pCDNA3.1-RHEB-Q64L-Myc 人源基因质粒

基本信息
名称：pCDNA3.1-RHEB-Q64L-Myc 人源基因质粒
别称: RHEB2
启动子：CMV
复制子: pUC
原核抗性: Amp
筛选标记：G418
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度

质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Amp
真核抗性：Neo/G418
荧光蛋白：

质粒简介
  pCDNA3.1-RHEB-Q64L-Myc是一个人源基因哺乳细胞表达质粒。

质粒图谱


质粒序列
LOCUS       Exported                5951 bp ds-DNA     circular SYN 13-DEC-2017
DEFINITION  synthetic circular DNA
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..5951
                     /organism="synthetic DNA construct"
                     /mol_type="other DNA"
     enhancer        235..614
                     /label=CMV enhancer
                     /note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
     promoter        615..818
                     /label=CMV promoter
                     /note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early 
                     promoter"
     promoter        863..881
                     /label=T7 promoter
                     /note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
     misc_feature    923..1474
                     /label=RHEB-Q64L
     CDS             1475..1504
                     /codon_start=1
                     /product="Myc (human c-Myc oncogene) epitope tag"
                     /label=Myc
                     /translation="EQKLISEEDL"
     polyA_signal    1551..1775
                     /label=bGH poly(A) signal
                     /note="bovine growth hormone polyadenylation signal"
     rep_origin      1821..2249
                     /direction=RIGHT
                     /label=f1 ori
                     /note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow 
                     indicates direction of (+) strand synthesis"
     promoter        2263..2592
                     /label=SV40 promoter
                     /note="SV40 enhancer and early promoter"
     rep_origin      2443..2578
                     /label=SV40 ori
                     /note="SV40 origin of replication"
     CDS             2659..3453
                     /codon_start=1
                     /gene="aph(3')-II (or nptII)"
                     /product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
                     /label=Neo
                     /note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418 
                     (Geneticin(R))"
                     /translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
                     VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
                     SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPAT-CPFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
                     GLAPAELFARLKARMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
                     LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
     polyA_signal    3627..3748
                     /label=SV40 poly(A) signal
                     /note="SV40 polyadenylation signal"
     rep_origin      complement(4199..4784)
                     /direction=LEFT
                     /label=ori
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                     replication"
     CDS             complement(4955..5815)
                     /codon_start=1
                     /gene="bla"
                     /product="beta-lactamase"
                     /label=AmpR
                     /note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
                     related antibiotics"
                     /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
                     ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
                     PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
                     EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
                     LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
                     LIKHW"
     promoter        complement(5816..5920)
                     /gene="bla"
                     /label=AmpR promoter
ORIGIN
        1 gacggatcgg gagatctccc gatcccctat ggtgcactct cagtacaatc tgctctgatg
       61 ccgcatagtt aagccagtat ctgctccctg cttgtgtgtt ggaggtcgct gagtagtgcg
      121 cgagcaaaat ttaagctaca acaaggcaag gcttgaccga caattgcatg aagaatctgc
      181 ttagggttag gcgttttgcg ctgcttcgcg atgtacgggc cagatatacg cgttgacatt
      241 gattattgac tagttattaa tagtaatcaa ttacggggtc attagttcat agcccatata
      301 tggagttccg cgttacataa cttacggtaa atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc
      361 cccgcccatt gacgtcaata atgacgtatg ttcccatagt aacgccaata gggactttcc
      421 attgacgtca atgggtggag tatttacggt aaactgccca cttggcagta catcaagtgt
      481 atcatatgcc aagtacgccc cctattgacg tcaatgacgg taaatggccc gcctggcatt
      541 atgcccagta catgacctta tgggactttc ctacttggca gtacatctac gtattagtca
      601 tcgctattac catggtgatg cggttttggc agtacatcaa tgggcgtgga tagcggtttg
      661 actcacgggg atttccaagt ctccacccca ttgacgtcaa tgggagtttg ttttggcacc
      721 aaaatcaacg ggactttcca aaatgtcgta acaactccgc cccattgacg caaatgggcg
      781 gtaggcgtgt acggtgggag gtctatataa gcagagctct ctggctaact agagaaccca
      841 ctgcttactg gcttatcgaa attaatacga ctcactatag ggagacccaa gctggctagc
      901 gtttaaactt aagcttggta ccatgccgca gtccaagtcc cggaagatcg cgatcctggg
      961 ctaccggtct gtggggaaat cctcattgac gattcaattt gttgaaggcc aatttgtgga
     1021 ctcctacgat ccaaccatag aaaacacttt tacaaagttg atcacagtaa atggacaaga
     1081 atatcatctt caacttgtag acacagccgg gctagatgaa tattctatct ttcctcagac
     1141 atactccata gatattaatg gctatattct tgtgtattct gttacatcaa tcaaaagttt
     1201 tgaagtgatt aaagttatcc atggcaaatt gttggatatg gtggggaaag tacaaatacc
     1261 tattatgttg gttgggaata agaaagacct gcatatggaa agggtgatca gttatgaaga
     1321 agggaaagct ttggcagaat cttggaatgc agcttttttg gaatcttctg ctaaagaaaa
     1381 tcagactgct gtggatgttt ttcgaaggat aattttggag gcagaaaaaa tggacggggc
     1441 agcttcacaa ggcaagtctt catgctcggt gatggaacaa aaactcatct cagaagagga
     1501 tctgtgactc gagtctagag ggcccgttta aacccgctga tcagcctcga ctgtgccttc
     1561 tagttgccag ccatctgttg tttgcccctc ccccgtgcct tccttgaccc tggaaggtgc
     1621 cactcccact gtcctttcct aataaaatga ggaaattgca tcgcattgtc tgagtaggtg
     1681 tcattctatt ctggggggtg gggtggggca ggacagcaag ggggaggatt gggaagacaa
     1741 tagcaggcat gctggggatg cggtgggctc tatggcttct gaggcggaaa gaaccagctg
     1801 gggctctagg gggtatcccc acgcgccctg tagcggcgca ttaagcgcgg cgggtgtggt
     1861 ggttacgcgc agcgtgaccg ctacacttgc cagcgcccta gcgcccgctc ctttcgcttt
     1921 cttcccttcc tttctcgcca cgttcgccgg ctttccccgt caagctctaa atcgggggct
     1981 ccctttaggg ttccgattta gtgctttacg gcacctcgac cccaaaaaac ttgattaggg
     2041 tgatggttca cgtagtgggc catcgccctg atagacggtt tttcgccctt tgacgttgga
     2101 gtccacgttc tttaatagtg gactcttgtt ccaaactgga acaacactca accctatctc
     2161 ggtctattct tttgatttat aagggatttt gccgatttcg gcctattggt taaaaaatga
     2221 gctgatttaa caaaaattta acgcgaatta attctgtgga atgtgtgtca gttagggtgt
     2281 ggaaagtccc caggctcccc agcaggcaga agtatgcaaa gcatgcatct caattagtca
     2341 gcaaccaggt gtggaaagtc cccaggctcc ccagcaggca gaagtatgca aagcatgcat
     2401 ctcaattagt cagcaaccat agtcccgccc ctaactccgc ccatcccgcc cctaactccg
     2461 cccagttccg cccattctcc gccccatggc tgactaattt tttttattta tgcagaggcc
     2521 gaggccgcct ctgcctctga gctattccag aagtagtgag gaggcttttt tggaggccta
     2581 ggcttttgca aaaagctccc gggagcttgt atatccattt tcggatctga tcaagagaca
     2641 ggatgaggat cgtttcgcat gattgaacaa gatggattgc acgcaggttc tccggccgct
     2701 tgggtggaga ggctattcgg ctatgactgg gcacaacaga caatcggctg ctctgatgcc
     2761 gccgtgttcc ggctgtcagc gcaggggcgc ccggttcttt ttgtcaagac cgacctgtcc
     2821 ggtgccctga atgaactgca ggacgaggca gcgcggctat cgtggctggc cacgacgggc
     2881 gttccttgcg cagctgtgct cgacgttgtc actgaagcgg gaagggactg gctgctattg
     2941 ggcgaagtgc cggggcagga tctcctgtca tctcaccttg ctcctgccga gaaagtatcc
     3001 atcatggctg atgcaatgcg gcggctgcat acgcttgatc cggctacctg cccattcgac
     3061 caccaagcga aacatcgcat cgagcgagca cgtactcgga tggaagccgg tcttgtcgat
     3121 caggatgatc tggacgaaga gcatcagggg ctcgcgccag ccgaactgtt cgccaggctc
     3181 aaggcgcgca tgcccgacgg cgaggatctc gtcgtgaccc atggcgatgc ctgcttgccg
     3241 aatatcatgg tggaaaatgg ccgcttttct ggattcatcg actgtggccg gctgggtgtg
     3301 gcggaccgct atcaggacat agcgttggct acccgtgata ttgctgaaga gcttggcggc
     3361 gaatgggctg accgcttcct cgtgctttac ggtatcgccg ctcccgattc gcagcgcatc
     3421 gccttctatc gccttcttga cgagttcttc tgagcgggac tctggggttc gaaatgaccg
     3481 accaagcgac gcccaacctg ccatcacgag atttcgattc caccgccgcc ttctatgaaa
     3541 ggttgggctt cggaatcgtt ttccgggacg ccggctggat gatcctccag cgcggggatc
     3601 tcatgctgga gttcttcgcc caccccaact tgtttattgc agcttataat ggttacaaat
     3661 aaagcaatag catcacaaat ttcacaaata aagcattttt ttcactgcat tctagttgtg
     3721 gtttgtccaa actcatcaat gtatcttatc atgtctgtat accgtcgacc tctagctaga
     3781 gcttggcgta atcatggtca tagctgtttc ctgtgtgaaa ttgttatccg ctcacaattc
     3841 cacacaacat acgagccgga agcataaagt gtaaagcctg gggtgcctaa tgagtgagct
     3901 aactcacatt aattgcgttg cgctcactgc ccgctttcca gtcgggaaac ctgtcgtgcc
     3961 agctgcatta atgaatcggc caacgcgcgg ggagaggcgg tttgcgtatt gggcgctctt
     4021 ccgcttcctc gctcactgac tcgctgcgct cggtcgttcg gctgcggcga gcggtatcag
     4081 ctcactcaaa ggcggtaata cggttatcca cagaatcagg ggataacgca ggaaagaaca
     4141 tgtgagcaaa aggccagcaa aaggccagga accgtaaaaa ggccgcgttg ctggcgtttt
     4201 tccataggct ccgcccccct gacgagcatc acaaaaatcg acgctcaagt cagaggtggc
     4261 gaaacccgac aggactataa agataccagg cgtttccccc tggaagctcc ctcgtgcgct
     4321 ctcctgttcc gaccctgccg cttaccggat acctgtccgc ctttctccct tcgggaagcg
     4381 tggcgctttc tcatagctca cgctgtaggt atctcagttc ggtgtaggtc gttcgctcca
     4441 agctgggctg tgtgcacgaa ccccccgttc agcccgaccg ctgcgcctta tccggtaact
     4501 atcgtcttga gtccaacccg gtaagacacg acttatcgcc actggcagca gccactggta
     4561 acaggattag cagagcgagg tatgtaggcg gtgctacaga gttcttgaag tggtggccta
     4621 actacggcta cactagaaga acagtatttg gtatctgcgc tctgctgaag ccagttacct
     4681 tcggaaaaag agttggtagc tcttgatccg gcaaacaaac caccgctggt agcggttttt
     4741 ttgtttgcaa gcagcagatt acgcgcagaa aaaaaggatc tcaagaagat cctttgatct
     4801 tttctacggg gtctgacgct cagtggaacg aaaactcacg ttaagggatt ttggtcatga
     4861 gattatcaaa aaggatcttc acctagatcc ttttaaatta aaaatgaagt tttaaatcaa
     4921 tctaaagtat atatgagtaa acttggtctg acagttacca atgcttaatc agtgaggcac
     4981 ctatctcagc gatctgtcta tttcgttcat ccatagttgc ctgactcccc gtcgtgtaga
     5041 taactacgat acgggagggc ttaccatctg gccccagtgc tgcaatgata ccgcgagacc
     5101 cacgctcacc ggctccagat ttatcagcaa taaaccagcc agccggaagg gccgagcgca
     5161 gaagtggtcc tgcaacttta tccgcctcca tccagtctat taattgttgc cgggaagcta
     5221 gagtaagtag ttcgccagtt aatagtttgc gcaacgttgt tgccattgct acaggcatcg
     5281 tggtgtcacg ctcgtcgttt ggtatggctt cattcagctc cggttcccaa cgatcaaggc
     5341 gagttacatg atcccccatg ttgtgcaaaa aagcggttag ctccttcggt cctccgatcg
     5401 ttgtcagaag taagttggcc gcagtgttat cactcatggt tatggcagca ctgcataatt
     5461 ctcttactgt catgccatcc gtaagatgct tttctgtgac tggtgagtac tcaaccaagt
     5521 cattctgaga atagtgtatg cggcgaccga gttgctcttg cccggcgtca atacgggata
     5581 ataccgcgcc acatagcaga actttaaaag tgctcatcat tggaaaacgt tcttcggggc
     5641 gaaaactctc aaggatctta ccgctgttga gatccagttc gatgtaaccc actcgtgcac
     5701 ccaactgatc ttcagcatct tttactttca ccagcgtttc tgggtgagca aaaacaggaa
     5761 ggcaaaatgc cgcaaaaaag ggaataaggg cgacacggaa atgttgaata ctcatactct
     5821 tcctttttca atattattga agcatttatc agggttattg tctcatgagc ggatacatat
     5881 ttgaatgtat ttagaaaaat aaacaaatag gggttccgcg cacatttccc cgaaaagtgc
     5941 cacctgacgt c
//

质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片

P3606/pCMV-SPORT6-BCAS3（1405-2742bp）人源基因质粒

P2571/pCMV-SPORT6-1DTD2人源基因质粒

P2625/pCMV-SPORT6-BEX2人源基因质粒

P3615/pCMV-SPORT6-HIST1H2BN人源基因质粒

P3616/pCMV-SPORT6-SYK人源基因质粒

P3617/pCMV-SPORT6-KLF10人源基因质粒

P3618/pCMV-SPORT6-APBB3人源基因质粒

P3619/pCMV-SPORT6-GABRB3人源基因质粒

P3620/pCMV-SPORT6-SLC29A2人源基因质粒

P3621/pCMV-SPORT6-NHLH1人源基因质粒

P3622/pCMV-SPORT6-MT1E人源基因质粒