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- 上海
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- 2025年07月09日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
PIK3C3;hVps34
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pCMV-Myc-VPS34人源基因质粒
别称: PIK3C3;hVps34
启动子：CMV
质粒标签：N-HA
原核抗性: Amp
筛选标记：G418
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Amp
真核抗性：
荧光蛋白：
质粒简介
pCMV-Myc-VPS34(PIK3C3)是一个人源基因哺乳细胞表达质粒。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 6447 bp ds-DNA circular SYN 02-JAN-2018
DEFINITION synthetic circular DNA
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..6447
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
promoter 331..534
/label=CMV promoter
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
CDS 841..870
/codon_start=1
/product="Myc (human c-Myc oncogene) epitope tag"
/label=Myc
/translation="EQKLISEEDL"
CDS 898..3561
/codon_start=1
/product="Homo sapiens phosphatidylinositol 3-kinase
catalytic subunit type 3 (PIK3C3), transcript variant 1,
mRNA
NCBI Reference Sequence: NM_002647.3"
/label=VPS34
/translation="MGEAEKFHYIYSCDLDINVQLKIGSLEGKREQKSYKAVLEDPMLK
FSGLYQETCSDLYVTCQVFAEGKPLALPVRTSYKAFSTRWNWNEWLKLPVKYPDLPRNA
QVALTIWDVYGPGKAVPVGGTTVSLFGKYGMFRQGMHDLKVWPNVEADGSEPTKTPGRT
SSTLSEDQMSRLAKLTKAHRQGHMVKVDWLDRLTFREIEMINESEKRSSNFMYLMVEFR
CVKCDDKEYGIVYYEKDGDESSPILTSFELVKVPDPQMSMENLVESKHHKLARSLRSGP
SDHDLKPNAATRDQLNIIVSYPPTKQLTYEEQDLVWKFRYYLTNQEKALTKFLKCVNWD
LPQEAKQALELLGKWKPMDVEDSLELLSSHYTNPTVRRYAVARLRQADDEDLLMYLLQL
VQALKYENFDDIKNGLEPTKKDSQSSVSENVSNSGINSAEIDSSQIITSPLPSVSSPPP
ASKTKEVPDGENLEQDLCTFLISRACKNSTLANYLYWYVIVECEDQDTQQRDPKTHEMY
LNVMRRFSQALLKGDKSVRVMRSLLAAQQTFVDRLVHLMKAVQRESGNRKKKNERLQAL
LGDNEKMNL-SDVELIPLPLEPQVKIRGIIPETATLFKSALMPAQLFFKTEDGGKYPVIF
KHGDDLRQDQLILQIISLMDKLLRKENLDLKLTPYKVLATSTKHGFMQFIQSVPVAEVL
DTEGSIQNFFRKYAPSENGPNGISAEVMDTYVKSCAGYCVITYILGVGDRHLDNLLLTK
TGKLFHIDFGYILGRDPKPLPPPMKLNKEMVEGMGGTQSEQYQEFRKQCYTAFLHLRRY
SNLILNLFSLMVDANIPDIALEPDKTVKKVQDKFRLDL-SDEEAVHYMQSLIDESVHALF
AAVVEQIHKFAQYWRK"
polyA_signal 3586..3720
/label=SV40 poly(A) signal
/note="SV40 polyadenylation signal"
rep_origin complement(4233..4821)
/direction=LEFT
/label=ori
/note="high-copy-number colE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(4992..5852)
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/label=AmpR
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
promoter complement(5853..5957)
/gene="bla"
/label=AmpR promoter
ORIGIN
1 gagttcgagc ttgcatgcct gcaggtcgtt acataactta cggtaaatgg cccgcctggc
61 tgaccgccca acgacccccg cccattgacg tcaataatga cgtatgttcc catagtaacg
121 ccaataggga ctttccattg acgtcaatgg gtggagtatt tacggtaaac tgcccacttg
181 gcagtacatc aagtgtatca tatgccaagt acgcccccta ttgacgtcaa tgacggtaaa
241 tggcccgcct ggcattatgc ccagtacatg accttatggg actttcctac ttggcagtac
301 atctacgtat tagtcatcgc tattaccatg gtgatgcggt tttggcagta catcaatggg
361 cgtggatagc ggtttgactc acggggattt ccaagtctcc accccattga cgtcaatggg
421 agtttgtttt ggcaccaaaa tcaacgggac tttccaaaat gtcgtaacaa ctccgcccca
481 ttgacgcaaa tgggcggtag gcgtgtacgg tgggaggtct atataagcag agctcgttta
541 gtgaaccgtc agatcgcctg gagacgccat ccacgctgtt ttgacctcca tagaagacac
601 cgggaccgat ccagcctccg gactctagag gatccggtac tagaggaact gaaaaaccag
661 aaagttaact ggtaagttta gtctttttgt cttttatttc aggtcccgga tccggtggtg
721 gtgcaaatca aagaactgct cctcagtgga tgttgccttt acttctaggc ctgtacggaa
781 gtgttacttc tgctctaaaa gctgcggaat tgtacccgcg ggcccaccat ggcatcaatg
841 gagcagaagc tgatctcaga ggaggacctg cttatggcca tggaggcccg aattcgcatg
901 ggggaagcag agaagtttca ctacatctat agttgtgacc tggatatcaa cgtccagctt
961 aagataggaa gcttggaagg gaagagagaa caaaagagtt ataaagctgt cctggaagac
1021 ccaatgttga agttctcagg actatatcaa gagacatgct ctgatcttta tgttacttgt
1081 caagtttttg cagaagggaa gcctttggcc ttgccagtga gaacatccta caaagcattt
1141 agtacaagat ggaactggaa tgaatggctg aaactaccag taaaataccc tgacctgccc
1201 aggaatgccc aagtggccct caccatatgg gatgtgtatg gtcccggaaa agcagtgcct
1261 gtaggaggaa caacggtttc gctctttgga aaatacggca tgtttcgcca agggatgcat
1321 gacttgaaag tctggcctaa tgtagaagca gatggatcag aacccacaaa aactcctggc
1381 agaacaagta gcactctctc agaagatcag atgagccgtc ttgccaagct caccaaagct
1441 catcgacaag gacacatggt gaaagtagat tggctggata gattgacatt tagagaaata
1501 gaaatgataa atgagagtga aaaacgaagt tctaatttca tgtacctgat ggttgaattt
1561 cgatgtgtca agtgtgatga taaggaatat ggtattgttt attatgaaaa ggacggtgat
1621 gaatcatctc caattttaac aagttttgaa ttagtgaaag ttcctgaccc ccagatgtct
1681 atggagaatt tagttgagag caaacaccac aagcttgccc ggagtttaag aagtggacct
1741 tctgaccacg atctgaaacc caatgctgcc acgagagatc agttaaatat tattgtgagt
1801 tatccaccaa ccaagcaact tacatatgaa gaacaagatc ttgtttggaa gtttagatat
1861 tatcttacga atcaagaaaa agccttgaca aaattcttga aatgtgttaa ttgggatcta
1921 cctcaagagg ccaaacaggc cttggaactt ctgggaaaat ggaagccgat ggatgtagag
1981 gactccttgg agctgttatc ctctcattac accaacccaa ctgtgaggcg ttatgctgtt
2041 gcccggttgc gacaggccga tgatgaggat ttgttgatgt acctattaca attggtccag
2101 gctctcaaat atgaaaattt tgatgatata aagaatggat tggaacctac caagaaggat
2161 agtcagagtt cagtgtcaga aaatgtgtca aattctggaa taaattctgc agaaatagat
2221 agctcccaaa ttataaccag cccccttcct tcagtctctt cacctcctcc tgcatcaaaa
2281 acaaaagaag ttccagatgg cgaaaatctg gaacaagatc tctgtacctt cttgatatcg
2341 agagcctgca aaaactcaac actggctaat tatttatact ggtatgtgat agtggaatgt
2401 gaagatcaag atactcagca gagagatcca aagacccatg agatgtactt gaacgtaatg
2461 agaagattca gccaagcatt gttgaagggt gataagtctg tcagagttat gcgttctttg
2521 ctggctgcac aacagacatt tgtagatcgg ttggtgcatc taatgaaggc agtacaacgc
2581 gaaagtggaa atcgtaagaa aaagaatgag agactacagg cattgcttgg agataatgaa
2641 aagatgaatt tgtcagatgt ggaacttatc ccgttgcctt tagaacccca agtgaaaatt
2701 agaggaataa ttccggaaac agctacactg tttaaaagtg cccttatgcc tgcacagttg
2761 ttttttaaga cggaagatgg aggcaaatat ccagttatat ttaagcatgg agatgattta
2821 cgtcaagatc aacttattct tcaaatcatt tcactcatgg acaagctgtt acggaaagaa
2881 aatctggact tgaaattgac accttataag gtgttagcca ccagtacaaa acatggcttc
2941 atgcagttta tccagtcagt tcctgtggct gaagttcttg atacagaggg aagcattcag
3001 aactttttta gaaaatatgc accaagtgag aatgggccaa atgggattag tgctgaggtc
3061 atggacactt acgttaaaag ctgtgctgga tattgcgtga tcacctatat acttggagtt
3121 ggagacaggc acctggataa ccttttgcta acaaaaacag gcaaactctt ccacatagac
3181 tttggatata ttttgggtcg ggatccaaag cctcttcctc caccaatgaa gctgaataaa
3241 gaaatggtag aaggaatggg gggcacacag agtgagcagt accaagagtt ccgtaaacag
3301 tgttacacgg ctttcctcca cctgcgaagg tattctaatc tgattttgaa cttgttttcc
3361 ttgatggttg atgcaaacat tccagatatt gcacttgaac cagataaaac tgtgaaaaag
3421 gttcaggata aattccgctt agacctgtcg gatgaagagg ctgtgcatta catgcagagt
3481 ctgattgatg agagtgtcca tgctcttttt gctgcagtgg tggaacagat tcacaagttt
3541 gcccagtact ggagaaaatg acgctcgagg taccgcggcc gcggggatcc agacatgata
3601 agatacattg atgagtttgg acaaaccaca actagaatgc agtgaaaaaa atgctttatt
3661 tgtgaaattt gtgatgctat tgctttattt gtaaccatta taagctgcaa taaacaagtt
3721 aacaacaaca attgcattca ttttatgttt caggttcagg gggaggtgtg ggaggttttt
3781 tcggatcctc tagagtcgat ctgcaggcat gctagcttgg cgtaatcatg gtcatagctg
3841 tttcctgtgt gaaattgtta tccgctcaca attccacaca acatacgagc cggaagcata
3901 aagtgtaaag cctggggtgc ctaatgagtg agctaactca cattaattgc gttgcgctca
3961 ctgcccgctt tccagtcggg aaacctgtcg tgccagctgc attaatgaat cggccaacgc
4021 gcggggagag gcggtttgcg tattgggcgc tcttccgctt cctcgctcac tgactcgctg
4081 cgctcggtcg ttcggctgcg gcgagcggta tcagctcact caaaggcggt aatacggtta
4141 tccacagaat caggggataa cgcaggaaag aacatgtgag caaaaggcca gcaaaaggcc
4201 aggaaccgta aaaaggccgc gttgctggcg tttttccata ggctccgccc ccctgacgag
4261 catcacaaaa atcgacgctc aagtcagagg tggcgaaacc cgacaggact ataaagatac
4321 caggcgtttc cccctggaag ctccctcgtg cgctctcctg ttccgaccct gccgcttacc
4381 ggatacctgt ccgcctttct cccttcggga agcgtggcgc tttctcatag ctcacgctgt
4441 aggtatctca gttcggtgta ggtcgttcgc tccaagctgg gctgtgtgca cgaacccccc
4501 gttcagcccg accgctgcgc cttatccggt aactatcgtc ttgagtccaa cccggtaaga
4561 cacgacttat cgccactggc agcagccact ggtaacagga ttagcagagc gaggtatgta
4621 ggcggtgcta cagagttctt gaagtggtgg cctaactacg gctacactag aagaacagta
4681 tttggtatct gcgctctgct gaagccagtt accttcggaa aaagagttgg tagctcttga
4741 tccggcaaac aaaccaccgc tggtagcggt ggtttttttg tttgcaagca gcagattacg
4801 cgcagaaaaa aaggatctca agaagatcct ttgatctttt ctacggggtc tgacgctcag
4861 tggaacgaaa actcacgtta agggattttg gtcatgagat tatcaaaaag gatcttcacc
4921 tagatccttt taaattaaaa atgaagtttt aaatcaatct aaagtatata tgagtaaact
4981 tggtctgaca gttaccaatg cttaatcagt gaggcaccta tctcagcgat ctgtctattt
5041 cgttcatcca tagttgcctg actccccgtc gtgtagataa ctacgatacg ggagggctta
5101 ccatctggcc ccagtgctgc aatgataccg cgagacccac gctcaccggc tccagattta
5161 tcagcaataa accagccagc cggaagggcc gagcgcagaa gtggtcctgc aactttatcc
5221 gcctccatcc agtctattaa ttgttgccgg gaagctagag taagtagttc gccagttaat
5281 agtttgcgca acgttgttgc cattgctaca ggcatcgtgg tgtcacgctc gtcgtttggt
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5401 tgcaaaaaag cggttagctc cttcggtcct ccgatcgttg tcagaagtaa gttggccgca
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5521 agatgctttt ctgtgactgg tgagtactca accaagtcat tctgagaata gtgtatgcgg
5581 cgaccgagtt gctcttgccc ggcgtcaata cgggataata ccgcgccaca tagcagaact
5641 ttaaaagtgc tcatcattgg aaaacgttct tcggggcgaa aactctcaag gatcttaccg
5701 ctgttgagat ccagttcgat gtaacccact cgtgcaccca actgatcttc agcatctttt
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5821 ataagggcga cacggaaatg ttgaatactc atactcttcc tttttcaata ttattgaagc
5881 atttatcagg gttattgtct catgagcgga tacatatttg aatgtattta gaaaaataaa
5941 caaatagggg ttccgcgcac atttccccga aaagtgccac ctgacgtcta agaaaccatt
6001 attatcatga cattaaccta taaaaatagg cgtatcacga ggccctttcg tctcgcgcgt
6061 ttcggtgatg acggtgaaaa cctctgacac atgcagctcc cggagacggt cacagcttgt
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6241 cggtgtgaaa taccgcacag atgcgtaagg agaaaatacc gcatcaggcg ccattcgcca
6301 ttcaggctgc gcaactgttg ggaagggcga tcggtgcggg cctcttcgct attacgccag
6361 ctggcgaaag ggggatgtgc tgcaaggcga ttaagttggg taacgccagg gttttcccag
6421 tcacgacgtt gtaaaacgac ggccagt
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pCMV-Myc-VPS34人源基因质粒
别称: PIK3C3;hVps34
启动子：CMV
质粒标签：N-HA
原核抗性: Amp
筛选标记：G418
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Amp
真核抗性：
荧光蛋白：
质粒简介
pCMV-Myc-VPS34(PIK3C3)是一个人源基因哺乳细胞表达质粒。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 6447 bp ds-DNA circular SYN 02-JAN-2018
DEFINITION synthetic circular DNA
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..6447
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
promoter 331..534
/label=CMV promoter
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
CDS 841..870
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/label=Myc
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CDS 898..3561
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catalytic subunit type 3 (PIK3C3), transcript variant 1,
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NCBI Reference Sequence: NM_002647.3"
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FSGLYQETCSDLYVTCQVFAEGKPLALPVRTSYKAFSTRWNWNEWLKLPVKYPDLPRNA
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SSTLSEDQMSRLAKLTKAHRQGHMVKVDWLDRLTFREIEMINESEKRSSNFMYLMVEFR
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SDHDLKPNAATRDQLNIIVSYPPTKQLTYEEQDLVWKFRYYLTNQEKALTKFLKCVNWD
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ASKTKEVPDGENLEQDLCTFLISRACKNSTLANYLYWYVIVECEDQDTQQRDPKTHEMY
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LGDNEKMNL-SDVELIPLPLEPQVKIRGIIPETATLFKSALMPAQLFFKTEDGGKYPVIF
KHGDDLRQDQLILQIISLMDKLLRKENLDLKLTPYKVLATSTKHGFMQFIQSVPVAEVL
DTEGSIQNFFRKYAPSENGPNGISAEVMDTYVKSCAGYCVITYILGVGDRHLDNLLLTK
TGKLFHIDFGYILGRDPKPLPPPMKLNKEMVEGMGGTQSEQYQEFRKQCYTAFLHLRRY
SNLILNLFSLMVDANIPDIALEPDKTVKKVQDKFRLDL-SDEEAVHYMQSLIDESVHALF
AAVVEQIHKFAQYWRK"
polyA_signal 3586..3720
/label=SV40 poly(A) signal
/note="SV40 polyadenylation signal"
rep_origin complement(4233..4821)
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replication"
CDS complement(4992..5852)
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/label=AmpR
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
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ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
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LIKHW"
promoter complement(5853..5957)
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/label=AmpR promoter
ORIGIN
1 gagttcgagc ttgcatgcct gcaggtcgtt acataactta cggtaaatgg cccgcctggc
61 tgaccgccca acgacccccg cccattgacg tcaataatga cgtatgttcc catagtaacg
121 ccaataggga ctttccattg acgtcaatgg gtggagtatt tacggtaaac tgcccacttg
181 gcagtacatc aagtgtatca tatgccaagt acgcccccta ttgacgtcaa tgacggtaaa
241 tggcccgcct ggcattatgc ccagtacatg accttatggg actttcctac ttggcagtac
301 atctacgtat tagtcatcgc tattaccatg gtgatgcggt tttggcagta catcaatggg
361 cgtggatagc ggtttgactc acggggattt ccaagtctcc accccattga cgtcaatggg
421 agtttgtttt ggcaccaaaa tcaacgggac tttccaaaat gtcgtaacaa ctccgcccca
481 ttgacgcaaa tgggcggtag gcgtgtacgg tgggaggtct atataagcag agctcgttta
541 gtgaaccgtc agatcgcctg gagacgccat ccacgctgtt ttgacctcca tagaagacac
601 cgggaccgat ccagcctccg gactctagag gatccggtac tagaggaact gaaaaaccag
661 aaagttaact ggtaagttta gtctttttgt cttttatttc aggtcccgga tccggtggtg
721 gtgcaaatca aagaactgct cctcagtgga tgttgccttt acttctaggc ctgtacggaa
781 gtgttacttc tgctctaaaa gctgcggaat tgtacccgcg ggcccaccat ggcatcaatg
841 gagcagaagc tgatctcaga ggaggacctg cttatggcca tggaggcccg aattcgcatg
901 ggggaagcag agaagtttca ctacatctat agttgtgacc tggatatcaa cgtccagctt
961 aagataggaa gcttggaagg gaagagagaa caaaagagtt ataaagctgt cctggaagac
1021 ccaatgttga agttctcagg actatatcaa gagacatgct ctgatcttta tgttacttgt
1081 caagtttttg cagaagggaa gcctttggcc ttgccagtga gaacatccta caaagcattt
1141 agtacaagat ggaactggaa tgaatggctg aaactaccag taaaataccc tgacctgccc
1201 aggaatgccc aagtggccct caccatatgg gatgtgtatg gtcccggaaa agcagtgcct
1261 gtaggaggaa caacggtttc gctctttgga aaatacggca tgtttcgcca agggatgcat
1321 gacttgaaag tctggcctaa tgtagaagca gatggatcag aacccacaaa aactcctggc
1381 agaacaagta gcactctctc agaagatcag atgagccgtc ttgccaagct caccaaagct
1441 catcgacaag gacacatggt gaaagtagat tggctggata gattgacatt tagagaaata
1501 gaaatgataa atgagagtga aaaacgaagt tctaatttca tgtacctgat ggttgaattt
1561 cgatgtgtca agtgtgatga taaggaatat ggtattgttt attatgaaaa ggacggtgat
1621 gaatcatctc caattttaac aagttttgaa ttagtgaaag ttcctgaccc ccagatgtct
1681 atggagaatt tagttgagag caaacaccac aagcttgccc ggagtttaag aagtggacct
1741 tctgaccacg atctgaaacc caatgctgcc acgagagatc agttaaatat tattgtgagt
1801 tatccaccaa ccaagcaact tacatatgaa gaacaagatc ttgtttggaa gtttagatat
1861 tatcttacga atcaagaaaa agccttgaca aaattcttga aatgtgttaa ttgggatcta
1921 cctcaagagg ccaaacaggc cttggaactt ctgggaaaat ggaagccgat ggatgtagag
1981 gactccttgg agctgttatc ctctcattac accaacccaa ctgtgaggcg ttatgctgtt
2041 gcccggttgc gacaggccga tgatgaggat ttgttgatgt acctattaca attggtccag
2101 gctctcaaat atgaaaattt tgatgatata aagaatggat tggaacctac caagaaggat
2161 agtcagagtt cagtgtcaga aaatgtgtca aattctggaa taaattctgc agaaatagat
2221 agctcccaaa ttataaccag cccccttcct tcagtctctt cacctcctcc tgcatcaaaa
2281 acaaaagaag ttccagatgg cgaaaatctg gaacaagatc tctgtacctt cttgatatcg
2341 agagcctgca aaaactcaac actggctaat tatttatact ggtatgtgat agtggaatgt
2401 gaagatcaag atactcagca gagagatcca aagacccatg agatgtactt gaacgtaatg
2461 agaagattca gccaagcatt gttgaagggt gataagtctg tcagagttat gcgttctttg
2521 ctggctgcac aacagacatt tgtagatcgg ttggtgcatc taatgaaggc agtacaacgc
2581 gaaagtggaa atcgtaagaa aaagaatgag agactacagg cattgcttgg agataatgaa
2641 aagatgaatt tgtcagatgt ggaacttatc ccgttgcctt tagaacccca agtgaaaatt
2701 agaggaataa ttccggaaac agctacactg tttaaaagtg cccttatgcc tgcacagttg
2761 ttttttaaga cggaagatgg aggcaaatat ccagttatat ttaagcatgg agatgattta
2821 cgtcaagatc aacttattct tcaaatcatt tcactcatgg acaagctgtt acggaaagaa
2881 aatctggact tgaaattgac accttataag gtgttagcca ccagtacaaa acatggcttc
2941 atgcagttta tccagtcagt tcctgtggct gaagttcttg atacagaggg aagcattcag
3001 aactttttta gaaaatatgc accaagtgag aatgggccaa atgggattag tgctgaggtc
3061 atggacactt acgttaaaag ctgtgctgga tattgcgtga tcacctatat acttggagtt
3121 ggagacaggc acctggataa ccttttgcta acaaaaacag gcaaactctt ccacatagac
3181 tttggatata ttttgggtcg ggatccaaag cctcttcctc caccaatgaa gctgaataaa
3241 gaaatggtag aaggaatggg gggcacacag agtgagcagt accaagagtt ccgtaaacag
3301 tgttacacgg ctttcctcca cctgcgaagg tattctaatc tgattttgaa cttgttttcc
3361 ttgatggttg atgcaaacat tccagatatt gcacttgaac cagataaaac tgtgaaaaag
3421 gttcaggata aattccgctt agacctgtcg gatgaagagg ctgtgcatta catgcagagt
3481 ctgattgatg agagtgtcca tgctcttttt gctgcagtgg tggaacagat tcacaagttt
3541 gcccagtact ggagaaaatg acgctcgagg taccgcggcc gcggggatcc agacatgata
3601 agatacattg atgagtttgg acaaaccaca actagaatgc agtgaaaaaa atgctttatt
3661 tgtgaaattt gtgatgctat tgctttattt gtaaccatta taagctgcaa taaacaagtt
3721 aacaacaaca attgcattca ttttatgttt caggttcagg gggaggtgtg ggaggttttt
3781 tcggatcctc tagagtcgat ctgcaggcat gctagcttgg cgtaatcatg gtcatagctg
3841 tttcctgtgt gaaattgtta tccgctcaca attccacaca acatacgagc cggaagcata
3901 aagtgtaaag cctggggtgc ctaatgagtg agctaactca cattaattgc gttgcgctca
3961 ctgcccgctt tccagtcggg aaacctgtcg tgccagctgc attaatgaat cggccaacgc
4021 gcggggagag gcggtttgcg tattgggcgc tcttccgctt cctcgctcac tgactcgctg
4081 cgctcggtcg ttcggctgcg gcgagcggta tcagctcact caaaggcggt aatacggtta
4141 tccacagaat caggggataa cgcaggaaag aacatgtgag caaaaggcca gcaaaaggcc
4201 aggaaccgta aaaaggccgc gttgctggcg tttttccata ggctccgccc ccctgacgag
4261 catcacaaaa atcgacgctc aagtcagagg tggcgaaacc cgacaggact ataaagatac
4321 caggcgtttc cccctggaag ctccctcgtg cgctctcctg ttccgaccct gccgcttacc
4381 ggatacctgt ccgcctttct cccttcggga agcgtggcgc tttctcatag ctcacgctgt
4441 aggtatctca gttcggtgta ggtcgttcgc tccaagctgg gctgtgtgca cgaacccccc
4501 gttcagcccg accgctgcgc cttatccggt aactatcgtc ttgagtccaa cccggtaaga
4561 cacgacttat cgccactggc agcagccact ggtaacagga ttagcagagc gaggtatgta
4621 ggcggtgcta cagagttctt gaagtggtgg cctaactacg gctacactag aagaacagta
4681 tttggtatct gcgctctgct gaagccagtt accttcggaa aaagagttgg tagctcttga
4741 tccggcaaac aaaccaccgc tggtagcggt ggtttttttg tttgcaagca gcagattacg
4801 cgcagaaaaa aaggatctca agaagatcct ttgatctttt ctacggggtc tgacgctcag
4861 tggaacgaaa actcacgtta agggattttg gtcatgagat tatcaaaaag gatcttcacc
4921 tagatccttt taaattaaaa atgaagtttt aaatcaatct aaagtatata tgagtaaact
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5041 cgttcatcca tagttgcctg actccccgtc gtgtagataa ctacgatacg ggagggctta
5101 ccatctggcc ccagtgctgc aatgataccg cgagacccac gctcaccggc tccagattta
5161 tcagcaataa accagccagc cggaagggcc gagcgcagaa gtggtcctgc aactttatcc
5221 gcctccatcc agtctattaa ttgttgccgg gaagctagag taagtagttc gccagttaat
5281 agtttgcgca acgttgttgc cattgctaca ggcatcgtgg tgtcacgctc gtcgtttggt
5341 atggcttcat tcagctccgg ttcccaacga tcaaggcgag ttacatgatc ccccatgttg
5401 tgcaaaaaag cggttagctc cttcggtcct ccgatcgttg tcagaagtaa gttggccgca
5461 gtgttatcac tcatggttat ggcagcactg cataattctc ttactgtcat gccatccgta
5521 agatgctttt ctgtgactgg tgagtactca accaagtcat tctgagaata gtgtatgcgg
5581 cgaccgagtt gctcttgccc ggcgtcaata cgggataata ccgcgccaca tagcagaact
5641 ttaaaagtgc tcatcattgg aaaacgttct tcggggcgaa aactctcaag gatcttaccg
5701 ctgttgagat ccagttcgat gtaacccact cgtgcaccca actgatcttc agcatctttt
5761 actttcacca gcgtttctgg gtgagcaaaa acaggaaggc aaaatgccgc aaaaaaggga
5821 ataagggcga cacggaaatg ttgaatactc atactcttcc tttttcaata ttattgaagc
5881 atttatcagg gttattgtct catgagcgga tacatatttg aatgtattta gaaaaataaa
5941 caaatagggg ttccgcgcac atttccccga aaagtgccac ctgacgtcta agaaaccatt
6001 attatcatga cattaaccta taaaaatagg cgtatcacga ggccctttcg tctcgcgcgt
6061 ttcggtgatg acggtgaaaa cctctgacac atgcagctcc cggagacggt cacagcttgt
6121 ctgtaagcgg atgccgggag cagacaagcc cgtcagggcg cgtcagcggg tgttggcggg
6181 tgtcggggct ggcttaacta tgcggcatca gagcagattg tactgagagt gcaccatatg
6241 cggtgtgaaa taccgcacag atgcgtaagg agaaaatacc gcatcaggcg ccattcgcca
6301 ttcaggctgc gcaactgttg ggaagggcga tcggtgcggg cctcttcgct attacgccag
6361 ctggcgaaag ggggatgtgc tgcaaggcga ttaagttggg taacgccagg gttttcccag
6421 tcacgacgtt gtaaaacgac ggccagt
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P3625/pCMV-SPORT6-CRYZL1人源基因质粒 |
| P2803/pCMV-SPORT6-CHI3L1人源基因质粒 |
| P2090/pCMV-SPORT6-RWDD1人源基因质粒 |
| P3838/pCMV-SPORT6-ACTR3B人源基因质粒 |
| P3839/pCMV-SPORT6-MAP3K7CL人源基因质粒 |
| P3840/pCMV-SPORT6-DYM人源基因质粒 |
| P3841/pCMV-SPORT6-SLC41A3（1同义突变）人源基因质粒 |
| P3842/pCMV-SPORT6-NEUROD1人源基因质粒 |
| P3843/pCMV-SPORT6-PTPN11人源基因质粒 |
| P3844/pCMV-SPORT6-RBCK1人源基因质粒 |
| P3845/pCMV-SPORT6-MARC1（2点突变）人源基因质粒 |
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文献和实验相关实验
蛋白激酶，能接受多种上游信号，如 Class I PI3K、IGF-1/2、MAPK，能感受营养和能量的变化。mTOR 存在两种不同形式：对雷帕霉素敏感的 mTOR 复合物1（mTOR1）和对雷帕霉素不敏感的 mTOR 复合物2（mTOR2）。 2）Beclin-1 信号通路：Beclin-1 是酵母自噬基因 Atg6/Vps30 的同源基因，能与多种蛋白结合，如 Vps34（Class III PI3K 的催化亚单位），mTOR，BCL-2 和 BCLXL 蛋白等，beclin-1 是一个
的浓度影响给定大小的线状DNA的迁移率，因此采用不同浓度的凝胶可以分离不同大小范围的DNA片段。EB：即3,8-二氨基-5-乙基-6-苯基菲锭溴盐,(Ethidium Bromide)。它能够插入DNA分子中的碱基对之间而与DNA结合。由于EB分子的插入，在紫外光的照射下，凝胶电泳中的DNA条带呈现出红色荧光，易于检测。可以检测10ng 的DNA。质粒pCMV-Myc-T10 NEB 标准分子量片段(1kb DNA Ladder)EcoR1 和Xho1 核酸内切酶（Takara）EcoR 1和Xho
的缓冲条件下带负电的核酸分子就可以向阳极迁移。琼脂糖凝的浓度影响给定大小的线状DNA的迁移率，因此采用不同浓度的凝胶可以分离不同大小范围的DNA片段。 EB： 即3,8-二氨基-5-乙基-6-苯基菲锭溴盐, (Ethidium Bromide)。它能够插入DNA分子中的碱基对之间而与DNA结合。由于EB分子的插入，在紫外光的照射下，凝胶电泳中的DNA条带呈现出红色荧光，易于检测。可以检测10ng 的DNA。 质粒 pCMV-Myc-T10 NEB 标准分子量片段(1kb DNA
pCMV-Myc-VPS34人源基因质粒
￥100 - 1000
