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- 2025年07月08日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
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-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
NM_003900.4;p60;p62;A170;OSIL;PDB3;Z
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pCMV-Myc-SQSTM1人源基因质粒
别称: NM_003900.4;p60;p62;A170;OSIL;PDB3;Z
启动子：CMV
复制子: pUC
原核抗性: Amp
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Amp
真核抗性：
荧光蛋白：
质粒简介
pCMV-Myc-SQSTM1(p60; p62; A170)是一个人源基因哺乳细胞表达质粒。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 5099 bp ds-DNA circular SYN 07-JAN-2018
DEFINITION synthetic circular DNA
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..5099
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
enhancer 27..330
/label=CMV enhancer
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 331..534
/label=CMV promoter
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
intron 672..768
/label=SV40 intron
/note="modified SV40 intron with splice donor and acceptor
sites"
CDS 841..870
/codon_start=1
/product="Myc (human c-Myc proto-oncogene) epitope tag"
/label=Myc
/translation="EQKLISEEDL"
CDS 898..2220
/codon_start=1
/label=SQSTM1
/translation="MASLTVKAYLLGKEDAAREIRRFSFCCSPEPEAEAEAAAGPGPCE
RLLSRVAALFPALRPGGFQAHYRDEDGDLVAFSSDEELTMAMSYVKDDIFRIYIKEKKE
CRRDHRPPCAQEAPRNMVHPNVICDGCNGPVVGTRYKCSVCPDYDLCSVCEGKGLHRGH
TKLAFPSPFGHLSEGFSHSRWLRKVKHGHFGWPGWEMGPPGNWSPRPPRAGEARPGPTA
ESASGPSEDPSVNFLKNVGESVAAALSPLGIEVDIDVEHGGKRSRLTPVSPESSSTEEK
SSSQPSSCCSDPSKPGGNVEGATQSLAEQMRKIALESEGRPEEQMESDNCSGGDDDWTH
LSSKEVDPSTGELQSLQMPESEGPSSLDPSQEGPTGLKEAALYPHLPPEADPRLIESLS
QMLSMGFSDEGGWLTRLLQTKNYDIGAALDTIQYSKHPPPL"
polyA_signal 2238..2372
/label=SV40 poly(A) signal
/note="SV40 polyadenylation signal"
rep_origin complement(2885..3473)
/direction=LEFT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(3644..4504)
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/label=AmpR
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
promoter complement(4505..4609)
/gene="bla"
/label=AmpR promoter
ORIGIN
1 gagttcgagc ttgcatgcct gcaggtcgtt acataactta cggtaaatgg cccgcctggc
61 tgaccgccca acgacccccg cccattgacg tcaataatga cgtatgttcc catagtaacg
121 ccaataggga ctttccattg acgtcaatgg gtggagtatt tacggtaaac tgcccacttg
181 gcagtacatc aagtgtatca tatgccaagt acgcccccta ttgacgtcaa tgacggtaaa
241 tggcccgcct ggcattatgc ccagtacatg accttatggg actttcctac ttggcagtac
301 atctacgtat tagtcatcgc tattaccatg gtgatgcggt tttggcagta catcaatggg
361 cgtggatagc ggtttgactc acggggattt ccaagtctcc accccattga cgtcaatggg
421 agtttgtttt ggcaccaaaa tcaacgggac tttccaaaat gtcgtaacaa ctccgcccca
481 ttgacgcaaa tgggcggtag gcgtgtacgg tgggaggtct atataagcag agctcgttta
541 gtgaaccgtc agatcgcctg gagacgccat ccacgctgtt ttgacctcca tagaagacac
601 cgggaccgat ccagcctccg gactctagag gatccggtac tagaggaact gaaaaaccag
661 aaagttaact ggtaagttta gtctttttgt cttttatttc aggtcccgga tccggtggtg
721 gtgcaaatca aagaactgct cctcagtgga tgttgccttt acttctaggc ctgtacggaa
781 gtgttacttc tgctctaaaa gctgcggaat tgtacccgcg ggcccaccat ggcatcaatg
841 gagcagaagc tgatctcaga ggaggacctg cttatggcca tggaggcccg aattcgcatg
901 gcgtcgctca ccgtgaaggc ctaccttctg ggcaaggagg acgcggcgcg cgagattcgc
961 cgcttcagct tctgctgcag ccccgagcct gaggcggaag ccgaggctgc ggcgggtccg
1021 ggaccatgcg agcggctgct gagccgggtg gccgccctgt tccccgcgct gcggcctggc
1081 ggcttccagg cgcactaccg cgatgaggac ggggacttgg ttgccttttc cagtgacgag
1141 gaattgacaa tggccatgtc ctacgtgaag gatgacatct tccgaatcta cattaaagag
1201 aaaaaagagt gccggcggga ccaccgccca ccgtgtgctc aggaggcgcc ccgcaacatg
1261 gtgcacccca atgtgatctg cgatggctgc aatgggcctg tggtaggaac ccgctacaag
1321 tgcagcgtct gcccagacta cgacttgtgt agcgtctgcg agggaaaggg cttgcaccgg
1381 gggcacacca agctcgcatt ccccagcccc ttcgggcacc tgtctgaggg cttctcgcac
1441 agccgctggc tccggaaggt gaaacacgga cacttcgggt ggccaggatg ggaaatgggt
1501 ccaccaggaa actggagccc acgtcctcct cgtgcagggg aggcccgccc tggccccacg
1561 gcagaatcag cttctggtcc atcggaggat ccgagtgtga atttcctgaa gaacgttggg
1621 gagagtgtgg cagctgccct tagccctctg ggcattgaag ttgatatcga tgtggagcac
1681 ggagggaaaa gaagccgcct gacccccgtc tctccagaga gttccagcac agaggagaag
1741 agcagctcac agccaagcag ctgctgctct gatcccagca agccgggtgg gaatgttgag
1801 ggcgccacgc agtctctggc ggagcagatg agaaagatcg ccttggagtc cgaggggcgc
1861 cctgaggaac agatggagtc ggataactgt tcaggaggag atgatgactg gacccatctg
1921 tcttcaaaag aagtggaccc gtctacaggt gaactccagt ccctacagat gccagaatcc
1981 gaagggccaa gctctctgga cccctcccag gagggaccca cagggctgaa ggaagctgcc
2041 ttgtacccac atctcccgcc agaggctgac ccgcggctga ttgagtccct ctcccagatg
2101 ctgtccatgg gcttctctga tgaaggcggc tggctcacca ggctcctgca gaccaagaac
2161 tatgacatcg gagcggctct ggacaccatc cagtattcaa agcatccccc gccgttgtga
2221 ggtaccgcgg ccgcggggat ccagacatga taagatacat tgatgagttt ggacaaacca
2281 caactagaat gcagtgaaaa aaatgcttta tttgtgaaat ttgtgatgct attgctttat
2341 ttgtaaccat tataagctgc aataaacaag ttaacaacaa caattgcatt cattttatgt
2401 ttcaggttca gggggaggtg tgggaggttt tttcggatcc tctagagtcg atctgcaggc
2461 atgctagctt ggcgtaatca tggtcatagc tgtttcctgt gtgaaattgt tatccgctca
2521 caattccaca caacatacga gccggaagca taaagtgtaa agcctggggt gcctaatgag
2581 tgagctaact cacattaatt gcgttgcgct cactgcccgc tttccagtcg ggaaacctgt
2641 cgtgccagct gcattaatga atcggccaac gcgcggggag aggcggtttg cgtattgggc
2701 gctcttccgc ttcctcgctc actgactcgc tgcgctcggt cgttcggctg cggcgagcgg
2761 tatcagctca ctcaaaggcg gtaatacggt tatccacaga atcaggggat aacgcaggaa
2821 agaacatgtg agcaaaaggc cagcaaaagg ccaggaaccg taaaaaggcc gcgttgctgg
2881 cgtttttcca taggctccgc ccccctgacg agcatcacaa aaatcgacgc tcaagtcaga
2941 ggtggcgaaa cccgacagga ctataaagat accaggcgtt tccccctgga agctccctcg
3001 tgcgctctcc tgttccgacc ctgccgctta ccggatacct gtccgccttt ctcccttcgg
3061 gaagcgtggc gctttctcat agctcacgct gtaggtatct cagttcggtg taggtcgttc
3121 gctccaagct gggctgtgtg cacgaacccc ccgttcagcc cgaccgctgc gccttatccg
3181 gtaactatcg tcttgagtcc aacccggtaa gacacgactt atcgccactg gcagcagcca
3241 ctggtaacag gattagcaga gcgaggtatg taggcggtgc tacagagttc ttgaagtggt
3301 ggcctaacta cggctacact agaagaacag tatttggtat ctgcgctctg ctgaagccag
3361 ttaccttcgg aaaaagagtt ggtagctctt gatccggcaa acaaaccacc gctggtagcg
3421 gtggtttttt tgtttgcaag cagcagatta cgcgcagaaa aaaaggatct caagaagatc
3481 ctttgatctt ttctacgggg tctgacgctc agtggaacga aaactcacgt taagggattt
3541 tggtcatgag attatcaaaa aggatcttca cctagatcct tttaaattaa aaatgaagtt
3601 ttaaatcaat ctaaagtata tatgagtaaa cttggtctga cagttaccaa tgcttaatca
3661 gtgaggcacc tatctcagcg atctgtctat ttcgttcatc catagttgcc tgactccccg
3721 tcgtgtagat aactacgata cgggagggct taccatctgg ccccagtgct gcaatgatac
3781 cgcgagaccc acgctcaccg gctccagatt tatcagcaat aaaccagcca gccggaaggg
3841 ccgagcgcag aagtggtcct gcaactttat ccgcctccat ccagtctatt aattgttgcc
3901 gggaagctag agtaagtagt tcgccagtta atagtttgcg caacgttgtt gccattgcta
3961 caggcatcgt ggtgtcacgc tcgtcgtttg gtatggcttc attcagctcc ggttcccaac
4021 gatcaaggcg agttacatga tcccccatgt tgtgcaaaaa agcggttagc tccttcggtc
4081 ctccgatcgt tgtcagaagt aagttggccg cagtgttatc actcatggtt atggcagcac
4141 tgcataattc tcttactgtc atgccatccg taagatgctt ttctgtgact ggtgagtact
4201 caaccaagtc attctgagaa tagtgtatgc ggcgaccgag ttgctcttgc ccggcgtcaa
4261 tacgggataa taccgcgcca catagcagaa ctttaaaagt gctcatcatt ggaaaacgtt
4321 cttcggggcg aaaactctca aggatcttac cgctgttgag atccagttcg atgtaaccca
4381 ctcgtgcacc caactgatct tcagcatctt ttactttcac cagcgtttct gggtgagcaa
4441 aaacaggaag gcaaaatgcc gcaaaaaagg gaataagggc gacacggaaa tgttgaatac
4501 tcatactctt cctttttcaa tattattgaa gcatttatca gggttattgt ctcatgagcg
4561 gatacatatt tgaatgtatt tagaaaaata aacaaatagg ggttccgcgc acatttcccc
4621 gaaaagtgcc acctgacgtc taagaaacca ttattatcat gacattaacc tataaaaata
4681 ggcgtatcac gaggcccttt cgtctcgcgc gtttcggtga tgacggtgaa aacctctgac
4741 acatgcagct cccggagacg gtcacagctt gtctgtaagc ggatgccggg agcagacaag
4801 cccgtcaggg cgcgtcagcg ggtgttggcg ggtgtcgggg ctggcttaac tatgcggcat
4861 cagagcagat tgtactgaga gtgcaccata tgcggtgtga aataccgcac agatgcgtaa
4921 ggagaaaata ccgcatcagg cgccattcgc cattcaggct gcgcaactgt tgggaagggc
4981 gatcggtgcg ggcctcttcg ctattacgcc agctggcgaa agggggatgt gctgcaaggc
5041 gattaagttg ggtaacgcca gggttttccc agtcacgacg ttgtaaaacg acggccagt
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pCMV-Myc-SQSTM1人源基因质粒
别称: NM_003900.4;p60;p62;A170;OSIL;PDB3;Z
启动子：CMV
复制子: pUC
原核抗性: Amp
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Amp
真核抗性：
荧光蛋白：
质粒简介
pCMV-Myc-SQSTM1(p60; p62; A170)是一个人源基因哺乳细胞表达质粒。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 5099 bp ds-DNA circular SYN 07-JAN-2018
DEFINITION synthetic circular DNA
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..5099
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
enhancer 27..330
/label=CMV enhancer
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 331..534
/label=CMV promoter
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
intron 672..768
/label=SV40 intron
/note="modified SV40 intron with splice donor and acceptor
sites"
CDS 841..870
/codon_start=1
/product="Myc (human c-Myc proto-oncogene) epitope tag"
/label=Myc
/translation="EQKLISEEDL"
CDS 898..2220
/codon_start=1
/label=SQSTM1
/translation="MASLTVKAYLLGKEDAAREIRRFSFCCSPEPEAEAEAAAGPGPCE
RLLSRVAALFPALRPGGFQAHYRDEDGDLVAFSSDEELTMAMSYVKDDIFRIYIKEKKE
CRRDHRPPCAQEAPRNMVHPNVICDGCNGPVVGTRYKCSVCPDYDLCSVCEGKGLHRGH
TKLAFPSPFGHLSEGFSHSRWLRKVKHGHFGWPGWEMGPPGNWSPRPPRAGEARPGPTA
ESASGPSEDPSVNFLKNVGESVAAALSPLGIEVDIDVEHGGKRSRLTPVSPESSSTEEK
SSSQPSSCCSDPSKPGGNVEGATQSLAEQMRKIALESEGRPEEQMESDNCSGGDDDWTH
LSSKEVDPSTGELQSLQMPESEGPSSLDPSQEGPTGLKEAALYPHLPPEADPRLIESLS
QMLSMGFSDEGGWLTRLLQTKNYDIGAALDTIQYSKHPPPL"
polyA_signal 2238..2372
/label=SV40 poly(A) signal
/note="SV40 polyadenylation signal"
rep_origin complement(2885..3473)
/direction=LEFT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(3644..4504)
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/label=AmpR
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
promoter complement(4505..4609)
/gene="bla"
/label=AmpR promoter
ORIGIN
1 gagttcgagc ttgcatgcct gcaggtcgtt acataactta cggtaaatgg cccgcctggc
61 tgaccgccca acgacccccg cccattgacg tcaataatga cgtatgttcc catagtaacg
121 ccaataggga ctttccattg acgtcaatgg gtggagtatt tacggtaaac tgcccacttg
181 gcagtacatc aagtgtatca tatgccaagt acgcccccta ttgacgtcaa tgacggtaaa
241 tggcccgcct ggcattatgc ccagtacatg accttatggg actttcctac ttggcagtac
301 atctacgtat tagtcatcgc tattaccatg gtgatgcggt tttggcagta catcaatggg
361 cgtggatagc ggtttgactc acggggattt ccaagtctcc accccattga cgtcaatggg
421 agtttgtttt ggcaccaaaa tcaacgggac tttccaaaat gtcgtaacaa ctccgcccca
481 ttgacgcaaa tgggcggtag gcgtgtacgg tgggaggtct atataagcag agctcgttta
541 gtgaaccgtc agatcgcctg gagacgccat ccacgctgtt ttgacctcca tagaagacac
601 cgggaccgat ccagcctccg gactctagag gatccggtac tagaggaact gaaaaaccag
661 aaagttaact ggtaagttta gtctttttgt cttttatttc aggtcccgga tccggtggtg
721 gtgcaaatca aagaactgct cctcagtgga tgttgccttt acttctaggc ctgtacggaa
781 gtgttacttc tgctctaaaa gctgcggaat tgtacccgcg ggcccaccat ggcatcaatg
841 gagcagaagc tgatctcaga ggaggacctg cttatggcca tggaggcccg aattcgcatg
901 gcgtcgctca ccgtgaaggc ctaccttctg ggcaaggagg acgcggcgcg cgagattcgc
961 cgcttcagct tctgctgcag ccccgagcct gaggcggaag ccgaggctgc ggcgggtccg
1021 ggaccatgcg agcggctgct gagccgggtg gccgccctgt tccccgcgct gcggcctggc
1081 ggcttccagg cgcactaccg cgatgaggac ggggacttgg ttgccttttc cagtgacgag
1141 gaattgacaa tggccatgtc ctacgtgaag gatgacatct tccgaatcta cattaaagag
1201 aaaaaagagt gccggcggga ccaccgccca ccgtgtgctc aggaggcgcc ccgcaacatg
1261 gtgcacccca atgtgatctg cgatggctgc aatgggcctg tggtaggaac ccgctacaag
1321 tgcagcgtct gcccagacta cgacttgtgt agcgtctgcg agggaaaggg cttgcaccgg
1381 gggcacacca agctcgcatt ccccagcccc ttcgggcacc tgtctgaggg cttctcgcac
1441 agccgctggc tccggaaggt gaaacacgga cacttcgggt ggccaggatg ggaaatgggt
1501 ccaccaggaa actggagccc acgtcctcct cgtgcagggg aggcccgccc tggccccacg
1561 gcagaatcag cttctggtcc atcggaggat ccgagtgtga atttcctgaa gaacgttggg
1621 gagagtgtgg cagctgccct tagccctctg ggcattgaag ttgatatcga tgtggagcac
1681 ggagggaaaa gaagccgcct gacccccgtc tctccagaga gttccagcac agaggagaag
1741 agcagctcac agccaagcag ctgctgctct gatcccagca agccgggtgg gaatgttgag
1801 ggcgccacgc agtctctggc ggagcagatg agaaagatcg ccttggagtc cgaggggcgc
1861 cctgaggaac agatggagtc ggataactgt tcaggaggag atgatgactg gacccatctg
1921 tcttcaaaag aagtggaccc gtctacaggt gaactccagt ccctacagat gccagaatcc
1981 gaagggccaa gctctctgga cccctcccag gagggaccca cagggctgaa ggaagctgcc
2041 ttgtacccac atctcccgcc agaggctgac ccgcggctga ttgagtccct ctcccagatg
2101 ctgtccatgg gcttctctga tgaaggcggc tggctcacca ggctcctgca gaccaagaac
2161 tatgacatcg gagcggctct ggacaccatc cagtattcaa agcatccccc gccgttgtga
2221 ggtaccgcgg ccgcggggat ccagacatga taagatacat tgatgagttt ggacaaacca
2281 caactagaat gcagtgaaaa aaatgcttta tttgtgaaat ttgtgatgct attgctttat
2341 ttgtaaccat tataagctgc aataaacaag ttaacaacaa caattgcatt cattttatgt
2401 ttcaggttca gggggaggtg tgggaggttt tttcggatcc tctagagtcg atctgcaggc
2461 atgctagctt ggcgtaatca tggtcatagc tgtttcctgt gtgaaattgt tatccgctca
2521 caattccaca caacatacga gccggaagca taaagtgtaa agcctggggt gcctaatgag
2581 tgagctaact cacattaatt gcgttgcgct cactgcccgc tttccagtcg ggaaacctgt
2641 cgtgccagct gcattaatga atcggccaac gcgcggggag aggcggtttg cgtattgggc
2701 gctcttccgc ttcctcgctc actgactcgc tgcgctcggt cgttcggctg cggcgagcgg
2761 tatcagctca ctcaaaggcg gtaatacggt tatccacaga atcaggggat aacgcaggaa
2821 agaacatgtg agcaaaaggc cagcaaaagg ccaggaaccg taaaaaggcc gcgttgctgg
2881 cgtttttcca taggctccgc ccccctgacg agcatcacaa aaatcgacgc tcaagtcaga
2941 ggtggcgaaa cccgacagga ctataaagat accaggcgtt tccccctgga agctccctcg
3001 tgcgctctcc tgttccgacc ctgccgctta ccggatacct gtccgccttt ctcccttcgg
3061 gaagcgtggc gctttctcat agctcacgct gtaggtatct cagttcggtg taggtcgttc
3121 gctccaagct gggctgtgtg cacgaacccc ccgttcagcc cgaccgctgc gccttatccg
3181 gtaactatcg tcttgagtcc aacccggtaa gacacgactt atcgccactg gcagcagcca
3241 ctggtaacag gattagcaga gcgaggtatg taggcggtgc tacagagttc ttgaagtggt
3301 ggcctaacta cggctacact agaagaacag tatttggtat ctgcgctctg ctgaagccag
3361 ttaccttcgg aaaaagagtt ggtagctctt gatccggcaa acaaaccacc gctggtagcg
3421 gtggtttttt tgtttgcaag cagcagatta cgcgcagaaa aaaaggatct caagaagatc
3481 ctttgatctt ttctacgggg tctgacgctc agtggaacga aaactcacgt taagggattt
3541 tggtcatgag attatcaaaa aggatcttca cctagatcct tttaaattaa aaatgaagtt
3601 ttaaatcaat ctaaagtata tatgagtaaa cttggtctga cagttaccaa tgcttaatca
3661 gtgaggcacc tatctcagcg atctgtctat ttcgttcatc catagttgcc tgactccccg
3721 tcgtgtagat aactacgata cgggagggct taccatctgg ccccagtgct gcaatgatac
3781 cgcgagaccc acgctcaccg gctccagatt tatcagcaat aaaccagcca gccggaaggg
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5041 gattaagttg ggtaacgcca gggttttccc agtcacgacg ttgtaaaacg acggccagt
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P3848/pCMV-SPORT6-SEMA4B人源基因质粒 |
| P3849/pCMV-SPORT6-IP6K1人源基因质粒 |
| P3850/pCMV-SPORT6-ERO1A人源基因质粒 |
| P3851/pCMV-SPORT6-GABRA5（1同义突变）人源基因质粒 |
| P3852/pCMV-SPORT6-PRRT2人源基因质粒 |
| P3853/pCMV-SPORT6-NPM1人源基因质粒 |
| P3854/pCMV-SPORT6-PAPSS1人源基因质粒 |
| P3855/pCMV-SPORT6-SCARB2人源基因质粒 |
| P3856/pCMV-SPORT6-C8orf79人源基因质粒 |
| P3857/pCMV-SPORT6-TUBGCP3人源基因质粒 |
| P3858/pCMV-SPORT6-IL24人源基因质粒 |
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文献和实验相关实验
的浓度影响给定大小的线状DNA的迁移率，因此采用不同浓度的凝胶可以分离不同大小范围的DNA片段。EB：即3,8-二氨基-5-乙基-6-苯基菲锭溴盐,(Ethidium Bromide)。它能够插入DNA分子中的碱基对之间而与DNA结合。由于EB分子的插入，在紫外光的照射下，凝胶电泳中的DNA条带呈现出红色荧光，易于检测。可以检测10ng 的DNA。质粒pCMV-Myc-T10 NEB 标准分子量片段(1kb DNA Ladder)EcoR1 和Xho1 核酸内切酶（Takara）EcoR 1和Xho
的缓冲条件下带负电的核酸分子就可以向阳极迁移。琼脂糖凝的浓度影响给定大小的线状DNA的迁移率，因此采用不同浓度的凝胶可以分离不同大小范围的DNA片段。 EB： 即3,8-二氨基-5-乙基-6-苯基菲锭溴盐, (Ethidium Bromide)。它能够插入DNA分子中的碱基对之间而与DNA结合。由于EB分子的插入，在紫外光的照射下，凝胶电泳中的DNA条带呈现出红色荧光，易于检测。可以检测10ng 的DNA。 质粒 pCMV-Myc-T10 NEB 标准分子量片段(1kb DNA
，表达载体pCDNA3，pCDNA3.1(+),pCDNA3.1(-),表达载体pcmv-ha以及表达载体 pCMV-Myc的图谱 http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/2019694_0.html pMD18-载体图谱：http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/2993026_0.html pGEX-KG载体图谱序列：http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post
pCMV-Myc-SQSTM1人源基因质粒
￥100 - 1000
