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- 上海
- P1285
- 2025年07月06日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
Plasmid#13970SV40LargeT
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pBABE-Puro SV40 LT病毒基因质粒
别称: Plasmid#13970SV40LargeT
启动子：MMLV
复制子: pUC
质粒分类: 基因文库质粒；其它基因质粒；其它种源质粒
质粒大小: 7273bp
原核抗性: Amp
筛选标记: Puro
筛选标记：Stbl3
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：哺乳细胞,逆病毒
载体用途：蛋白表达,永生化
基因种属：病毒
基因类型：ORF
原核抗性：Amp
真核抗性：Puro
荧光蛋白：
质粒简介
pBABE-Puro SV40 LT质粒的参考文献：https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/12781366
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 7273 bp ds-DNA circular SYN 15-AUG-2017
DEFINITION synthetic circular DNA
KEYWORDS pBABE-Puro SV40 LT.dna
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..7273
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
LTR 12..481
/note="long terminal repeat from Moloney murine leukemia
virus"
misc_feature 546..745
/label=MMLV Psi
/note="packaging signal of Moloney murine leukemia virus
(MMLV)"
CDS 946..1362
/label=gag (truncated)
/note="truncated Moloney murine leukemia virus (MMLV) gag
gene lacking the start codon"
CDS 1400..3526
/codon_start=1
/product="Simian virus-40 large-T antigen
AF316141"
/label=SV40 LT
/translation="MDKVLNREESLQLMDLLGLERSAWGNIPLMRKAYLKKCKEFHPDK
GGDEEKMKKMNTLYKKMEDGVKYAHQPDFGGFWDATEIPTYGTDEWEQWWNAFNEENLF
CSEEMPSSDDEATADSQHS-TPPKKKRKVEDPKDFPSELLSFLSHAVFSNRTLACFAIYT
TKEKAALLYKKIMEKYSVTFISRHNSYNHNILFFLTPHRHRVSAINNYAQKLCTFSFLI
CKGVNKEYLMYSALTRDPFSVIEESLPGGLKEHDFNPEEAEETKQVSWKLVTEYAMETK
CDDVLLLLGMYLEFQYSFEMCLKCIKKEQPSHYKYHEKHYANAAIFADSKNQKTICQQA
VDTVLAKKRVDSLQLTREQMLTNRFNDLLDRMDIMFGSTGSADIEEWMAGVAWLHCLLP
KMDSVVYDFLKCMVYNIPKKRYWLFKGPIDSGKTTLAAALLELCGGKALNVNLPLDRLN
FELGVAIDQFLVVFEDVKGTGGESRDLPSGQGINNLDNLRDYLDGSVKVNLEKKHLNKR
TQIFPPGIVTMNEYSVPKTLQARFVKQIDFRPKDYLKHCLERSEFLLEKRIIQSGIALL
LMLIWYRPVAEFAQSIQSRIVEWKERLDKEFSLSVYQKMKFNVAMGIGVLDWLRNSDDD
DEDSQENADKNEDGGEKNMEDSGHETGIDSQSQGSFQAPQSSQSVHDHNQPYHICRGFT
CFKKPPTPPPEPET"
CDS 1775..1795
/codon_start=1
/product="nuclear localization signal of SV40 large T
antigen"
/label=SV40 NLS
/translation="PKKKRKV"
promoter 3612..3941
/label=SV40 promoter
/note="SV40 enhancer and early promoter"
rep_origin 3792..3927
/label=SV40 ori
/note="SV40 origin of replication"
CDS 3951..4550
/codon_start=1
/gene="pac from Streptomyces alboniger"
/product="puromycin N-acetyltransferase"
/label=PuroR
/note="confers resistance to puromycin"
/translation="MTEYKPTVRLATRDDVPRAVRTLAAAFADYPATRHTVDPDRHIER
VTELQELFLTRVGLDIGKVWVADDGAAVAVWTTPESVEAGAVFAEIGPRMAELSGSRLA
AQQQMEGLLAPHRPKEPAWFLATVGVSPDHQGKGLGSAVVLPGVEAAERAGVPAFLETS
APRNLPFYERLGFTVTADVEVPEGPRTWCMTRKPGA"
LTR 4771..5240
/note="long terminal repeat from Moloney murine leukemia
virus"
rep_origin complement(5541..6129)
/direction=LEFT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(6289..7149)
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/label=AmpR
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
promoter complement(7150..7254)
/gene="bla"
/label=AmpR promoter
ORIGIN
1 ccacctgcag cctgaatatg ggccaaacag gatatctgtg gtaagcagtt cctgccccgg
61 ctcagggcca agaacagatg gaacagctga atatgggcca aacaggatat ctgtggtaag
121 cagttcctgc cccggctcag ggccaagaac agatggtccc cagatgcggt ccagccctca
181 gcagtttcta gagaaccatc agatgtttcc agggtgcccc aaggacctga aatgaccctg
241 tgccttattt gaactaacca atcagttcgc ttctcgcttc tgttcgcgcg cttctgctcc
301 ccgagctcaa taaaagagcc cacaacccct cactcggggc gccagtcctc cgattgactg
361 agtcgcccgg gtacccgtgt atccaataaa ccctcttgca gttgcatccg acttgtggtc
421 tcgctgttcc ttgggagggt ctcctctgag tgattgacta cccgtcagcg ggggtctttc
481 atttgggggc tcgtccggga tcgggagacc cctgcccagg gaccaccgac ccaccaccgg
541 gaggcaagct ggccagcaac ttatctgtgt ctgtccgatt gtctagtgtc tatgactgat
601 tttatgcgcc tgcgtcggta ctagttagct aactagctct gtatctggcg gacccgtggt
661 ggaactgacg agttctgaac acccggccgc aaccctggga gacgtcccag ggactttggg
721 ggccgttttt gtggcccgac ctgaggaagg gagtcgatgt ggaatccgac cccgtcagga
781 tatgtggttc tggtaggaga cgagaaccta aaacagttcc cgcctccgtc tgaatttttg
841 ctttcggttt ggaaccgaag ccgcgcgtct tgtctgctgc agcgctgcag catcgttctg
901 tgttgtctct gtctgactgt gtttctgtat ttgtctgaaa attagggcca gactgttacc
961 actcccttaa gtttgacctt aggtcactgg aaagatgtcg agcggatcgc tcacaaccag
1021 tcggtagatg tcaagaagag acgttgggtt accttctgct ctgcagaatg gccaaccttt
1081 aacgtcggat ggccgcgaga cggcaccttt aaccgagacc tcatcaccca ggttaagatc
1141 aaggtctttt cacctggccc gcatggacac ccagaccagg tcccctacat cgtgacctgg
1201 gaagccttgg cttttgaccc ccctccctgg gtcaagccct ttgtacaccc taagcctccg
1261 cctcctcttc ctccatccgc cccgtctctc ccccttgaac ctcctcgttc gaccccgcct
1321 cgatcctccc tttatccagc cctcactcct tctctaggcg ccggccggat cccgcgaccg
1381 gtcgaccagc tttgcaaaga tggataaagt tttaaacaga gaggaatctt tgcagctaat
1441 ggaccttcta ggtcttgaaa ggagtgcctg ggggaatatt cctctgatga gaaaggcata
1501 tttaaaaaaa tgcaaggagt ttcatcctga taaaggagga gatgaagaaa aaatgaagaa
1561 aatgaatact ctgtacaaga aaatggaaga tggagtaaaa tatgctcatc aacctgactt
1621 tggaggcttc tgggatgcaa ctgagattcc aacctatgga actgatgaat gggagcagtg
1681 gtggaatgcc tttaatgagg aaaacctgtt ttgctcagaa gaaatgccat ctagtgatga
1741 tgaggctact gctgactctc aacattctac tcctccaaaa aagaagagaa aggtagaaga
1801 ccccaaggac tttccttcag aattgctaag ttttttgagt catgctgtgt ttagtaatag
1861 aactcttgct tgctttgcta tttacaccac aaaggaaaaa gctgcactgc tatacaagaa
1921 aattatggaa aaatattctg taacctttat aagtaggcat aacagttata atcataacat
1981 actgtttttt cttactccac acaggcatag agtgtctgct attaataact atgctcaaaa
2041 attgtgtacc tttagctttt taatttgtaa aggggttaat aaggaatatt tgatgtatag
2101 tgccttgact agagatccat tttctgttat tgaggaaagt ttgccaggtg ggttaaagga
2161 gcatgatttt aatccagaag aagcagagga aactaaacaa gtgtcctgga agcttgtaac
2221 agagtatgca atggaaacaa aatgtgatga tgtgttgtta ttgcttggga tgtacttgga
2281 atttcagtac agttttgaaa tgtgtttaaa atgtattaaa aaagaacagc ccagccacta
2341 taagtaccat gaaaagcatt atgcaaatgc tgctatattt gctgacagca aaaaccaaaa
2401 aaccatatgc caacaggctg ttgatactgt tttagctaaa aagcgggttg atagcctaca
2461 attaactaga gaacaaatgt taacaaacag atttaatgat cttttggata ggatggatat
2521 aatgtttggt tctacaggct ctgctgacat agaagaatgg atggctggag ttgcttggct
2581 acactgtttg ttgcccaaaa tggattcagt ggtgtatgac tttttaaaat gcatggtgta
2641 caacattcct aaaaaaagat actggctgtt taaaggacca attgatagtg gtaaaactac
2701 attagcagct gctttgcttg aattatgtgg ggggaaagct ttaaatgtta atttgccctt
2761 ggacaggctg aactttgagc taggagtagc tattgaccag tttttagtag tttttgagga
2821 tgtaaagggc actggagggg agtccagaga tttgccttca ggtcagggaa ttaataacct
2881 ggacaattta agggattatt tggatggcag tgttaaggta aacttagaaa agaaacacct
2941 aaataaaaga actcaaatat ttccccctgg aatagtcacc atgaatgagt acagtgtgcc
3001 taaaacactg caggccagat ttgtaaaaca aatagatttt aggcccaaag attatttaaa
3061 gcattgcctg gaacgcagtg agtttttgtt agaaaagaga ataattcaaa gtggcattgc
3121 tttgcttctt atgttaattt ggtacagacc tgtggctgag tttgctcaaa gtattcagag
3181 cagaattgtg gagtggaaag agagattgga caaagagttt agtttgtcag tgtatcaaaa
3241 aatgaagttt aatgtggcta tgggaattgg agttttagat tggctaagaa acagtgatga
3301 tgatgatgaa gacagccagg aaaatgctga taaaaatgaa gatggtgggg agaagaacat
3361 ggaagactca gggcatgaaa caggcattga ttcacagtcc caaggctcat ttcaggcccc
3421 tcagtcctca cagtctgttc atgatcataa tcagccatac cacatttgta gaggttttac
3481 ttgctttaaa aaacctccca cacctccccc tgaacctgaa acataaaatg aatgcaattg
3541 ttgttgttaa cggggatccc agtgtggtgg tacgtaggaa ttcgccagca cagtggtcga
3601 ccctgtggaa tgtgtgtcag ttagggtgtg gaaagtcccc aggctcccca gcaggcagaa
3661 gtatgcaaag catgcatctc aattagtcag caaccaggtg tggaaagtcc ccaggctccc
3721 cagcaggcag aagtatgcaa agcatgcatc tcaattagtc agcaaccata gtcccgcccc
3781 taactccgcc catcccgccc ctaactccgc ccagttccgc ccattctccg ccccatggct
3841 gactaatttt ttttatttat gcagaggccg aggccgcctc ggcctctgag ctattccaga
3901 agtagtgagg aggctttttt ggaggcctag gcttttgcaa aaagcttacc atgaccgagt
3961 acaagcccac ggtgcgcctc gccacccgcg acgacgtccc cagggccgta cgcaccctcg
4021 ccgccgcgtt cgccgactac cccgccacgc gccacaccgt cgatccggac cgccacatcg
4081 agcgggtcac cgagctgcaa gaactcttcc tcacgcgcgt cgggctcgac atcggcaagg
4141 tgtgggtcgc ggacgacggc gccgcggtgg cggtctggac cacgccggag agcgtcgaag
4201 cgggggcggt gttcgccgag atcggcccgc gcatggccga gttgagcggt tcccggctgg
4261 ccgcgcagca acagatggaa ggcctcctgg cgccgcaccg gcccaaggag cccgcgtggt
4321 tcctggccac cgtcggcgtc tcgcccgacc accagggcaa gggtctgggc agcgccgtcg
4381 tgctccccgg agtggaggcg gccgagcgcg ccggggtgcc cgccttcctg gagacctccg
4441 cgccccgcaa cctccccttc tacgagcggc tcggcttcac cgtcaccgcc gacgtcgagg
4501 tgcccgaagg accgcgcacc tggtgcatga cccgcaagcc cggtgcctga cgcccgcccc
4561 acgacccgca gcgcccgacc gaaaggagcg cacgacccca tgcatcgata aaataaaaga
4621 ttttatttag tctccagaaa aaggggggaa tgaaagaccc cacctgtagg tttggcaagc
4681 tagcttaagt aacgccattt tgcaaggcat ggaaaaatac ataactgaga atagagaagt
4741 tcagatcaag gtcaggaaca gatggaacag ctgaatatgg gccaaacagg atatctgtgg
4801 taagcagttc ctgccccggc tcagggccaa gaacagatgg aacagctgaa tatgggccaa
4861 acaggatatc tgtggtaagc agttcctgcc ccggctcagg gccaagaaca gatggtcccc
4921 agatgcggtc cagccctcag cagtttctag agaaccatca gatgtttcca gggtgcccca
4981 aggacctgaa atgaccctgt gccttatttg aactaaccaa tcagttcgct tctcgcttct
5041 gttcgcgcgc ttctgctccc cgagctcaat aaaagagccc acaacccctc actcggggcg
5101 ccagtcctcc gattgactga gtcgcccggg tacccgtgta tccaataaac cctcttgcag
5161 ttgcatccga cttgtggtct cgctgttcct tgggagggtc tcctctgagt gattgactac
5221 ccgtcagcgg gggtctttca catgcagcat gtatcaaaat taatttggtt ttttttctta
5281 agtatttaca ttaaatggcc atagttgcat taatgaatcg gccaacgcgc ggggagaggc
5341 ggtttgcgta ttgggcgctc ttccgcttcc tcgctcactg actcgctgcg ctcggtcgtt
5401 cggctgcggc gagcggtatc agctcactca aaggcggtaa tacggttatc cacagaatca
5461 ggggataacg caggaaagaa catgtgagca aaaggccagc aaaaggccag gaaccgtaaa
5521 aaggccgcgt tgctggcgtt tttccatagg ctccgccccc ctgacgagca tcacaaaaat
5581 cgacgctcaa gtcagaggtg gcgaaacccg acaggactat aaagatacca ggcgtttccc
5641 cctggaagct ccctcgtgcg ctctcctgtt ccgaccctgc cgcttaccgg atacctgtcc
5701 gcctttctcc cttcgggaag cgtggcgctt tctcatagct cacgctgtag gtatctcagt
5761 tcggtgtagg tcgttcgctc caagctgggc tgtgtgcacg aaccccccgt tcagcccgac
5821 cgctgcgcct tatccggtaa ctatcgtctt gagtccaacc cggtaagaca cgacttatcg
5881 ccactggcag cagccactgg taacaggatt agcagagcga ggtatgtagg cggtgctaca
5941 gagttcttga agtggtggcc taactacggc tacactagaa gaacagtatt tggtatctgc
6001 gctctgctga agccagttac cttcggaaaa agagttggta gctcttgatc cggcaaacaa
6061 accaccgctg gtagcggtgg tttttttgtt tgcaagcagc agattacgcg cagaaaaaaa
6121 ggatctcaag aagatccttt gatcttttct acggggtctg acgctcagtg gaacgaaaac
6181 tcacgttaag ggattttggt catgagatta tcaaaaagga tcttcaccta gatccttttg
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6421 gataccgcga gacccacgct caccggctcc agatttatca gcaataaacc agccagccgg
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6541 ttgccgggaa gctagagtaa gtagttcgcc agttaatagt ttgcgcaacg ttgttgccat
6601 tgctacaggc atcgtggtgt cacgctcgtc gtttggtatg gcttcattca gctccggttc
6661 ccaacgatca aggcgagtta catgatcccc catgttgtgc aaaaaagcgg ttagctcctt
6721 cggtcctccg atcgttgtca gaagtaagtt ggccgcagtg ttatcactca tggttatggc
6781 agcactgcat aattctctta ctgtcatgcc atccgtaaga tgcttttctg tgactggtga
6841 gtactcaacc aagtcattct gagaatagtg tatgcggcga ccgagttgct cttgcccggc
6901 gtcaatacgg gataataccg cgccacatag cagaacttta aaagtgctca tcattggaaa
6961 acgttcttcg gggcgaaaac tctcaaggat cttaccgctg ttgagatcca gttcgatgta
7021 acccactcgt gcacccaact gatcttcagc atcttttact ttcaccagcg tttctgggtg
7081 agcaaaaaca ggaaggcaaa atgccgcaaa aaagggaata agggcgacac ggaaatgttg
7141 aatactcata ctcttccttt ttcaatatta ttgaagcatt tatcagggtt attgtctcat
7201 gagcggatac atatttgaat gtatttagaa aaataaacaa ataggggttc cgcgcacatt
7261 tccccgaaaa gtg
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pBABE-Puro SV40 LT病毒基因质粒
别称: Plasmid#13970SV40LargeT
启动子：MMLV
复制子: pUC
质粒分类: 基因文库质粒；其它基因质粒；其它种源质粒
质粒大小: 7273bp
原核抗性: Amp
筛选标记: Puro
筛选标记：Stbl3
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
| 表达宿主: | 293T等哺乳细胞 |
|---|---|
| 诱导方式: | 无需诱导 |
| 备注: | 低拷贝 |
质粒属性
载体宿主：哺乳细胞,逆病毒
载体用途：蛋白表达,永生化
基因种属：病毒
基因类型：ORF
原核抗性：Amp
真核抗性：Puro
荧光蛋白：
质粒简介
pBABE-Puro SV40 LT质粒的参考文献：https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/12781366
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 7273 bp ds-DNA circular SYN 15-AUG-2017
DEFINITION synthetic circular DNA
KEYWORDS pBABE-Puro SV40 LT.dna
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..7273
/organism="synthetic DNA construct"
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virus"
misc_feature 546..745
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(MMLV)"
CDS 946..1362
/label=gag (truncated)
/note="truncated Moloney murine leukemia virus (MMLV) gag
gene lacking the start codon"
CDS 1400..3526
/codon_start=1
/product="Simian virus-40 large-T antigen
AF316141"
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VDTVLAKKRVDSLQLTREQMLTNRFNDLLDRMDIMFGSTGSADIEEWMAGVAWLHCLLP
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TQIFPPGIVTMNEYSVPKTLQARFVKQIDFRPKDYLKHCLERSEFLLEKRIIQSGIALL
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DEDSQENADKNEDGGEKNMEDSGHETGIDSQSQGSFQAPQSSQSVHDHNQPYHICRGFT
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CDS 1775..1795
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antigen"
/label=SV40 NLS
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promoter 3612..3941
/label=SV40 promoter
/note="SV40 enhancer and early promoter"
rep_origin 3792..3927
/label=SV40 ori
/note="SV40 origin of replication"
CDS 3951..4550
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/product="puromycin N-acetyltransferase"
/label=PuroR
/note="confers resistance to puromycin"
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APRNLPFYERLGFTVTADVEVPEGPRTWCMTRKPGA"
LTR 4771..5240
/note="long terminal repeat from Moloney murine leukemia
virus"
rep_origin complement(5541..6129)
/direction=LEFT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(6289..7149)
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/label=AmpR
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
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ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
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promoter complement(7150..7254)
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ORIGIN
1 ccacctgcag cctgaatatg ggccaaacag gatatctgtg gtaagcagtt cctgccccgg
61 ctcagggcca agaacagatg gaacagctga atatgggcca aacaggatat ctgtggtaag
121 cagttcctgc cccggctcag ggccaagaac agatggtccc cagatgcggt ccagccctca
181 gcagtttcta gagaaccatc agatgtttcc agggtgcccc aaggacctga aatgaccctg
241 tgccttattt gaactaacca atcagttcgc ttctcgcttc tgttcgcgcg cttctgctcc
301 ccgagctcaa taaaagagcc cacaacccct cactcggggc gccagtcctc cgattgactg
361 agtcgcccgg gtacccgtgt atccaataaa ccctcttgca gttgcatccg acttgtggtc
421 tcgctgttcc ttgggagggt ctcctctgag tgattgacta cccgtcagcg ggggtctttc
481 atttgggggc tcgtccggga tcgggagacc cctgcccagg gaccaccgac ccaccaccgg
541 gaggcaagct ggccagcaac ttatctgtgt ctgtccgatt gtctagtgtc tatgactgat
601 tttatgcgcc tgcgtcggta ctagttagct aactagctct gtatctggcg gacccgtggt
661 ggaactgacg agttctgaac acccggccgc aaccctggga gacgtcccag ggactttggg
721 ggccgttttt gtggcccgac ctgaggaagg gagtcgatgt ggaatccgac cccgtcagga
781 tatgtggttc tggtaggaga cgagaaccta aaacagttcc cgcctccgtc tgaatttttg
841 ctttcggttt ggaaccgaag ccgcgcgtct tgtctgctgc agcgctgcag catcgttctg
901 tgttgtctct gtctgactgt gtttctgtat ttgtctgaaa attagggcca gactgttacc
961 actcccttaa gtttgacctt aggtcactgg aaagatgtcg agcggatcgc tcacaaccag
1021 tcggtagatg tcaagaagag acgttgggtt accttctgct ctgcagaatg gccaaccttt
1081 aacgtcggat ggccgcgaga cggcaccttt aaccgagacc tcatcaccca ggttaagatc
1141 aaggtctttt cacctggccc gcatggacac ccagaccagg tcccctacat cgtgacctgg
1201 gaagccttgg cttttgaccc ccctccctgg gtcaagccct ttgtacaccc taagcctccg
1261 cctcctcttc ctccatccgc cccgtctctc ccccttgaac ctcctcgttc gaccccgcct
1321 cgatcctccc tttatccagc cctcactcct tctctaggcg ccggccggat cccgcgaccg
1381 gtcgaccagc tttgcaaaga tggataaagt tttaaacaga gaggaatctt tgcagctaat
1441 ggaccttcta ggtcttgaaa ggagtgcctg ggggaatatt cctctgatga gaaaggcata
1501 tttaaaaaaa tgcaaggagt ttcatcctga taaaggagga gatgaagaaa aaatgaagaa
1561 aatgaatact ctgtacaaga aaatggaaga tggagtaaaa tatgctcatc aacctgactt
1621 tggaggcttc tgggatgcaa ctgagattcc aacctatgga actgatgaat gggagcagtg
1681 gtggaatgcc tttaatgagg aaaacctgtt ttgctcagaa gaaatgccat ctagtgatga
1741 tgaggctact gctgactctc aacattctac tcctccaaaa aagaagagaa aggtagaaga
1801 ccccaaggac tttccttcag aattgctaag ttttttgagt catgctgtgt ttagtaatag
1861 aactcttgct tgctttgcta tttacaccac aaaggaaaaa gctgcactgc tatacaagaa
1921 aattatggaa aaatattctg taacctttat aagtaggcat aacagttata atcataacat
1981 actgtttttt cttactccac acaggcatag agtgtctgct attaataact atgctcaaaa
2041 attgtgtacc tttagctttt taatttgtaa aggggttaat aaggaatatt tgatgtatag
2101 tgccttgact agagatccat tttctgttat tgaggaaagt ttgccaggtg ggttaaagga
2161 gcatgatttt aatccagaag aagcagagga aactaaacaa gtgtcctgga agcttgtaac
2221 agagtatgca atggaaacaa aatgtgatga tgtgttgtta ttgcttggga tgtacttgga
2281 atttcagtac agttttgaaa tgtgtttaaa atgtattaaa aaagaacagc ccagccacta
2341 taagtaccat gaaaagcatt atgcaaatgc tgctatattt gctgacagca aaaaccaaaa
2401 aaccatatgc caacaggctg ttgatactgt tttagctaaa aagcgggttg atagcctaca
2461 attaactaga gaacaaatgt taacaaacag atttaatgat cttttggata ggatggatat
2521 aatgtttggt tctacaggct ctgctgacat agaagaatgg atggctggag ttgcttggct
2581 acactgtttg ttgcccaaaa tggattcagt ggtgtatgac tttttaaaat gcatggtgta
2641 caacattcct aaaaaaagat actggctgtt taaaggacca attgatagtg gtaaaactac
2701 attagcagct gctttgcttg aattatgtgg ggggaaagct ttaaatgtta atttgccctt
2761 ggacaggctg aactttgagc taggagtagc tattgaccag tttttagtag tttttgagga
2821 tgtaaagggc actggagggg agtccagaga tttgccttca ggtcagggaa ttaataacct
2881 ggacaattta agggattatt tggatggcag tgttaaggta aacttagaaa agaaacacct
2941 aaataaaaga actcaaatat ttccccctgg aatagtcacc atgaatgagt acagtgtgcc
3001 taaaacactg caggccagat ttgtaaaaca aatagatttt aggcccaaag attatttaaa
3061 gcattgcctg gaacgcagtg agtttttgtt agaaaagaga ataattcaaa gtggcattgc
3121 tttgcttctt atgttaattt ggtacagacc tgtggctgag tttgctcaaa gtattcagag
3181 cagaattgtg gagtggaaag agagattgga caaagagttt agtttgtcag tgtatcaaaa
3241 aatgaagttt aatgtggcta tgggaattgg agttttagat tggctaagaa acagtgatga
3301 tgatgatgaa gacagccagg aaaatgctga taaaaatgaa gatggtgggg agaagaacat
3361 ggaagactca gggcatgaaa caggcattga ttcacagtcc caaggctcat ttcaggcccc
3421 tcagtcctca cagtctgttc atgatcataa tcagccatac cacatttgta gaggttttac
3481 ttgctttaaa aaacctccca cacctccccc tgaacctgaa acataaaatg aatgcaattg
3541 ttgttgttaa cggggatccc agtgtggtgg tacgtaggaa ttcgccagca cagtggtcga
3601 ccctgtggaa tgtgtgtcag ttagggtgtg gaaagtcccc aggctcccca gcaggcagaa
3661 gtatgcaaag catgcatctc aattagtcag caaccaggtg tggaaagtcc ccaggctccc
3721 cagcaggcag aagtatgcaa agcatgcatc tcaattagtc agcaaccata gtcccgcccc
3781 taactccgcc catcccgccc ctaactccgc ccagttccgc ccattctccg ccccatggct
3841 gactaatttt ttttatttat gcagaggccg aggccgcctc ggcctctgag ctattccaga
3901 agtagtgagg aggctttttt ggaggcctag gcttttgcaa aaagcttacc atgaccgagt
3961 acaagcccac ggtgcgcctc gccacccgcg acgacgtccc cagggccgta cgcaccctcg
4021 ccgccgcgtt cgccgactac cccgccacgc gccacaccgt cgatccggac cgccacatcg
4081 agcgggtcac cgagctgcaa gaactcttcc tcacgcgcgt cgggctcgac atcggcaagg
4141 tgtgggtcgc ggacgacggc gccgcggtgg cggtctggac cacgccggag agcgtcgaag
4201 cgggggcggt gttcgccgag atcggcccgc gcatggccga gttgagcggt tcccggctgg
4261 ccgcgcagca acagatggaa ggcctcctgg cgccgcaccg gcccaaggag cccgcgtggt
4321 tcctggccac cgtcggcgtc tcgcccgacc accagggcaa gggtctgggc agcgccgtcg
4381 tgctccccgg agtggaggcg gccgagcgcg ccggggtgcc cgccttcctg gagacctccg
4441 cgccccgcaa cctccccttc tacgagcggc tcggcttcac cgtcaccgcc gacgtcgagg
4501 tgcccgaagg accgcgcacc tggtgcatga cccgcaagcc cggtgcctga cgcccgcccc
4561 acgacccgca gcgcccgacc gaaaggagcg cacgacccca tgcatcgata aaataaaaga
4621 ttttatttag tctccagaaa aaggggggaa tgaaagaccc cacctgtagg tttggcaagc
4681 tagcttaagt aacgccattt tgcaaggcat ggaaaaatac ataactgaga atagagaagt
4741 tcagatcaag gtcaggaaca gatggaacag ctgaatatgg gccaaacagg atatctgtgg
4801 taagcagttc ctgccccggc tcagggccaa gaacagatgg aacagctgaa tatgggccaa
4861 acaggatatc tgtggtaagc agttcctgcc ccggctcagg gccaagaaca gatggtcccc
4921 agatgcggtc cagccctcag cagtttctag agaaccatca gatgtttcca gggtgcccca
4981 aggacctgaa atgaccctgt gccttatttg aactaaccaa tcagttcgct tctcgcttct
5041 gttcgcgcgc ttctgctccc cgagctcaat aaaagagccc acaacccctc actcggggcg
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5161 ttgcatccga cttgtggtct cgctgttcct tgggagggtc tcctctgagt gattgactac
5221 ccgtcagcgg gggtctttca catgcagcat gtatcaaaat taatttggtt ttttttctta
5281 agtatttaca ttaaatggcc atagttgcat taatgaatcg gccaacgcgc ggggagaggc
5341 ggtttgcgta ttgggcgctc ttccgcttcc tcgctcactg actcgctgcg ctcggtcgtt
5401 cggctgcggc gagcggtatc agctcactca aaggcggtaa tacggttatc cacagaatca
5461 ggggataacg caggaaagaa catgtgagca aaaggccagc aaaaggccag gaaccgtaaa
5521 aaggccgcgt tgctggcgtt tttccatagg ctccgccccc ctgacgagca tcacaaaaat
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6121 ggatctcaag aagatccttt gatcttttct acggggtctg acgctcagtg gaacgaaaac
6181 tcacgttaag ggattttggt catgagatta tcaaaaagga tcttcaccta gatccttttg
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7261 tccccgaaaa gtg
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P1154/pCMV-FLAG-SIRT4人源基因质粒 |
| P1166/pECMV-3×FLAG-LGALS13人源基因质粒 |
| P1167/pECMV-3×FLAG-IL4人源基因质粒 |
| P1168/pECMV-3×FLAG-IL6人源基因质粒 |
| P3802/pECMV-3×FLAG-MED10人源基因质粒 |
| P4927/pECMV-3×FLAG-YTHDF3人源基因质粒 |
| P4928/pECMV-3×FLAG-EIF4G2(1同义突变）人源基因质粒 |
| P4892/pCDNA3.1-3×HA-HDAC4人源基因质粒 |
| P4933/pCDNA3.0-HA-KPNA1人源基因质粒 |
| P4941/pCDNA3.1-PINK1-Myc人源基因质粒 |
| P4942/pECMV-3×FLAG-METTL14人源基因质粒 |
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文献和实验相关实验
型质粒 （3）必需具备一个以上的酶切位点，有选择的余地； （4）必需有易检测的标记，多是抗生素的抗性基因，不特指多位 Ampr（试一试）。 （5）满足自己的实验需求，是否需要包装病毒，是否需要加入荧光标记，是否需要加入标签蛋白，是否需要真核抗性（如Puro、G418）等等。 无论选用哪种载体，首先都要获得载体分子，然后采用适当的限制酶将载体 DNA 进行切割，获得线性载体分子，以便于与目的基因片段进行连接。 如何阅读质粒图谱 第一步：首先看 Ori 的位置，了解质粒的类型（原核/真核
细胞中不起作用，所以这些调控元件大多从启动效率高而且生物背景清楚的病毒基因组中分离。各种启动子效率可用报告基因在细胞中测定。SV40、AdMLP、LTR和CMV启动子在CHO细胞中效果良好。刘文军等比较了SV40、LTR和CMV在ClIO细胞中的表达活性，认为三种启动子的转录活性依次为CMV启动子>SV40启动子>LTR启动子，前者分别是后两者的l0倍和30倍左右。来源于噬菌体的一些启动子，如17启动子也可用于动物细胞。17启动子能被T7RNA聚合酶特异识别，依此建立起来的偶联系统具有常规表达系统不能实现
核酸疫苗载体及表达调控元件 基因免疫 载体常用真核细胞表达质粒，如能在哺乳动物细胞中高效表达真核启动子的质粒，包括长末端重复序列(LTR)、猴空泡病毒(SV40)及巨细胞病毒(CMV)等启动子等。基因免疫载体由3个部分组成：①目的蛋白基因编码序列；②细菌质粒骨架元件，包括复制起点、多克隆位点和选择标记；③转录表达调控元件，包括真核启动子／增强子、转录终止／多聚腺苷酸化信号序列。表达抗原蛋白能力的强弱，取决于其启动子的强弱。目前携带CMV启动子的真核表达质粒
pBABE-Puro SV40 LT病毒基因质粒
￥100 - 1000
