- ￥100 - 1000
- Xybio
- 上海
- P1615
- 2025年07月13日
9 年钻石会员
企业认证
相关产品推荐更多 >
万千商家帮你免费找货
0 人在求购买到急需产品
- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pSilencer 3.1-H1-Stuffer-Hygro
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pSilencer3.1-H1-Stuffer-Hygro哺乳干扰质粒
别称: pSilencer 3.1-H1-Stuffer-Hygro
质粒属性
质粒简介
pSilencer3.1-H1-Stuffer-Hygro是一个哺乳细胞干扰载体，通过BamHI和HindIII酶切位点可连入SiRNA.
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 4555 bp ds-DNA circular SYN 05-NOV-2017
DEFINITION synthetic circular DNA
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 4555)
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..4555
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
promoter 402..492
/label=H1 promoter
/note="human H1 RNA promoter"
misc_feature 501..558
/label=Stuffer
rep_origin complement(979..1567)
/direction=LEFT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(1738..2598)
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/label=AmpR
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
polyA_signal 2751..2872
/label=SV40 poly(A) signal
/note="SV40 polyadenylation signal"
CDS complement(3002..4027)
/codon_start=1
/gene="aph(4)-Ia"
/product="aminoglycoside phosphotransferase from E. coli"
/label=HygR
/note="confers resistance to hygromycin"
/translation="MKKPELTATSVEKFLIEKFDSVSDLMQLSEGEESRAFSFDVGGRG
YVLRVNSCADGFYKDRYVYRHFASAALPIPEVLDIGEFSESLTYCISRRAQGVTLQDLP
ETELPAVLQPVAEAM-DAIAAADLSQTSGFGPFGPQGIGQYTTWRDFICAIADPHVYHWQ
TVMDDTVSASVAQALDELMLWAEDCPEVRHLVHADFGSNNVLTDNGRITAVIDWSEAMF
GDSQYEVANIFFWRPWLACMEQQTRYFERRHPELAGSPRLRAYMLRIGLDQLYQSLVDG
NFDDAAWAQGRCDAIVRSGAGTVGRTQIARRSAAVWTDGCVEVLADSGNRRPSTRPRAK
E"
promoter complement(4084..4294)
/label=SV40 promoter
/note="SV40 early promoter"
rep_origin 4090..4225
/label=SV40 ori
/note="SV40 origin of replication"
ORIGIN
1 tcgcgcgttt cggtgatgac ggtgaaaacc tctgacacat gcagctcccg gagacggtca
61 cagcttgtct gtaagcggat gccgggagca gacaagcccg tcagggcgcg tcagcgggtg
121 ttggcgggtg tcggggctgg cttaactatg cggcatcaga gcagattgta ctgagagtgc
181 accatatgcg gtgtgaaata ccgcacagat gcgtaaggag aaaataccgc atcaggcgcc
241 attcgccatt caggctgcgc aactgttggg aagggcgatc ggtgcgggcc tcttcgctat
301 tacgccagct ggcgaaaggg ggatgtgctg caaggcgatt aagttgggta acgccagggt
361 tttcccagtc acgacgttgt aaaacgacgg ccagtgaatt catatttgca tgtcgctatg
421 tgttctggga aatcaccata aacgtgaaat gtctttggat ttgggaatct tataagttct
481 gtatgagacc actcggatcc cagctcacaa ccaggatact ttcaagagaa gtatcctggt
541 tgtgagcttt ttttggaaaa gcttggcgta atcatggtca tagctgtttc ctgtgtgaaa
601 ttgttatccg ctcacaattc cacacaacat acgagccgga agcataaagt gtaaagcctg
661 gggtgcctaa tgagtgagct aactcacatt aattgcgttg cgctcactgc ccgctttcca
721 gtcgggaaac ctgtcgtgcc agctgcatta atgaatcggc caacgcgcgg ggagaggcgg
781 tttgcgtatt gggcgctctt ccgcttcctc gctcactgac tcgctgcgct cggtcgttcg
841 gctgcggcga gcggtatcag ctcactcaaa ggcggtaata cggttatcca cagaatcagg
901 ggataacgca ggaaagaaca tgtgagcaaa aggccagcaa aaggccagga accgtaaaaa
961 ggccgcgttg ctggcgtttt tccataggct ccgcccccct gacgagcatc acaaaaatcg
1021 acgctcaagt cagaggtggc gaaacccgac aggactataa agataccagg cgtttccccc
1081 tggaagctcc ctcgtgcgct ctcctgttcc gaccctgccg cttaccggat acctgtccgc
1141 ctttctccct tcgggaagcg tggcgctttc tcatagctca cgctgtaggt atctcagttc
1201 ggtgtaggtc gttcgctcca agctgggctg tgtgcacgaa ccccccgttc agcccgaccg
1261 ctgcgcctta tccggtaact atcgtcttga gtccaacccg gtaagacacg acttatcgcc
1321 actggcagca gccactggta acaggattag cagagcgagg tatgtaggcg gtgctacaga
1381 gttcttgaag tggtggccta actacggcta cactagaaga acagtatttg gtatctgcgc
1441 tctgctgaag ccagttacct tcggaaaaag agttggtagc tcttgatccg gcaaacaaac
1501 caccgctggt agcggtggtt tttttgtttg caagcagcag attacgcgca gaaaaaaagg
1561 atctcaagaa gatcctttga tcttttctac ggggtctgac gctcagtgga acgaaaactc
1621 acgttaaggg attttggtca tgagattatc aaaaaggatc ttcacctaga tccttttaaa
1681 ttaaaaatga agttttaaat caatctaaag tatatatgag taaacttggt ctgacagtta
1741 ccaatgctta atcagtgagg cacctatctc agcgatctgt ctatttcgtt catccatagt
1801 tgcctgactc cccgtcgtgt agataactac gatacgggag ggcttaccat ctggccccag
1861 tgctgcaatg ataccgcgag acccacgctc accggctcca gatttatcag caataaacca
1921 gccagccgga agggccgagc gcagaagtgg tcctgcaact ttatccgcct ccatccagtc
1981 tattaattgt tgccgggaag ctagagtaag tagttcgcca gttaatagtt tgcgcaacgt
2041 tgttgccatt gctacaggca tcgtggtgtc acgctcgtcg tttggtatgg cttcattcag
2101 ctccggttcc caacgatcaa ggcgagttac atgatccccc atgttgtgca aaaaagcggt
2161 tagctccttc ggtcctccga tcgttgtcag aagtaagttg gccgcagtgt tatcactcat
2221 ggttatggca gcactgcata attctcttac tgtcatgcca tccgtaagat gcttttctgt
2281 gactggtgag tactcaacca agtcattctg agaatagtgt atgcggcgac cgagttgctc
2341 ttgcccggcg tcaatacggg ataataccgc gccacatagc agaactttaa aagtgctcat
2401 cattggaaaa cgttcttcgg ggcgaaaact ctcaaggatc ttaccgctgt tgagatccag
2461 ttcgatgtaa cccactcgtg cacccaactg atcttcagca tcttttactt tcaccagcgt
2521 ttctgggtga gcaaaaacag gaaggcaaaa tgccgcaaaa aagggaataa gggcgacacg
2581 gaaatgttga atactcatac tcttcctttt tcaatattca ggctttacac tttatgcttc
2641 cggctcgtat gttgtgtgga attgtgagcg gataacaatt tcacacagga aacagctatg
2701 accatgatta cgccaagctc tagctagagg tcgacggtat acagacatga taagatacat
2761 tgatgagttt ggacaaacca caactagaat gcagtgaaaa aaatgcttta tttgtgaaat
2821 ttgtgatgct attgctttat ttgtaaccat tataagctgc aataaacaag ttggggtggg
2881 cgaagaactc cagcatgaga tccccgcgct ggaggatcat ccagccggcg tcccggaaaa
2941 cgattccgaa gcccaacctt tcatagaagg cggcggtgga atcgaaatct cgtagcacgt
3001 gctattcctt tgccctcgga cgagtgctgg ggcgtcggtt tccactatcg gcgagtactt
3061 ctacacagcc atcggtccag acggccgcgc ttctgcgggc gatttgtgta cgcccgacag
3121 tcccggctcc ggatcggacg attgcgtcgc atcgaccctg cgcccaagct gcatcatcga
3181 aattgccgtc aaccaagctc tgatagagtt ggtcaagacc aatgcggagc atatacgccc
3241 ggagccgcgg cgatcctgca agctccggat gcctccgctc gaagtagcgc gtctgctgct
3301 ccatacaagc caaccacggc ctccagaaga agatgttggc gacctcgtat tgggaatccc
3361 cgaacatcgc ctcgctccag tcaatgaccg ctgttatgcg gccattgtcc gtcaggacat
3421 tgttggagcc gaaatccgcg tgcacgaggt gccggacttc ggggcagtcc tcggcccaaa
3481 gcatcagctc atcgagagcc tgcgcgacgg acgcactgac ggtgtcgtcc atcacagttt
3541 gccagtgata cacatgggga tcagcaatcg cgcatatgaa atcacgccat gtagtgtatt
3601 gaccgattcc ttgcggtccg aatgggccga acccgctcgt ctggctaaga tcggccgcag
3661 cgatcgcatc catggcctcc gcgaccggct gcagaacagc gggcagttcg gtttcaggca
3721 ggtcttgcaa cgtgacaccc tgtgcacggc gggagatgca ataggtcagg ctctcgctga
3781 attccccaat gtcaagcact tccggaatcg ggagcgcggc cgatgcaaag tgccgataaa
3841 cataacgatc tttgtagaaa ccatcggcgc agctatttac ccgcaggaca tatccacgcc
3901 ctcctacatc gaagctgaaa gcacgagatt cttcgccctc cgagagctgc atcaggtcgg
3961 agacgctgtc gaacttttcg atcagaaact tctcgacaga cgtcgcggtg agttcaggct
4021 ttttcatcac gtgctgatca gatccgaaaa tggatataca agctcccggg agctttttgc
4081 aaaagcctag gcctccaaaa aagcctcctc actacttctg gaatagctca gaggcagagg
4141 cggcctcggc ctctgcataa ataaaaaaaa ttagtcagcc atggggcgga gaatgggcgg
4201 aactgggcgg agttaggggc gggatgggcg gagttagggg cgggactatg gttgctgact
4261 aattgagatg catgcttcgc atacttctgc ctgctgggga gcctggggac tttccacacc
4321 aggttgctga ctaattgaga tgcatgcttt gcatacttct gcctgctgga atattattga
4381 agcatttatc agggttattg tctcatgagc ggatacatat ttgaatgtat ttagaaaaat
4441 aaacaaatag gggttccgcg cacatttccc cgaaaagtgc cacctgacgt ctaagaaacc
4501 attattatca tgacattaac ctataaaaat aggcgtatca cgaggccctt tcgtc
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pSilencer3.1-H1-Stuffer-Hygro哺乳干扰质粒
别称: pSilencer 3.1-H1-Stuffer-Hygro
| 启动子: | H1 |
|---|---|
| 复制子: | pUC |
| 质粒大小: | 4555bp |
| 原核抗性: | Amp |
| 筛选标记: | Hyg |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
| 表达宿主: | 哺乳细胞 |
质粒属性
| 载体宿主： | 哺乳细胞 |
|---|---|
| 载体用途： | 干扰沉默 |
| 基因种属： | 空载体 |
| 基因类型： | shRNA |
| 原核抗性： | Amp |
| 真核抗性： | Hyg |
| 荧光蛋白： |
质粒简介
pSilencer3.1-H1-Stuffer-Hygro是一个哺乳细胞干扰载体，通过BamHI和HindIII酶切位点可连入SiRNA.
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 4555 bp ds-DNA circular SYN 05-NOV-2017
DEFINITION synthetic circular DNA
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 4555)
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..4555
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
promoter 402..492
/label=H1 promoter
/note="human H1 RNA promoter"
misc_feature 501..558
/label=Stuffer
rep_origin complement(979..1567)
/direction=LEFT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(1738..2598)
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/label=AmpR
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
polyA_signal 2751..2872
/label=SV40 poly(A) signal
/note="SV40 polyadenylation signal"
CDS complement(3002..4027)
/codon_start=1
/gene="aph(4)-Ia"
/product="aminoglycoside phosphotransferase from E. coli"
/label=HygR
/note="confers resistance to hygromycin"
/translation="MKKPELTATSVEKFLIEKFDSVSDLMQLSEGEESRAFSFDVGGRG
YVLRVNSCADGFYKDRYVYRHFASAALPIPEVLDIGEFSESLTYCISRRAQGVTLQDLP
ETELPAVLQPVAEAM-DAIAAADLSQTSGFGPFGPQGIGQYTTWRDFICAIADPHVYHWQ
TVMDDTVSASVAQALDELMLWAEDCPEVRHLVHADFGSNNVLTDNGRITAVIDWSEAMF
GDSQYEVANIFFWRPWLACMEQQTRYFERRHPELAGSPRLRAYMLRIGLDQLYQSLVDG
NFDDAAWAQGRCDAIVRSGAGTVGRTQIARRSAAVWTDGCVEVLADSGNRRPSTRPRAK
E"
promoter complement(4084..4294)
/label=SV40 promoter
/note="SV40 early promoter"
rep_origin 4090..4225
/label=SV40 ori
/note="SV40 origin of replication"
ORIGIN
1 tcgcgcgttt cggtgatgac ggtgaaaacc tctgacacat gcagctcccg gagacggtca
61 cagcttgtct gtaagcggat gccgggagca gacaagcccg tcagggcgcg tcagcgggtg
121 ttggcgggtg tcggggctgg cttaactatg cggcatcaga gcagattgta ctgagagtgc
181 accatatgcg gtgtgaaata ccgcacagat gcgtaaggag aaaataccgc atcaggcgcc
241 attcgccatt caggctgcgc aactgttggg aagggcgatc ggtgcgggcc tcttcgctat
301 tacgccagct ggcgaaaggg ggatgtgctg caaggcgatt aagttgggta acgccagggt
361 tttcccagtc acgacgttgt aaaacgacgg ccagtgaatt catatttgca tgtcgctatg
421 tgttctggga aatcaccata aacgtgaaat gtctttggat ttgggaatct tataagttct
481 gtatgagacc actcggatcc cagctcacaa ccaggatact ttcaagagaa gtatcctggt
541 tgtgagcttt ttttggaaaa gcttggcgta atcatggtca tagctgtttc ctgtgtgaaa
601 ttgttatccg ctcacaattc cacacaacat acgagccgga agcataaagt gtaaagcctg
661 gggtgcctaa tgagtgagct aactcacatt aattgcgttg cgctcactgc ccgctttcca
721 gtcgggaaac ctgtcgtgcc agctgcatta atgaatcggc caacgcgcgg ggagaggcgg
781 tttgcgtatt gggcgctctt ccgcttcctc gctcactgac tcgctgcgct cggtcgttcg
841 gctgcggcga gcggtatcag ctcactcaaa ggcggtaata cggttatcca cagaatcagg
901 ggataacgca ggaaagaaca tgtgagcaaa aggccagcaa aaggccagga accgtaaaaa
961 ggccgcgttg ctggcgtttt tccataggct ccgcccccct gacgagcatc acaaaaatcg
1021 acgctcaagt cagaggtggc gaaacccgac aggactataa agataccagg cgtttccccc
1081 tggaagctcc ctcgtgcgct ctcctgttcc gaccctgccg cttaccggat acctgtccgc
1141 ctttctccct tcgggaagcg tggcgctttc tcatagctca cgctgtaggt atctcagttc
1201 ggtgtaggtc gttcgctcca agctgggctg tgtgcacgaa ccccccgttc agcccgaccg
1261 ctgcgcctta tccggtaact atcgtcttga gtccaacccg gtaagacacg acttatcgcc
1321 actggcagca gccactggta acaggattag cagagcgagg tatgtaggcg gtgctacaga
1381 gttcttgaag tggtggccta actacggcta cactagaaga acagtatttg gtatctgcgc
1441 tctgctgaag ccagttacct tcggaaaaag agttggtagc tcttgatccg gcaaacaaac
1501 caccgctggt agcggtggtt tttttgtttg caagcagcag attacgcgca gaaaaaaagg
1561 atctcaagaa gatcctttga tcttttctac ggggtctgac gctcagtgga acgaaaactc
1621 acgttaaggg attttggtca tgagattatc aaaaaggatc ttcacctaga tccttttaaa
1681 ttaaaaatga agttttaaat caatctaaag tatatatgag taaacttggt ctgacagtta
1741 ccaatgctta atcagtgagg cacctatctc agcgatctgt ctatttcgtt catccatagt
1801 tgcctgactc cccgtcgtgt agataactac gatacgggag ggcttaccat ctggccccag
1861 tgctgcaatg ataccgcgag acccacgctc accggctcca gatttatcag caataaacca
1921 gccagccgga agggccgagc gcagaagtgg tcctgcaact ttatccgcct ccatccagtc
1981 tattaattgt tgccgggaag ctagagtaag tagttcgcca gttaatagtt tgcgcaacgt
2041 tgttgccatt gctacaggca tcgtggtgtc acgctcgtcg tttggtatgg cttcattcag
2101 ctccggttcc caacgatcaa ggcgagttac atgatccccc atgttgtgca aaaaagcggt
2161 tagctccttc ggtcctccga tcgttgtcag aagtaagttg gccgcagtgt tatcactcat
2221 ggttatggca gcactgcata attctcttac tgtcatgcca tccgtaagat gcttttctgt
2281 gactggtgag tactcaacca agtcattctg agaatagtgt atgcggcgac cgagttgctc
2341 ttgcccggcg tcaatacggg ataataccgc gccacatagc agaactttaa aagtgctcat
2401 cattggaaaa cgttcttcgg ggcgaaaact ctcaaggatc ttaccgctgt tgagatccag
2461 ttcgatgtaa cccactcgtg cacccaactg atcttcagca tcttttactt tcaccagcgt
2521 ttctgggtga gcaaaaacag gaaggcaaaa tgccgcaaaa aagggaataa gggcgacacg
2581 gaaatgttga atactcatac tcttcctttt tcaatattca ggctttacac tttatgcttc
2641 cggctcgtat gttgtgtgga attgtgagcg gataacaatt tcacacagga aacagctatg
2701 accatgatta cgccaagctc tagctagagg tcgacggtat acagacatga taagatacat
2761 tgatgagttt ggacaaacca caactagaat gcagtgaaaa aaatgcttta tttgtgaaat
2821 ttgtgatgct attgctttat ttgtaaccat tataagctgc aataaacaag ttggggtggg
2881 cgaagaactc cagcatgaga tccccgcgct ggaggatcat ccagccggcg tcccggaaaa
2941 cgattccgaa gcccaacctt tcatagaagg cggcggtgga atcgaaatct cgtagcacgt
3001 gctattcctt tgccctcgga cgagtgctgg ggcgtcggtt tccactatcg gcgagtactt
3061 ctacacagcc atcggtccag acggccgcgc ttctgcgggc gatttgtgta cgcccgacag
3121 tcccggctcc ggatcggacg attgcgtcgc atcgaccctg cgcccaagct gcatcatcga
3181 aattgccgtc aaccaagctc tgatagagtt ggtcaagacc aatgcggagc atatacgccc
3241 ggagccgcgg cgatcctgca agctccggat gcctccgctc gaagtagcgc gtctgctgct
3301 ccatacaagc caaccacggc ctccagaaga agatgttggc gacctcgtat tgggaatccc
3361 cgaacatcgc ctcgctccag tcaatgaccg ctgttatgcg gccattgtcc gtcaggacat
3421 tgttggagcc gaaatccgcg tgcacgaggt gccggacttc ggggcagtcc tcggcccaaa
3481 gcatcagctc atcgagagcc tgcgcgacgg acgcactgac ggtgtcgtcc atcacagttt
3541 gccagtgata cacatgggga tcagcaatcg cgcatatgaa atcacgccat gtagtgtatt
3601 gaccgattcc ttgcggtccg aatgggccga acccgctcgt ctggctaaga tcggccgcag
3661 cgatcgcatc catggcctcc gcgaccggct gcagaacagc gggcagttcg gtttcaggca
3721 ggtcttgcaa cgtgacaccc tgtgcacggc gggagatgca ataggtcagg ctctcgctga
3781 attccccaat gtcaagcact tccggaatcg ggagcgcggc cgatgcaaag tgccgataaa
3841 cataacgatc tttgtagaaa ccatcggcgc agctatttac ccgcaggaca tatccacgcc
3901 ctcctacatc gaagctgaaa gcacgagatt cttcgccctc cgagagctgc atcaggtcgg
3961 agacgctgtc gaacttttcg atcagaaact tctcgacaga cgtcgcggtg agttcaggct
4021 ttttcatcac gtgctgatca gatccgaaaa tggatataca agctcccggg agctttttgc
4081 aaaagcctag gcctccaaaa aagcctcctc actacttctg gaatagctca gaggcagagg
4141 cggcctcggc ctctgcataa ataaaaaaaa ttagtcagcc atggggcgga gaatgggcgg
4201 aactgggcgg agttaggggc gggatgggcg gagttagggg cgggactatg gttgctgact
4261 aattgagatg catgcttcgc atacttctgc ctgctgggga gcctggggac tttccacacc
4321 aggttgctga ctaattgaga tgcatgcttt gcatacttct gcctgctgga atattattga
4381 agcatttatc agggttattg tctcatgagc ggatacatat ttgaatgtat ttagaaaaat
4441 aaacaaatag gggttccgcg cacatttccc cgaaaagtgc cacctgacgt ctaagaaacc
4501 attattatca tgacattaac ctataaaaat aggcgtatca cgaggccctt tcgtc
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P4613/pCMV-SPORT6-TPP1（1点突变）人源基因质粒 |
| P4614/pCMV-SPORT6-PANX1-A15C人源基因质粒 |
| P4615/pCMV-SPORT6-ACOX3人源基因质粒 |
| P4616/pCMV-SPORT6-SOCS6人源基因质粒 |
| P4617/pCMV-SPORT6-HLA-DOA人源基因质粒 |
| P4618/pCMV-SPORT6-ADORA2A人源基因质粒 |
| P4619/pCMV-SPORT6-ZBTB22(1点突变）人源基因质粒 |
| P4620/pCMV-SPORT6-ARL8A人源基因质粒 |
| P4621/pCMV-SPORT6-MAGEB1人源基因质粒 |
| P4622/pCMV-SPORT6-MUDENG人源基因质粒 |
| P4623/pCMV-SPORT6-CLIP3人源基因质粒 |
风险提示：丁香通仅作为第三方平台，为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全，合理判断，谨慎选购商品，商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品，请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
文献和实验相关实验
载体依赖3种RNA聚合酶III 启动子(pol III)中的一种，操纵一段小的发夹siRNA在哺乳动物细胞中的表达(1–4)。这3类启动子包括大家熟悉的人源和鼠源的U6启动子和人H1启动子。之所以采用RNA pol III启动子是由于它可以在哺乳动物细胞中表达更多的小分子RNA，而且它是通过添加一串（3到6个）U来终止转录的。要使用这类载体，需要订购2段编码短发夹RNA序列的DNA单链，退火，克隆到相应载体的pol III 启动子下游。由于涉及到克隆，这个过程需要几天的时间，同时也需要经过测序以保证
9K(AMP+、ZEO+） 5’AOX/a-factor 3’AOX pPICZa 5'AOX/PPICZa-F 3'AOX pPROEXHTA M13R(-48) 无反向引物 pQE30or40 pQE30-F pQE-R: pRSET T7 T7TER pSilencer3.1-H1 hygro M13F(-47) 3.0REV pSILENCEV2.0-U6 T7 2.0REV pSK01-T M13F M13R pSK-CMV(KAN+) T7 T3 pSP72 T7 SP
pSilencer3.1-H1-Stuffer-Hygro哺乳干扰质粒
￥100 - 1000
