagcgcag gggcgcccgg ttctttttgt caagaccgac ctgtccggtg
     3421 ccctgaatga actgcaggac gaggcagcgc ggctatcgtg gctggccacg acgggcgttc
     3481 cttgcgcagc tgtgctcgac gttgtcactg aagcgggaag ggactggctg ctattgggcg
     3541 aagtgccggg gcaggatctc ctgtcatctc accttgctcc tgccgagaaa gtatccatca
     3601 tggctgatgc aatgcggcgg ctgcatacgc ttgatccggc tacctgccca ttcgaccacc
     3661 aagcgaaaca tcgcatcgag cgagcacgta ctcggatgga agccggtctt gtcgatcagg
     3721 atgatctgga cgaagagcat caggggctcg cgccagccga actgttcgcc aggctcaagg
     3781 cgcgcatgcc cgacggcgag gatctcgtcg tgacccatgg cgatgcctgc ttgccgaata
     3841 tcatggtgga aaatggccgc ttttctggat tcatcgactg tggccggctg ggtgtggcgg
     3901 accgctatca ggacatagcg ttggctaccc gtgatattgc tgaagagctt ggcggcgaat
     3961 gggctgaccg cttcctcgtg ctttacggta tcgccgctcc cgattcgcag cgcatcgcct
     4021 tctatcgcct tcttgacgag ttcttctgag cgggactctg gggttcgaaa tgaccgacca
     4081 agcgacgccc aacctgccat cacgagattt cgattccacc gccgccttct atgaaaggtt
     4141 gggcttcgga atcgttttcc gggacgccgg ctggatgatc ctccagcgcg gggatctcat
     4201 gctggagttc ttcgcccacc ccaacttgtt tattgcagct tataatggtt acaaataaag
     4261 caatagcatc acaaatttca caaataaagc atttttttca ctgcattcta gttgtggttt
     4321 gtccaaactc atcaatgtat cttatcatgt ctgtataccg tcgacctcta gctagagctt
     4381 ggcgtaatca tggtcatagc tgtttcctgt gtgaaattgt tatccgctca caattccaca
     4441 caacatacga gccggaagca taaagtgtaa agcctggggt gcctaatgag tgagctaact
     4501 cacattaatt gcgttgcgct cactgcccgc tttccagtcg ggaaacctgt cgtgccagct
     4561 gcattaatga atcggccaac gcgcggggag aggcggtttg cgtattgggc gctcttccgc
     4621 ttcctcgctc actgactcgc tgcgctcggt cgttcggctg cggcgagcgg tatcagctca
     4681 ctcaaaggcg gtaatacggt tatccacaga atcaggggat aacgcaggaa agaacatgtg
     4741 agcaaaaggc cagcaaaagg ccaggaaccg taaaaaggcc gcgttgctgg cgtttttcca
     4801 taggctccgc ccccctgacg agcatcacaa aaatcgacgc tcaagtcaga ggtggcgaaa
     4861 cccgacagga ctataaagat accaggcgtt tccccctgga agctccctcg tgcgctctcc
     4921 tgttccgacc ctgccgctta ccggatacct gtccgccttt ctcccttcgg gaagcgtggc
     4981 gctttctcat agctcacgct gtaggtatct cagttcggtg taggtcgttc gctccaagct
     5041 gggctgtgtg cacgaacccc ccgttcagcc cgaccgctgc gccttatccg gtaactatcg
     5101 tcttgagtcc aacccggtaa gacacgactt atcgccactg gcagcagcca ctggtaacag
     5161 gattagcaga gcgaggtatg taggcggtgc tacagagttc ttgaagtggt ggcctaacta
     5221 cggctacact agaagaacag tatttggtat ctgcgctctg ctgaagccag ttaccttcgg
     5281 aaaaagagtt ggtagctctt gatccggcaa acaaaccacc gctggtagcg gtttttttgt
     5341 ttgcaagcag cagattacgc gcagaaaaaa aggatctcaa gaagatcctt tgatcttttc
     5401 tacggggtct gacgctcagt ggaacgaaaa ctcacgttaa gggattttgg tcatgagatt
     5461 atcaaaaagg atcttcacct agatcctttt aaattaaaaa tgaagtttta aatcaatcta
     5521 aagtatatat gagtaaactt ggtctgacag ttaccaatgc ttaatcagtg aggcacctat
     5581 ctcagcgatc tgtctatttc gttcatccat agttgcctga ctccccgtcg tgtagataac
     5641 tacgatacgg gagggcttac catctggccc cagtgctgca atgataccgc gagacccacg
     5701 ctcaccggct ccagatttat cagcaataaa ccagccagcc ggaagggccg agcgcagaag
     5761 tggtcctgca actttatccg cctccatcca gtctattaat tgttgccggg aagctagagt
     5821 aagtagttcg ccagttaata gtttgcgcaa cgttgttgcc attgctacag gcatcgtggt
     5881 gtcacgctcg tcgtttggta tggcttcatt cagctccggt tcccaacgat caaggcgagt
     5941 tacatgatcc cccatgttgt gcaaaaaagc ggttagctcc ttcggtcctc cgatcgttgt
     6001 cagaagtaag ttggccgcag tgttatcact catggttatg gcagcactgc ataattctct
     6061 tactgtcatg ccatccgtaa gatgcttttc tgtgactggt gagtactcaa ccaagtcatt
     6121 ctgagaatag tgtatgcggc gaccgagttg ctcttgcccg gcgtcaatac gggataatac
     6181 cgcgccacat agcagaactt taaaagtgct catcattgga aaacgttctt cggggcgaaa
     6241 actctcaagg atcttaccgc tgttgagatc cagttcgatg taacccactc gtgcacccaa
     6301 ctgatcttca gcatctttta ctttcaccag cgtttctggg tgagcaaaaa caggaaggca
     6361 aaatgccgca aaaaagggaa taagggcgac acggaaatgt tgaatactca tactcttcct
     6421 ttttcaatat tattgaagca tttatcaggg ttattgtctc atgagcggat acatatttga
     6481 atgtatttag aaaaataaac aaataggggt tccgcgcaca tttccccgaa aagtgccacc
     6541 tgacgtc
//

质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片

P1031/pCRISPomyces-2大肠敲除质粒

P1931/BPK764大肠敲除质粒

P1932/MSP1673大肠敲除质粒

P1827/pJYS3_ΔcrtYf大肠敲除质粒

P0748/pET-NLS-Cas9-6xHis大肠敲除质粒

P0783/pMJ806大肠敲除质粒

P0779/pwtCas9-bacteria大肠敲除质粒

P0325/pET22b-SaCas9大肠敲除质粒

P0435/pdCas9-bacteria大肠敲除质粒

P2273/pMJ826大肠基因编辑质粒

P2274/pWJ68大肠基因编辑质粒