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- 2026年01月21日
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- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
Plasmid#65947;CCDC88AAPEGIRDINGIVGRD
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
名称：GIV-WT - FLAG人源基因质粒
别称: Plasmid#65947;CCDC88AAPEGIRDINGIVGRD
启动子：CMV
复制子: pUC
原核抗性: Amp
筛选标记：G418
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Amp
真核抗性：Neo/G418
荧光蛋白：
质粒简介
GIV-WT - FLAG是一个人源基因哺乳细胞过表达质粒。
质粒图谱
可通过全长测序获知。
质粒序列
可通过全长测序获知。
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P4353/pECMV-3×FLAG-EIF2S2人源基因质粒 |
| P4354/pECMV-3×FLAG-EMC2人源基因质粒 |
| P4355/pECMV-3×FLAG-ERP27人源基因质粒 |
| P4356/pECMV-3×FLAG-FAM118B人源基因质粒 |
| P4357/pECMV-3×FLAG-FKBPL人源基因质粒 |
| P4358/pECMV-3×FLAG-FOXA3人源基因质粒 |
| P4359/pECMV-3×FLAG-GNB1L人源基因质粒 |
| P4360/pECMV-3×FLAG-TSGA13人源基因质粒 |
| P4361/pECMV-3×FLAG-PEF1(1同义突变）人源基因质粒 |
| P4362/pECMV-3×FLAG-ZBED6CL人源基因质粒 |
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文献和实验点突变 蛋白修饰 载体设计怎么做？磷酸化/乙酰化/乳酸化对照表收好
个化学基团"来开关功能，这个过程叫翻译后修饰（PTM），常见有磷酸化、乙酰化、乳酸化、SUMO 化、糖基化等。要在实验里研究某个修饰位点的作用，最常用办法是在载体上做点突变：把该位点的氨基酸换成"模拟修饰"或"去除修饰"的残基，再看过表达后的功能变化。说白了，你没法直接给细胞加一个磷酸基，但你能造一个"看起来像被磷酸化"的蛋白变体，来推断这个修饰干了什么。 突变载体在细胞里怎么验证功能 设计位点 → 构建点突变过表达载体（通常带标签如 FLAG/HA/EGFP）→ 病毒或质粒送进细胞 → 检测下游
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