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- 2026年04月03日
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- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
Plasmid#22231
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
名称：pCMV FLAG WT-PTEN人源基因质粒
别称: Plasmid#22231
启动子：CMV
复制子: pUC
原核抗性: Kan
筛选标记：G418
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Kan
真核抗性：Neo/G418
荧光蛋白：
质粒简介
请根据质粒名称查找相关文献获知具体的使用方法。
质粒图谱
质粒序列：详询
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P0537/pET28a-TGFB1人源基因质粒 |
| P1054/pT7-His-AGK人源基因质粒 |
| P1055/pT7-His-TNF人源基因质粒 |
| P1140/pT7-His-IL13人源基因质粒 |
| P1160/pT7-His-LGALS13人源基因质粒 |
| P1161/pT7-His-IL4人源基因质粒 |
| P1162/pT7-His-IL6人源基因质粒 |
| P1163/pT7-His-TRAF6-S12F人源基因质粒 |
| P1164/pT7-His-GSK3B人源基因质粒 |
| P1165/pT7-His-CD1D人源基因质粒 |
| P1187/pT7-His-LGALS13人源基因质粒 |
| P0610/pT7-His-Survium人源基因质粒 |
| P1191/pT7-His-Nrf2人源基因质粒 |
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文献和实验【求助】克隆100个已知序列的基因于带有绿色荧光蛋白的载体中需要多少时间和经费？
个和12,000个，其中11,000个克隆的表达已经通过Western Blot的验证。这些克隆以2种形式提供：一种是在表达的蛋白C末端带Myc-DDK(即FLAG)标签，一种是带GFP标签。这些cDNA克隆均构建于pCMV6入门载体上，可方便转换至其他目的载体。 按照其网页上的促销价：900RMB/clone × 100 ＝ 9万RMB， 直接买，不用等时间，就可搞定，批量买估计还可以讲价，关键的是品质有保证。 注：非公司托儿，因前段时间帮朋友筹划项目专门研究
点突变 蛋白修饰 载体设计怎么做？磷酸化/乙酰化/乳酸化对照表收好
个化学基团"来开关功能，这个过程叫翻译后修饰（PTM），常见有磷酸化、乙酰化、乳酸化、SUMO 化、糖基化等。要在实验里研究某个修饰位点的作用，最常用办法是在载体上做点突变：把该位点的氨基酸换成"模拟修饰"或"去除修饰"的残基，再看过表达后的功能变化。说白了，你没法直接给细胞加一个磷酸基，但你能造一个"看起来像被磷酸化"的蛋白变体，来推断这个修饰干了什么。 突变载体在细胞里怎么验证功能 设计位点 → 构建点突变过表达载体（通常带标签如 FLAG/HA/EGFP）→ 病毒或质粒送进细胞 → 检测下游
蛋白表达系统已经发展到了令人惊讶的顶峰时代。最近30年来，科学家们已经推动了基因工程、重组技术、纯化指南和性质鉴定等技术的急剧发展。其中包括驾驭病毒和细菌质粒的天然性质的能力，这些“carriers”将运载外源基因到宿主细胞中，然后被转化成蛋白。经过许多年的发展，蛋白生产能力的提高已经在进一步理解基因的功能和所编码蛋白的功用和相互作用等方面起到了积极作用，也将为寻找如单克隆抗体等治疗性蛋白打下基础。Paul Berg在他1980年的诺贝尔演讲中说：“毫无疑问，重组DNA技术的应用和发展
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