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- 上海
- P1173
- 2025年07月13日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
p3×FLAG-CMV-10-RIP2-p
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：p3×FLAG-CMV-10-RIP2-p猪源基因质粒
别称: p3×FLAG-CMV-10-RIP2-p
启动子：CMV
复制子: pUC
终止子: hGH poly(A) signal
质粒分类: 基因文库质粒；其它基因质粒；猪源基因质粒
质粒大小: 7884bp
质粒标签: N-3×FLAG
原核抗性: Amp
筛选标记：G418
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
表达宿主: 293T等哺乳细胞
质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：猪
基因类型：ORF
原核抗性：Amp
真核抗性：Neo/G418
荧光蛋白：
质粒简介
p3×FLAG-CMV-10-RIP2-p质粒是一个猪源基因过表达质粒，CMV启动子驱动3×FLAG标签和RIP2基因融合表达。p3×FLAG-CMV-10-RIP2-p质粒由淼灵生物开发。
PREDICTED: Sus scrofa receptor interacting serine/threonine kinase 2 (RIPK2), transcript variant X1, mRNA.NCBI Reference Sequence: XM_021089139.1.
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 7884 bp ds-DNA circular SYN 16-AUG-2017
DEFINITION synthetic circular DNA
KEYWORDS p3×FLAG-CMV-10-RIP2-p.dna
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..7884
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
enhancer 318..697
/label=CMV enhancer
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 698..901
/label=CMV promoter
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
CDS 931..996
/codon_start=1
/product="three tandem FLAG(R) epitope tags, followed by an
enterokinase cleavage site"
/label=3xFLAG
/translation="DYKDHDGDYKDHDIDYKDDDDK"
CDS 1015..2616
/codon_start=1
/label=RIP2-p
/translation="MNEEAICSALPTIPYRKLADLCYLSRGASGTVSSARHADWRIQVA
VKHLHIHTPLLDSERNDVLREAEILHKARFSYILPILGICNEPEFLGIVTEYMPNGSLN
ELLHRKNEYPDVPWPLRFRILHEIALGVNYLHNMNPPLLHHDLKTQNILLDNEFHVKIA
DFGLSKWRMMSLSQSRSIKSAPEGGTIIYMPPENYEPGQKSRATVKHDIYSYAVITWEV
LSRKQPFEEVTNPLQIMYSVSQGHRPDTSEESLPFDIPHRALMISLIESGWAQNPDERP
SFLKCLIELEPVLRIFEDITFLEAVIQLKKTKLQSASSTVHLCDKKKTELYPNTSVNHG
SQEESCGSSQLHKPSNSPGTSKSLSATQDSDFLSRKTQDFS-TPRQCPVNRSWDSNISVA
QRATFCDHKTTPCSLAIINPLSAEGNSERFQPGIAQQWIQSKREDIVNQMTEACLNQSL
DALLSRDLIMKEDYELISTKPTRTSKVRQLLDTTDIQGEEFARVIVQKLKDNKQMGLQP
YPEILVVSRPPSLNLF"
polyA_signal 2643..3265
/label=hGH poly(A) signal
/note="human growth hormone polyadenylation signal"
promoter 3307..3604
/label=SV40 promoter
/note="SV40 enhancer and early promoter"
CDS 3658..4452
/codon_start=1
/gene="aph(3')-II (or nptII)"
/product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
/label=Neo
/note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418
(Geneticin(R))"
/translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPAT-CPFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
GLAPAELFARLKARMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
polyA_signal 5104..5238
/label=SV40 poly(A) signal
/note="SV40 polyadenylation signal"
rep_origin complement(5678..6266)
/direction=LEFT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(6437..7297)
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/label=AmpR
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
promoter complement(7298..7402)
/gene="bla"
/label=AmpR promoter
rep_origin 7429..7884
/direction=RIGHT
/label=f1 ori
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
ORIGIN
1 ccattcgcca ttcaggctgc gcaactgttg ggaagggcga tcggtgcggg cctcttcgct
61 attacgccag ctggcgaaag ggggatgtgc tgcaaggcga ttaagttggg taacgccagg
121 gttttcccag tcacgacgtt gtaaaacgac ggccagtgcc aagctgatct atacattgaa
181 tcaatattgg caattagcca tattagtcat tggttatata gcataaatca atattggcta
241 ttggccattg catacgttgt atctatatca taatatgtac atttatattg gctcatgtcc
301 aatatgaccg ccatgttgac attgattatt gactagttat taatagtaat caattacggg
361 gtcattagtt catagcccat atatggagtt ccgcgttaca taacttacgg taaatggccc
421 gcctggctga ccgcccaacg acccccgccc attgacgtca ataatgacgt atgttcccat
481 agtaacgcca atagggactt tccattgacg tcaatgggtg gagtatttac ggtaaactgc
541 ccacttggca gtacatcaag tgtatcatat gccaagtccg ccccctattg acgtcaatga
601 cggtaaatgg cccgcctggc attatgccca gtacatgacc ttacgggact ttcctacttg
661 gcagtacatc tacgtattag tcatcgctat taccatggtg atgcggtttt ggcagtacac
721 caatgggcgt ggatagcggt ttgactcacg gggatttcca agtctccacc ccattgacgt
781 caatgggagt ttgttttggc accaaaatca acgggacttt ccaaaatgtc gtaataaccc
841 cgccccgttg acgcaaatgg gcggtaggcg tgtacggtgg gaggtctata taagcagagc
901 tcgtttagtg aaccgtcaga attaaccatg gactacaaag accatgacgg tgattataaa
961 gatcatgaca tcgattacaa ggatgacgat gacaagcttg cggccgcgaa ttcaatgaac
1021 gaggaggcca tctgcagcgc cctgcccacc atcccgtacc gaaagctcgc tgacctgtgc
1081 tacttgagcc gtggcgcgtc cggcaccgtg tcgtccgccc gccacgcaga ctggcgcatc
1141 caggtggccg taaagcactt gcacatccac accccactgc ttgacagtga aagaaatgat
1201 gtcttaagag aagctgaaat tttacacaaa gctagattta gttacattct tccaattttg
1261 ggaatttgca atgagcctga atttttggga atagttaccg aatatatgcc aaatggatcg
1321 ttaaatgaac tcctacatag gaaaaatgaa tatcctgatg ttccttggcc tttgagattt
1381 cgtattttgc atgaaattgc actaggtgta aattacctgc acaatatgaa tcctccttta
1441 cttcaccatg atctgaagac tcaaaatatc ttattggata atgaatttca tgttaagatt
1501 gcagattttg gtttatcaaa atggcgtatg atgtccctct cacaatcacg aagtattaaa
1561 tctgctccag aaggagggac aattatctat atgccacctg aaaactatga acctggacaa
1621 aaatcaaggg ctactgtcaa gcatgatata tatagttatg cagttatcac atgggaagtc
1681 ttatccagaa aacagccttt tgaagaagtc accaatcctt tgcagattat gtatagcgtg
1741 tcacaaggac atcgacctga cactagcgaa gaaagtttgc cgtttgatat acctcatcga
1801 gcactgatga tctctctaat agaaagtgga tgggcacaaa atccagatga aagaccatct
1861 ttcttaaaat gtttaataga acttgaacct gttctgagaa tatttgaaga tataactttc
1921 cttgaagctg ttattcaact aaagaaaaca aagttgcaaa gtgcttcgag tactgttcac
1981 ttatgtgaca agaagaaaac agagttatat ccgaacacat ctgtaaatca tggttcacaa
2041 gaggaatcat gtggatcttc gcagcttcat aaacctagta attctccagg aacctcaaag
2101 tccctgtcag ctactcaaga cagtgacttt ttatctagaa aaactcaaga cttttccacg
2161 ccacgtcagt gtccagtaaa tcgcagttgg gacagtaaca tttctgtggc tcaaagggca
2221 acattctgtg atcacaagac caccccatgc tctttagcaa taataaatcc actctcagcc
2281 gaaggaaatt cagagcgatt tcagcctggt atagcccaac agtggatcca gagtaaaagg
2341 gaagacattg tgaaccagat gacggaagcc tgtcttaacc aatctctgga tgccctcctg
2401 tccagggatt tgatcatgaa ggaggactat gaactcatta gtaccaaacc tacaagaacc
2461 tcaaaagtca gacaattact ggataccact gacatccaag gagaagaatt tgccagagtt
2521 atagtacaaa agttgaaaga taacaagcaa atgggactcc agccttaccc agaaatactt
2581 gtggtttctc gaccaccatc tttaaattta ttttagggta ccagtcgact ctagaggatc
2641 ccgggtggca tccctgtgac ccctccccag tgcctctcct ggccctggaa gttgccactc
2701 cagtgcccac cagccttgtc ctaataaaat taagttgcat cattttgtct gactaggtgt
2761 ccttctataa tattatgggg tggagggggg tggtatggag caaggggcaa gttgggaaga
2821 caacctgtag ggcctgcggg gtctattggg aaccaagctg gagtgcagtg gcacaatctt
2881 ggctcactgc aatctccgcc tcctgggttc aagcgattct cctgcctcag cctcccgagt
2941 tgttgggatt ccaggcatgc atgaccaggc tcagctaatt tttgtttttt tggtagagac
3001 ggggtttcac catattggcc aggctggtct ccaactccta atctcaggtg atctacccac
3061 cttggcctcc caaattgctg ggattacagg cgtgaaccac tgctcccttc cctgtccttc
3121 tgattttaaa ataactatac cagcaggagg acgtccagac acagcatagg ctacctggcc
3181 atgcccaacc ggtgggacat ttgagttgct tgcttggcac tgtcctctca tgcgttgggt
3241 ccactcagta gatgcctgtt gaattgggta cgcggccagc ttggctgtgg aatgtgtgtc
3301 agttagggtg tggaaagtcc ccaggctccc cagcaggcag aagtatgcaa agcatgcatc
3361 tcaattagtc agcaaccagg tgtggaaagt ccccaggctc cccagcaggc agaagtatgc
3421 aaagcatgca tctcaattag tcagcaacca tagtcccgcc cctaactccg cccatcccgc
3481 ccctaactcc gcccagttcc gcccattctc cgccccatgg ctgactaatt ttttttattt
3541 atgcagaggc cgaggccgcc tcggcctctg agctattcca gaagtagtga ggaggctttt
3601 ttggaggaat tgatcagctt gggatctgat caagagacag gatgaggatc gtttcgcatg
3661 attgaacaag atggattgca cgcaggttct ccggccgctt gggtggagag gctattcggc
3721 tatgactggg cacaacagac aatcggctgc tctgatgccg ccgtgttccg gctgtcagcg
3781 caggggcgcc cggttctttt tgtcaagacc gacctgtccg gtgccctgaa tgaactgcag
3841 gacgaggcag cgcggctatc gtggctggcc acgacgggcg ttccttgcgc agctgtgctc
3901 gacgttgtca ctgaagcggg aagggactgg ctgctattgg gcgaagtgcc ggggcaggat
3961 ctcctgtcat ctcaccttgc tcctgccgag aaagtatcca tcatggctga tgcaatgcgg
4021 cggctgcata cgcttgatcc ggctacctgc ccattcgacc accaagcgaa acatcgcatc
4081 gagcgagcac gtactcggat ggaagccggt cttgtcgatc aggatgatct ggacgaagag
4141 catcaggggc tcgcgccagc cgaactgttc gccaggctca aggcgcgcat gcccgacggc
4201 gaggatctcg tcgtgaccca tggcgatgcc tgcttgccga atatcatggt ggaaaatggc
4261 cgcttttctg gattcatcga ctgtggccgg ctgggtgtgg cggaccgcta tcaggacata
4321 gcgttggcta cccgtgatat tgctgaagag cttggcggcg aatgggctga ccgcttcctc
4381 gtgctttacg gtatcgccgc tcccgattcg cagcgcatcg ccttctatcg ccttcttgac
4441 gagttcttct gagcgggact ctggggttcg aaatgaccga ccaagcgacg cccaacctgc
4501 catcacgaga tttcgattcc accgccgcct tctatgaaag gttgggcttc ggaatcgttt
4561 tccgggacgc cggctggatg atcctccagc gcggggatct catgctggag ttcttcgccc
4621 accccgggct cgatcccctc gcgagttggt tcagctgctg cctgaggctg gacgacctcg
4681 cggagttcta ccggcagtgc aaatccgtcg gcatccagga aaccagcagc ggctatccgc
4741 gcatccatgc ccccgaactg caggagtggg gaggcacgat ggccgctttg gtcgacccgg
4801 acgggacgct cctgcgcctg atacagaacg aattgcttgc aggcatctca tgagtgtgtc
4861 ttcccgtttt ccgcctgagg tcactgcgtg gatggagcgc tggcgcctgc tgcgcgacgg
4921 cgagctgctc accacccact cgccaagctg gaaccgtaaa aaggccgcgt tgctggcgtt
4981 tttccatagg ctccgccgat cataatcagc cataccacat ttgtagaggt tttacttgct
5041 ttaaaaaacc tcccacacct ccccctgaac ctgaaacata aaatgaatgc aattgttgtt
5101 gttaacttgt ttattgcagc ttataatggt tacaaataaa gcaatagcat cacaaatttc
5161 acaaataaag catttttttc actgcattct agttgtggtt tgtccaaact catcaatgta
5221 tcttatcatg tctggatcaa ttccctatag tgagtcgtat taaattcgta atcatgtcat
5281 agctgtttcc tgtgtgaaat tgttatccgc tcacaattcc acacaacata cgagccggaa
5341 gcataaagtg taaagcctgg ggtgcctaat gagtgagcta actcacatta attgcgttgc
5401 gctcactgcc cgctttccag tcgggaaacc tgtcgtgcca gctgcattaa tgaatcggcc
5461 aacgcgcggg gagaggcggt ttgcgtattg ggcgctcttc cgcttcctcg ctcactgact
5521 cgctgcgctc ggtcgttcgg ctgcggcgag cggtatcagc tcactcaaag gcggtaatac
5581 ggttatccac agaatcaggg gataacgcag gaaagaacat gtgagcaaaa ggccagcaaa
5641 aggccaggaa ccgtaaaaag gccgcgttgc tggcgttttt ccataggctc cgcccccctg
5701 acgagcatca caaaaatcga cgctcaagtc agaggtggcg aaacccgaca ggactataaa
5761 gataccaggc gtttccccct ggaagctccc tcgtgcgctc tcctgttccg accctgccgc
5821 ttaccggata cctgtccgcc tttctccctt cgggaagcgt ggcgctttct catagctcac
5881 gctgtaggta tctcagttcg gtgtaggtcg ttcgctccaa gctgggctgt gtgcacgaac
5941 cccccgttca gcccgaccgc tgcgccttat ccggtaacta tcgtcttgag tccaacccgg
6001 taagacacga cttatcgcca ctggcagcag ccactggtaa caggattagc agagcgaggt
6061 atgtaggcgg tgctacagag ttcttgaagt ggtggcctaa ctacggctac actagaagaa
6121 cagtatttgg tatctgcgct ctgctgaagc cagttacctt cggaaaaaga gttggtagct
6181 cttgatccgg caaacaaacc accgctggta gcggtggttt ttttgtttgc aagcagcaga
6241 ttacgcgcag aaaaaaagga tctcaagaag atcctttgat cttttctacg gggtctgacg
6301 ctcagtggaa cgaaaactca cgttaaggga ttttggtcat gagattatca aaaaggatct
6361 tcacctagat ccttttaaat taaaaatgaa gttttaaatc aatctaaagt atatatgagt
6421 aaacttggtc tgacagttac caatgcttaa tcagtgaggc acctatctca gcgatctgtc
6481 tatttcgttc atccatagtt gcctgactcc ccgtcgtgta gataactacg atacgggagg
6541 gcttaccatc tggccccagt gctgcaatga taccgcgaga cccacgctca ccggctccag
6601 atttatcagc aataaaccag ccagccggaa gggccgagcg cagaagtggt cctgcaactt
6661 tatccgcctc catccagtct attaattgtt gccgggaagc tagagtaagt agttcgccag
6721 ttaatagttt gcgcaacgtt gttgccattg ctacaggcat cgtggtgtca cgctcgtcgt
6781 ttggtatggc ttcattcagc tccggttccc aacgatcaag gcgagttaca tgatccccca
6841 tgttgtgcaa aaaagcggtt agctccttcg gtcctccgat cgttgtcaga agtaagttgg
6901 ccgcagtgtt atcactcatg gttatggcag cactgcataa ttctcttact gtcatgccat
6961 ccgtaagatg cttttctgtg actggtgagt actcaaccaa gtcattctga gaatagtgta
7021 tgcggcgacc gagttgctct tgcccggcgt caatacggga taataccgcg ccacatagca
7081 gaactttaaa agtgctcatc attggaaaac gttcttcggg gcgaaaactc tcaaggatct
7141 taccgctgtt gagatccagt tcgatgtaac ccactcgtgc acccaactga tcttcagcat
7201 cttttacttt caccagcgtt tctgggtgag caaaaacagg aaggcaaaat gccgcaaaaa
7261 agggaataag ggcgacacgg aaatgttgaa tactcatact cttccttttt caatattatt
7321 gaagcattta tcagggttat tgtctcatga gcggatacat atttgaatgt atttagaaaa
7381 ataaacaaat aggggttccg cgcacatttc cccgaaaagt gccacctgac gcgccctgta
7441 gcggcgcatt aagcgcggcg ggtgtggtgg ttacgcgcag cgtgaccgct acacttgcca
7501 gcgccctagc gcccgctcct ttcgctttct tcccttcctt tctcgccacg ttcgccggct
7561 ttccccgtca agctctaaat cgggggctcc ctttagggtt ccgatttagt gctttacggc
7621 acctcgaccc caaaaaactt gattagggtg atggttcacg tagtgggcca tcgccctgat
7681 agacggtttt tcgccctttg acgttggagt ccacgttctt taatagtgga ctcttgttcc
7741 aaactggaac aacactcaac cctatctcgg tctattcttt tgatttataa gggattttgc
7801 cgatttcggc ctattggtta aaaaatgagc tgatttaaca aaaatttaac gcgaatttta
7861 acaaaatatt aacgcttaca attt
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：p3×FLAG-CMV-10-RIP2-p猪源基因质粒
别称: p3×FLAG-CMV-10-RIP2-p
启动子：CMV
复制子: pUC
终止子: hGH poly(A) signal
质粒分类: 基因文库质粒；其它基因质粒；猪源基因质粒
质粒大小: 7884bp
质粒标签: N-3×FLAG
原核抗性: Amp
筛选标记：G418
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
表达宿主: 293T等哺乳细胞
质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：猪
基因类型：ORF
原核抗性：Amp
真核抗性：Neo/G418
荧光蛋白：
质粒简介
p3×FLAG-CMV-10-RIP2-p质粒是一个猪源基因过表达质粒，CMV启动子驱动3×FLAG标签和RIP2基因融合表达。p3×FLAG-CMV-10-RIP2-p质粒由淼灵生物开发。
PREDICTED: Sus scrofa receptor interacting serine/threonine kinase 2 (RIPK2), transcript variant X1, mRNA.NCBI Reference Sequence: XM_021089139.1.
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 7884 bp ds-DNA circular SYN 16-AUG-2017
DEFINITION synthetic circular DNA
KEYWORDS p3×FLAG-CMV-10-RIP2-p.dna
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..7884
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
enhancer 318..697
/label=CMV enhancer
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 698..901
/label=CMV promoter
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
CDS 931..996
/codon_start=1
/product="three tandem FLAG(R) epitope tags, followed by an
enterokinase cleavage site"
/label=3xFLAG
/translation="DYKDHDGDYKDHDIDYKDDDDK"
CDS 1015..2616
/codon_start=1
/label=RIP2-p
/translation="MNEEAICSALPTIPYRKLADLCYLSRGASGTVSSARHADWRIQVA
VKHLHIHTPLLDSERNDVLREAEILHKARFSYILPILGICNEPEFLGIVTEYMPNGSLN
ELLHRKNEYPDVPWPLRFRILHEIALGVNYLHNMNPPLLHHDLKTQNILLDNEFHVKIA
DFGLSKWRMMSLSQSRSIKSAPEGGTIIYMPPENYEPGQKSRATVKHDIYSYAVITWEV
LSRKQPFEEVTNPLQIMYSVSQGHRPDTSEESLPFDIPHRALMISLIESGWAQNPDERP
SFLKCLIELEPVLRIFEDITFLEAVIQLKKTKLQSASSTVHLCDKKKTELYPNTSVNHG
SQEESCGSSQLHKPSNSPGTSKSLSATQDSDFLSRKTQDFS-TPRQCPVNRSWDSNISVA
QRATFCDHKTTPCSLAIINPLSAEGNSERFQPGIAQQWIQSKREDIVNQMTEACLNQSL
DALLSRDLIMKEDYELISTKPTRTSKVRQLLDTTDIQGEEFARVIVQKLKDNKQMGLQP
YPEILVVSRPPSLNLF"
polyA_signal 2643..3265
/label=hGH poly(A) signal
/note="human growth hormone polyadenylation signal"
promoter 3307..3604
/label=SV40 promoter
/note="SV40 enhancer and early promoter"
CDS 3658..4452
/codon_start=1
/gene="aph(3')-II (or nptII)"
/product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
/label=Neo
/note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418
(Geneticin(R))"
/translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPAT-CPFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
GLAPAELFARLKARMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
polyA_signal 5104..5238
/label=SV40 poly(A) signal
/note="SV40 polyadenylation signal"
rep_origin complement(5678..6266)
/direction=LEFT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(6437..7297)
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/label=AmpR
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
promoter complement(7298..7402)
/gene="bla"
/label=AmpR promoter
rep_origin 7429..7884
/direction=RIGHT
/label=f1 ori
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
ORIGIN
1 ccattcgcca ttcaggctgc gcaactgttg ggaagggcga tcggtgcggg cctcttcgct
61 attacgccag ctggcgaaag ggggatgtgc tgcaaggcga ttaagttggg taacgccagg
121 gttttcccag tcacgacgtt gtaaaacgac ggccagtgcc aagctgatct atacattgaa
181 tcaatattgg caattagcca tattagtcat tggttatata gcataaatca atattggcta
241 ttggccattg catacgttgt atctatatca taatatgtac atttatattg gctcatgtcc
301 aatatgaccg ccatgttgac attgattatt gactagttat taatagtaat caattacggg
361 gtcattagtt catagcccat atatggagtt ccgcgttaca taacttacgg taaatggccc
421 gcctggctga ccgcccaacg acccccgccc attgacgtca ataatgacgt atgttcccat
481 agtaacgcca atagggactt tccattgacg tcaatgggtg gagtatttac ggtaaactgc
541 ccacttggca gtacatcaag tgtatcatat gccaagtccg ccccctattg acgtcaatga
601 cggtaaatgg cccgcctggc attatgccca gtacatgacc ttacgggact ttcctacttg
661 gcagtacatc tacgtattag tcatcgctat taccatggtg atgcggtttt ggcagtacac
721 caatgggcgt ggatagcggt ttgactcacg gggatttcca agtctccacc ccattgacgt
781 caatgggagt ttgttttggc accaaaatca acgggacttt ccaaaatgtc gtaataaccc
841 cgccccgttg acgcaaatgg gcggtaggcg tgtacggtgg gaggtctata taagcagagc
901 tcgtttagtg aaccgtcaga attaaccatg gactacaaag accatgacgg tgattataaa
961 gatcatgaca tcgattacaa ggatgacgat gacaagcttg cggccgcgaa ttcaatgaac
1021 gaggaggcca tctgcagcgc cctgcccacc atcccgtacc gaaagctcgc tgacctgtgc
1081 tacttgagcc gtggcgcgtc cggcaccgtg tcgtccgccc gccacgcaga ctggcgcatc
1141 caggtggccg taaagcactt gcacatccac accccactgc ttgacagtga aagaaatgat
1201 gtcttaagag aagctgaaat tttacacaaa gctagattta gttacattct tccaattttg
1261 ggaatttgca atgagcctga atttttggga atagttaccg aatatatgcc aaatggatcg
1321 ttaaatgaac tcctacatag gaaaaatgaa tatcctgatg ttccttggcc tttgagattt
1381 cgtattttgc atgaaattgc actaggtgta aattacctgc acaatatgaa tcctccttta
1441 cttcaccatg atctgaagac tcaaaatatc ttattggata atgaatttca tgttaagatt
1501 gcagattttg gtttatcaaa atggcgtatg atgtccctct cacaatcacg aagtattaaa
1561 tctgctccag aaggagggac aattatctat atgccacctg aaaactatga acctggacaa
1621 aaatcaaggg ctactgtcaa gcatgatata tatagttatg cagttatcac atgggaagtc
1681 ttatccagaa aacagccttt tgaagaagtc accaatcctt tgcagattat gtatagcgtg
1741 tcacaaggac atcgacctga cactagcgaa gaaagtttgc cgtttgatat acctcatcga
1801 gcactgatga tctctctaat agaaagtgga tgggcacaaa atccagatga aagaccatct
1861 ttcttaaaat gtttaataga acttgaacct gttctgagaa tatttgaaga tataactttc
1921 cttgaagctg ttattcaact aaagaaaaca aagttgcaaa gtgcttcgag tactgttcac
1981 ttatgtgaca agaagaaaac agagttatat ccgaacacat ctgtaaatca tggttcacaa
2041 gaggaatcat gtggatcttc gcagcttcat aaacctagta attctccagg aacctcaaag
2101 tccctgtcag ctactcaaga cagtgacttt ttatctagaa aaactcaaga cttttccacg
2161 ccacgtcagt gtccagtaaa tcgcagttgg gacagtaaca tttctgtggc tcaaagggca
2221 acattctgtg atcacaagac caccccatgc tctttagcaa taataaatcc actctcagcc
2281 gaaggaaatt cagagcgatt tcagcctggt atagcccaac agtggatcca gagtaaaagg
2341 gaagacattg tgaaccagat gacggaagcc tgtcttaacc aatctctgga tgccctcctg
2401 tccagggatt tgatcatgaa ggaggactat gaactcatta gtaccaaacc tacaagaacc
2461 tcaaaagtca gacaattact ggataccact gacatccaag gagaagaatt tgccagagtt
2521 atagtacaaa agttgaaaga taacaagcaa atgggactcc agccttaccc agaaatactt
2581 gtggtttctc gaccaccatc tttaaattta ttttagggta ccagtcgact ctagaggatc
2641 ccgggtggca tccctgtgac ccctccccag tgcctctcct ggccctggaa gttgccactc
2701 cagtgcccac cagccttgtc ctaataaaat taagttgcat cattttgtct gactaggtgt
2761 ccttctataa tattatgggg tggagggggg tggtatggag caaggggcaa gttgggaaga
2821 caacctgtag ggcctgcggg gtctattggg aaccaagctg gagtgcagtg gcacaatctt
2881 ggctcactgc aatctccgcc tcctgggttc aagcgattct cctgcctcag cctcccgagt
2941 tgttgggatt ccaggcatgc atgaccaggc tcagctaatt tttgtttttt tggtagagac
3001 ggggtttcac catattggcc aggctggtct ccaactccta atctcaggtg atctacccac
3061 cttggcctcc caaattgctg ggattacagg cgtgaaccac tgctcccttc cctgtccttc
3121 tgattttaaa ataactatac cagcaggagg acgtccagac acagcatagg ctacctggcc
3181 atgcccaacc ggtgggacat ttgagttgct tgcttggcac tgtcctctca tgcgttgggt
3241 ccactcagta gatgcctgtt gaattgggta cgcggccagc ttggctgtgg aatgtgtgtc
3301 agttagggtg tggaaagtcc ccaggctccc cagcaggcag aagtatgcaa agcatgcatc
3361 tcaattagtc agcaaccagg tgtggaaagt ccccaggctc cccagcaggc agaagtatgc
3421 aaagcatgca tctcaattag tcagcaacca tagtcccgcc cctaactccg cccatcccgc
3481 ccctaactcc gcccagttcc gcccattctc cgccccatgg ctgactaatt ttttttattt
3541 atgcagaggc cgaggccgcc tcggcctctg agctattcca gaagtagtga ggaggctttt
3601 ttggaggaat tgatcagctt gggatctgat caagagacag gatgaggatc gtttcgcatg
3661 attgaacaag atggattgca cgcaggttct ccggccgctt gggtggagag gctattcggc
3721 tatgactggg cacaacagac aatcggctgc tctgatgccg ccgtgttccg gctgtcagcg
3781 caggggcgcc cggttctttt tgtcaagacc gacctgtccg gtgccctgaa tgaactgcag
3841 gacgaggcag cgcggctatc gtggctggcc acgacgggcg ttccttgcgc agctgtgctc
3901 gacgttgtca ctgaagcggg aagggactgg ctgctattgg gcgaagtgcc ggggcaggat
3961 ctcctgtcat ctcaccttgc tcctgccgag aaagtatcca tcatggctga tgcaatgcgg
4021 cggctgcata cgcttgatcc ggctacctgc ccattcgacc accaagcgaa acatcgcatc
4081 gagcgagcac gtactcggat ggaagccggt cttgtcgatc aggatgatct ggacgaagag
4141 catcaggggc tcgcgccagc cgaactgttc gccaggctca aggcgcgcat gcccgacggc
4201 gaggatctcg tcgtgaccca tggcgatgcc tgcttgccga atatcatggt ggaaaatggc
4261 cgcttttctg gattcatcga ctgtggccgg ctgggtgtgg cggaccgcta tcaggacata
4321 gcgttggcta cccgtgatat tgctgaagag cttggcggcg aatgggctga ccgcttcctc
4381 gtgctttacg gtatcgccgc tcccgattcg cagcgcatcg ccttctatcg ccttcttgac
4441 gagttcttct gagcgggact ctggggttcg aaatgaccga ccaagcgacg cccaacctgc
4501 catcacgaga tttcgattcc accgccgcct tctatgaaag gttgggcttc ggaatcgttt
4561 tccgggacgc cggctggatg atcctccagc gcggggatct catgctggag ttcttcgccc
4621 accccgggct cgatcccctc gcgagttggt tcagctgctg cctgaggctg gacgacctcg
4681 cggagttcta ccggcagtgc aaatccgtcg gcatccagga aaccagcagc ggctatccgc
4741 gcatccatgc ccccgaactg caggagtggg gaggcacgat ggccgctttg gtcgacccgg
4801 acgggacgct cctgcgcctg atacagaacg aattgcttgc aggcatctca tgagtgtgtc
4861 ttcccgtttt ccgcctgagg tcactgcgtg gatggagcgc tggcgcctgc tgcgcgacgg
4921 cgagctgctc accacccact cgccaagctg gaaccgtaaa aaggccgcgt tgctggcgtt
4981 tttccatagg ctccgccgat cataatcagc cataccacat ttgtagaggt tttacttgct
5041 ttaaaaaacc tcccacacct ccccctgaac ctgaaacata aaatgaatgc aattgttgtt
5101 gttaacttgt ttattgcagc ttataatggt tacaaataaa gcaatagcat cacaaatttc
5161 acaaataaag catttttttc actgcattct agttgtggtt tgtccaaact catcaatgta
5221 tcttatcatg tctggatcaa ttccctatag tgagtcgtat taaattcgta atcatgtcat
5281 agctgtttcc tgtgtgaaat tgttatccgc tcacaattcc acacaacata cgagccggaa
5341 gcataaagtg taaagcctgg ggtgcctaat gagtgagcta actcacatta attgcgttgc
5401 gctcactgcc cgctttccag tcgggaaacc tgtcgtgcca gctgcattaa tgaatcggcc
5461 aacgcgcggg gagaggcggt ttgcgtattg ggcgctcttc cgcttcctcg ctcactgact
5521 cgctgcgctc ggtcgttcgg ctgcggcgag cggtatcagc tcactcaaag gcggtaatac
5581 ggttatccac agaatcaggg gataacgcag gaaagaacat gtgagcaaaa ggccagcaaa
5641 aggccaggaa ccgtaaaaag gccgcgttgc tggcgttttt ccataggctc cgcccccctg
5701 acgagcatca caaaaatcga cgctcaagtc agaggtggcg aaacccgaca ggactataaa
5761 gataccaggc gtttccccct ggaagctccc tcgtgcgctc tcctgttccg accctgccgc
5821 ttaccggata cctgtccgcc tttctccctt cgggaagcgt ggcgctttct catagctcac
5881 gctgtaggta tctcagttcg gtgtaggtcg ttcgctccaa gctgggctgt gtgcacgaac
5941 cccccgttca gcccgaccgc tgcgccttat ccggtaacta tcgtcttgag tccaacccgg
6001 taagacacga cttatcgcca ctggcagcag ccactggtaa caggattagc agagcgaggt
6061 atgtaggcgg tgctacagag ttcttgaagt ggtggcctaa ctacggctac actagaagaa
6121 cagtatttgg tatctgcgct ctgctgaagc cagttacctt cggaaaaaga gttggtagct
6181 cttgatccgg caaacaaacc accgctggta gcggtggttt ttttgtttgc aagcagcaga
6241 ttacgcgcag aaaaaaagga tctcaagaag atcctttgat cttttctacg gggtctgacg
6301 ctcagtggaa cgaaaactca cgttaaggga ttttggtcat gagattatca aaaaggatct
6361 tcacctagat ccttttaaat taaaaatgaa gttttaaatc aatctaaagt atatatgagt
6421 aaacttggtc tgacagttac caatgcttaa tcagtgaggc acctatctca gcgatctgtc
6481 tatttcgttc atccatagtt gcctgactcc ccgtcgtgta gataactacg atacgggagg
6541 gcttaccatc tggccccagt gctgcaatga taccgcgaga cccacgctca ccggctccag
6601 atttatcagc aataaaccag ccagccggaa gggccgagcg cagaagtggt cctgcaactt
6661 tatccgcctc catccagtct attaattgtt gccgggaagc tagagtaagt agttcgccag
6721 ttaatagttt gcgcaacgtt gttgccattg ctacaggcat cgtggtgtca cgctcgtcgt
6781 ttggtatggc ttcattcagc tccggttccc aacgatcaag gcgagttaca tgatccccca
6841 tgttgtgcaa aaaagcggtt agctccttcg gtcctccgat cgttgtcaga agtaagttgg
6901 ccgcagtgtt atcactcatg gttatggcag cactgcataa ttctcttact gtcatgccat
6961 ccgtaagatg cttttctgtg actggtgagt actcaaccaa gtcattctga gaatagtgta
7021 tgcggcgacc gagttgctct tgcccggcgt caatacggga taataccgcg ccacatagca
7081 gaactttaaa agtgctcatc attggaaaac gttcttcggg gcgaaaactc tcaaggatct
7141 taccgctgtt gagatccagt tcgatgtaac ccactcgtgc acccaactga tcttcagcat
7201 cttttacttt caccagcgtt tctgggtgag caaaaacagg aaggcaaaat gccgcaaaaa
7261 agggaataag ggcgacacgg aaatgttgaa tactcatact cttccttttt caatattatt
7321 gaagcattta tcagggttat tgtctcatga gcggatacat atttgaatgt atttagaaaa
7381 ataaacaaat aggggttccg cgcacatttc cccgaaaagt gccacctgac gcgccctgta
7441 gcggcgcatt aagcgcggcg ggtgtggtgg ttacgcgcag cgtgaccgct acacttgcca
7501 gcgccctagc gcccgctcct ttcgctttct tcccttcctt tctcgccacg ttcgccggct
7561 ttccccgtca agctctaaat cgggggctcc ctttagggtt ccgatttagt gctttacggc
7621 acctcgaccc caaaaaactt gattagggtg atggttcacg tagtgggcca tcgccctgat
7681 agacggtttt tcgccctttg acgttggagt ccacgttctt taatagtgga ctcttgttcc
7741 aaactggaac aacactcaac cctatctcgg tctattcttt tgatttataa gggattttgc
7801 cgatttcggc ctattggtta aaaaatgagc tgatttaaca aaaatttaac gcgaatttta
7861 acaaaatatt aacgcttaca attt
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P3525/pBluescriptR-SHCBP1（1点突变）人源基因质粒 |
| P4958/pBluescriptR-CCPG1人源基因质粒 |
| P4336/pOTB7-MYDGF人源基因质粒 |
| P4337/pOTB7-AKT1人源基因质粒 |
| P4338/pOTB7-EEF1AKMT4人源基因质粒 |
| P0595/pET28a-AFP人源基因质粒 |
| P0596/pET28a-H-FABP人源基因质粒 |
| P0969/pMCSG10-Map3k1人源基因质粒 |
| P0895/pET28a-hpKM1人源基因质粒 |
| P0643/pET28a-SUMO-TRFH人源基因质粒 |
| P0644/pGEX-6p-1-tankyrase人源基因质粒 |
风险提示：丁香通仅作为第三方平台，为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全，合理判断，谨慎选购商品，商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品，请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
文献和实验相关实验
）具有强大的保护作用，但它也可能阻碍药物的传输和吸收。AAV9、AAVPHP.B、 AAVPHP.eB、AAVPHP.S、AAV9P801 等血清型能够有效介导基因从外围向 CNS 的转移，然后将遗传物质递送到大脑或脊髓。 2017 年，Gradinaru 团队通过 CREATE 筛选技术，开发了两种新型 AAV 衣壳变体：AAV-PHP.eB（用于中枢神经系统）和 AAV-PHP.S（用于外周神经系统）（图 5）。AAV-PHP.eB 在 AAV-PHP.B 基础上进化而来，在低剂量（1×10¹¹
相关专题引物设计载体 名称上游引物 （ 5'primer ）下游引物（ 3'primer ）P3*FLAG-CMVCMV-30(825-854)CMV-24(1129-1152)pAc5.1/V5-His(_A,_B,_C)pAc5-5BGH revpAcG2TpGEX-5not availablepACTT7EEVT3/EBVrevpACT2GAL4 ADforpGAL4-ADrvpACT2p17110p12584pACYC184(BamHI-site
非病毒载体介导的基因治疗有许多优点，但就目前大多数表达体系而言普遍存在外源基因表达水平低而短暂等问题为了使外源基因稳定持续表达，必须对质粒DNA 进行改造。附着体质粒载体(episomal vector)可以使外源基因以附着体形式复制，分离到子代细胞，从而使基因高效持续表达，是种新型的非病毒表达载体 。 我们构建了以EB病毒(Epstein Barr virus，EBV)复制子(EBV replicon，EBVR)为基础的附着体质粒载体，并将报告基因增强型绿色
p3×FLAG-CMV-10-RIP2-p猪源基因质粒
￥100 - 1000
