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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
156
- 英文名:
pLP1
- 保质期:
2年
- 供应商:
上海烜雅生物科技有限公司
- 保存条件:
2-8℃
- 规格:
质粒干粉
别称:DB00035;pLP-1;pGag/Pol
基因长:
质粒宿主:哺乳细胞,慢病毒
质粒用途:包装辅助
片段类型:ORF
片段物种:病毒
原核抗性:Amp
筛选标记:
荧光标记:
启动子:CMV
复制子:pUC
感受态:DH5a
温度:37度
正向引物:CMV-F:CGCAAATGGGCGGTAGGCGTG
反向引物:Forward(left ITR):CCTCTGACTTGAGCGTCGAT
注意事项:本产品仅供科研使用,不能用于临床试验,包括人体口服、注射或者体外用药。
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文献和实验,然后我收集这些上清直接去感染肝癌细胞,24小时候也 能看到至少80%的细胞表达GFP,说明包装过程中所用的包装质粒,试剂以及细胞应该没 有问题。我现在有几个疑问,请有经验的战友指点: 1)师姐留给我的protocol上,转染HEK293FT的方法如下,以10cmdish为例: prepare the following transfection mix: 10.0 ug PLKO.1 shRNA plasmid 10.5 ug pLP1 10.5 ug pLP2 9.0 ug pVSVG
实验试剂 人类胚胎肾(HEK)293T细胞 腺病毒转移载体质粒 腺病毒包装载体PLP1,pLP2(之前),PLP / VSVG DMEM培养基 青霉素,链霉素-谷氨酰胺(100X) 磷酸盐缓冲液PBS(-) 胎牛血清 凝聚胺 实验设备 10-cm的细胞培养皿 50毫升锥形离心管
粗心人。这样的错误会给将来的克隆造成麻烦。b)如果打算PCR后直接酶切,不要忘了在酶切位点的外侧再加上保护碱基,不同的酶对于保护碱基的要求是不同的。如果不设计保护碱基,则多半要用TA克隆的方式连接到质粒上,这时要注意Taq 酶的选择。若想在目的序列上附加上并不存在的序列,如限制位点和启动子序列,可以加入到引物5'端而不影响特异性。当计算引物Tm值时并不包括这些序列,但是应该对其进行互补性和内部二级结构的检测。十、有时候,对于引物设计仅了解有限的序列信息。比如,如果仅知道氨基酸序列,可以设计兼并
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