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- 保质期：
2年
- 英文名：
pCDNA3.1+
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pCDNA3.1(+)哺乳表达质粒
别称: pCDNA3.1+
质粒属性
质粒简介
pCDNA3.1(+)是来自pCDNA3的5.4kb载体，设计用于哺乳动物宿主中的高水平稳定和瞬时表达。大多数哺乳动物细胞可以进行高水平的稳定和非复制性瞬时表达。人类巨细胞病毒立即早期（CMV）启动子，用于在广泛哺乳动物细胞中的高水平表达。前向（+）和反向（-）方向上的多个克隆位点，以促进克隆用于选择稳定细胞系的新霉素抗性基因。在潜伏感染SV40或表达SV40大T抗原（例如COS-1，COS-7）的细胞系中的异常复制。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 5428 bp ds-DNA circular SYN 18-九月-2016
DEFINITION synthetic circular DNA
KEYWORDS pCDNA3.1(+)
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 5428)
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported 2016年9月18日 from MiaoLingPlasmid
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..5428
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
enhancer 202..581
/note="CMV enhancer"
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 582..785
/note="CMV promoter"
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
promoter 830..848
/note="T7 promoter"
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
polyA_signal 995..1219
/note="bGH poly(A) signal"
/note="bovine growth hormone polyadenylation signal"
rep_origin 1265..1693
/direction=RIGHT
/note="f1 ori"
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
promoter 1707..2036
/note="SV40 promoter"
/note="SV40 enhancer and early promoter"
rep_origin 1887..2022
/note="SV40 ori"
/note="SV40 origin of replication"
CDS 2103..2897
/codon_start=1
/gene="aph(3')-II (or nptII)"
/product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
/note="NeoR/KanR"
/note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418
(Geneticin(R))"
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VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPATC-PFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
GLAPAELFARLKARMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
polyA_signal 3071..3192
/note="SV40 poly(A) signal"
/note="SV40 polyadenylation signal"
primer_bind complement(3241..3257)
/note="M13 rev"
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
protein_bind 3265..3281
/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="lac operator"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
promoter complement(3289..3319)
/note="lac promoter"
/note="promoter for the E. coli lac operon"
protein_bind 3334..3355
/bound_moiety="E. coli catabolite activator protein"
/note="CAP binding site"
/note="CAP binding activates transcription in the presence
of cAMP."
rep_origin complement(3643..4228)
/direction=LEFT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(4399..5259)
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/note="AmpR"
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
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EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
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LIKHW"
promoter complement(5260..5364)
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
ORIGIN
1 gcactctcag tacaatctgc tctgatgccg catagttaag ccagtatctg ctccctgctt
61 gtgtgttgga ggtcgctgag tagtgcgcga gcaaaattta agctacaaca aggcaaggct
121 tgaccgacaa ttgcatgaag aatctgctta gggttaggcg ttttgcgctg cttcgcgatg
181 tacgggccag atatacgcgt tgacattgat tattgactag ttattaatag taatcaatta
241 cggggtcatt agttcatagc ccatatatgg agttccgcgt tacataactt acggtaaatg
301 gcccgcctgg ctgaccgccc aacgaccccc gcccattgac gtcaataatg acgtatgttc
361 ccatagtaac gccaataggg actttccatt gacgtcaatg ggtggagtat ttacggtaaa
421 ctgcccactt ggcagtacat caagtgtatc atatgccaag tacgccccct attgacgtca
481 atgacggtaa atggcccgcc tggcattatg cccagtacat gaccttatgg gactttccta
541 cttggcagta catctacgta ttagtcatcg ctattaccat ggtgatgcgg ttttggcagt
601 acatcaatgg gcgtggatag cggtttgact cacggggatt tccaagtctc caccccattg
661 acgtcaatgg gagtttgttt tggcaccaaa atcaacggga ctttccaaaa tgtcgtaaca
721 actccgcccc attgacgcaa atgggcggta ggcgtgtacg gtgggaggtc tatataagca
781 gagctctctg gctaactaga gaacccactg cttactggct tatcgaaatt aatacgactc
841 actataggga gacccaagct ggctagcgtt taaacttaag cttggtaccg agctcggatc
901 cactagtcca gtgtggtgga attctgcaga tatccagcac agtggcggcc gctcgagtct
961 agagggcccg tttaaacccg ctgatcagcc tcgactgtgc cttctagttg ccagccatct
1021 gttgtttgcc cctcccccgt gccttccttg accctggaag gtgccactcc cactgtcctt
1081 tcctaataaa atgaggaaat tgcatcgcat tgtctgagta ggtgtcattc tattctgggg
1141 ggtggggtgg ggcaggacag caagggggag gattgggaag acaatagcag gcatgctggg
1201 gatgcggtgg gctctatggc ttctgaggcg gaaagaacca gctggggctc tagggggtat
1261 ccccacgcgc cctgtagcgg cgcattaagc gcggcgggtg tggtggttac gcgcagcgtg
1321 accgctacac ttgccagcgc cctagcgccc gctcctttcg ctttcttccc ttcctttctc
1381 gccacgttcg ccggctttcc ccgtcaagct ctaaatcggg ggctcccttt agggttccga
1441 tttagtgctt tacggcacct cgaccccaaa aaacttgatt agggtgatgg ttcacgtagt
1501 gggccatcgc cctgatagac ggtttttcgc cctttgacgt tggagtccac gttctttaat
1561 agtggactct tgttccaaac tggaacaaca ctcaacccta tctcggtcta ttcttttgat
1621 ttataaggga ttttgccgat ttcggcctat tggttaaaaa atgagctgat ttaacaaaaa
1681 tttaacgcga attaattctg tggaatgtgt gtcagttagg gtgtggaaag tccccaggct
1741 ccccagcagg cagaagtatg caaagcatgc atctcaatta gtcagcaacc aggtgtggaa
1801 agtccccagg ctccccagca ggcagaagta tgcaaagcat gcatctcaat tagtcagcaa
1861 ccatagtccc gcccctaact ccgcccatcc cgcccctaac tccgcccagt tccgcccatt
1921 ctccgcccca tggctgacta atttttttta tttatgcaga ggccgaggcc gcctctgcct
1981 ctgagctatt ccagaagtag tgaggaggct tttttggagg cctaggcttt tgcaaaaagc
2041 tcccgggagc ttgtatatcc attttcggat ctgatcaaga gacaggatga ggatcgtttc
2101 gcatgattga acaagatgga ttgcacgcag gttctccggc cgcttgggtg gagaggctat
2161 tcggctatga ctgggcacaa cagacaatcg gctgctctga tgccgccgtg ttccggctgt
2221 cagcgcaggg gcgcccggtt ctttttgtca agaccgacct gtccggtgcc ctgaatgaac
2281 tgcaggacga ggcagcgcgg ctatcgtggc tggccacgac gggcgttcct tgcgcagctg
2341 tgctcgacgt tgtcactgaa gcgggaaggg actggctgct attgggcgaa gtgccggggc
2401 aggatctcct gtcatctcac cttgctcctg ccgagaaagt atccatcatg gctgatgcaa
2461 tgcggcggct gcatacgctt gatccggcta cctgcccatt cgaccaccaa gcgaaacatc
2521 gcatcgagcg agcacgtact cggatggaag ccggtcttgt cgatcaggat gatctggacg
2581 aagagcatca ggggctcgcg ccagccgaac tgttcgccag gctcaaggcg cgcatgcccg
2641 acggcgagga tctcgtcgtg acccatggcg atgcctgctt gccgaatatc atggtggaaa
2701 atggccgctt ttctggattc atcgactgtg gccggctggg tgtggcggac cgctatcagg
2761 acatagcgtt ggctacccgt gatattgctg aagagcttgg cggcgaatgg gctgaccgct
2821 tcctcgtgct ttacggtatc gccgctcccg attcgcagcg catcgccttc tatcgccttc
2881 ttgacgagtt cttctgagcg ggactctggg gttcgaaatg accgaccaag cgacgcccaa
2941 cctgccatca cgagatttcg attccaccgc cgccttctat gaaaggttgg gcttcggaat
3001 cgttttccgg gacgccggct ggatgatcct ccagcgcggg gatctcatgc tggagttctt
3061 cgcccacccc aacttgttta ttgcagctta taatggttac aaataaagca atagcatcac
3121 aaatttcaca aataaagcat ttttttcact gcattctagt tgtggtttgt ccaaactcat
3181 caatgtatct tatcatgtct gtataccgtc gacctctagc tagagcttgg cgtaatcatg
3241 gtcatagctg tttcctgtgt gaaattgtta tccgctcaca attccacaca acatacgagc
3301 cggaagcata aagtgtaaag cctggggtgc ctaatgagtg agctaactca cattaattgc
3361 gttgcgctca ctgcccgctt tccagtcggg aaacctgtcg tgccagctgc attaatgaat
3421 cggccaacgc gcggggagag gcggtttgcg tattgggcgc tcttccgctt cctcgctcac
3481 tgactcgctg cgctcggtcg ttcggctgcg gcgagcggta tcagctcact caaaggcggt
3541 aatacggtta tccacagaat caggggataa cgcaggaaag aacatgtgag caaaaggcca
3601 gcaaaaggcc aggaaccgta aaaaggccgc gttgctggcg tttttccata ggctccgccc
3661 ccctgacgag catcacaaaa atcgacgctc aagtcagagg tggcgaaacc cgacaggact
3721 ataaagatac caggcgtttc cccctggaag ctccctcgtg cgctctcctg ttccgaccct
3781 gccgcttacc ggatacctgt ccgcctttct cccttcggga agcgtggcgc tttctcatag
3841 ctcacgctgt aggtatctca gttcggtgta ggtcgttcgc tccaagctgg gctgtgtgca
3901 cgaacccccc gttcagcccg accgctgcgc cttatccggt aactatcgtc ttgagtccaa
3961 cccggtaaga cacgacttat cgccactggc agcagccact ggtaacagga ttagcagagc
4021 gaggtatgta ggcggtgcta cagagttctt gaagtggtgg cctaactacg gctacactag
4081 aagaacagta tttggtatct gcgctctgct gaagccagtt accttcggaa aaagagttgg
4141 tagctcttga tccggcaaac aaaccaccgc tggtagcggt ttttttgttt gcaagcagca
4201 gattacgcgc agaaaaaaag gatctcaaga agatcctttg atcttttcta cggggtctga
4261 cgctcagtgg aacgaaaact cacgttaagg gattttggtc atgagattat caaaaaggat
4321 cttcacctag atccttttaa attaaaaatg aagttttaaa tcaatctaaa gtatatatga
4381 gtaaacttgg tctgacagtt accaatgctt aatcagtgag gcacctatct cagcgatctg
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4621 tttatccgcc tccatccagt ctattaattg ttgccgggaa gctagagtaa gtagttcgcc
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4741 gtttggtatg gcttcattca gctccggttc ccaacgatca aggcgagtta catgatcccc
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4861 ggccgcagtg ttatcactca tggttatggc agcactgcat aattctctta ctgtcatgcc
4921 atccgtaaga tgcttttctg tgactggtga gtactcaacc aagtcattct gagaatagtg
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5341 aaataaacaa ataggggttc cgcgcacatt tccccgaaaa gtgccacctg acgtcgacgg
5401 atcgggagat ctcccgatcc cctatggt
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pCDNA3.1(+)哺乳表达质粒
别称: pCDNA3.1+
| 启动子: | CMV |
|---|---|
| 复制子: | pUC |
| 终止子: | BGH poly(A) signal |
| 质粒分类: | 哺乳系列质粒；哺乳表达质粒；pCDNA系列质粒 |
| 质粒大小: | 5428bp |
| 原核抗性: | Amp |
| 筛选标记: | G418 |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
| 表达宿主: | 293T等哺乳细胞 |
| 培养条件: | 37℃，5%CO2 |
| 诱导方式: | 无需诱导 |
| 5'测序引物: | pCDNA3.1-F（CTAGAGAACCCACTGCTTAC） |
| 3'测序引物: | pCDNA3.1-R（TAGAAGGCACAGTCGAGG） |
质粒属性
| 载体宿主： | 哺乳细胞 |
|---|---|
| 载体用途： | 蛋白表达 |
| 基因种属： | 空载体 |
| 基因类型： | ORF |
| 原核抗性： | Amp |
| 真核抗性： | Neo/G418 |
| 荧光蛋白： |
质粒简介
pCDNA3.1(+)是来自pCDNA3的5.4kb载体，设计用于哺乳动物宿主中的高水平稳定和瞬时表达。大多数哺乳动物细胞可以进行高水平的稳定和非复制性瞬时表达。人类巨细胞病毒立即早期（CMV）启动子，用于在广泛哺乳动物细胞中的高水平表达。前向（+）和反向（-）方向上的多个克隆位点，以促进克隆用于选择稳定细胞系的新霉素抗性基因。在潜伏感染SV40或表达SV40大T抗原（例如COS-1，COS-7）的细胞系中的异常复制。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 5428 bp ds-DNA circular SYN 18-九月-2016
DEFINITION synthetic circular DNA
KEYWORDS pCDNA3.1(+)
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 5428)
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported 2016年9月18日 from MiaoLingPlasmid
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..5428
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
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/note="CMV enhancer"
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 582..785
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/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
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indicates direction of (+) strand synthesis"
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/note="SV40 promoter"
/note="SV40 enhancer and early promoter"
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/note="M13 rev"
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variants"
protein_bind 3265..3281
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/note="lac operator"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
promoter complement(3289..3319)
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replication"
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related antibiotics"
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LIKHW"
promoter complement(5260..5364)
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ORIGIN
1 gcactctcag tacaatctgc tctgatgccg catagttaag ccagtatctg ctccctgctt
61 gtgtgttgga ggtcgctgag tagtgcgcga gcaaaattta agctacaaca aggcaaggct
121 tgaccgacaa ttgcatgaag aatctgctta gggttaggcg ttttgcgctg cttcgcgatg
181 tacgggccag atatacgcgt tgacattgat tattgactag ttattaatag taatcaatta
241 cggggtcatt agttcatagc ccatatatgg agttccgcgt tacataactt acggtaaatg
301 gcccgcctgg ctgaccgccc aacgaccccc gcccattgac gtcaataatg acgtatgttc
361 ccatagtaac gccaataggg actttccatt gacgtcaatg ggtggagtat ttacggtaaa
421 ctgcccactt ggcagtacat caagtgtatc atatgccaag tacgccccct attgacgtca
481 atgacggtaa atggcccgcc tggcattatg cccagtacat gaccttatgg gactttccta
541 cttggcagta catctacgta ttagtcatcg ctattaccat ggtgatgcgg ttttggcagt
601 acatcaatgg gcgtggatag cggtttgact cacggggatt tccaagtctc caccccattg
661 acgtcaatgg gagtttgttt tggcaccaaa atcaacggga ctttccaaaa tgtcgtaaca
721 actccgcccc attgacgcaa atgggcggta ggcgtgtacg gtgggaggtc tatataagca
781 gagctctctg gctaactaga gaacccactg cttactggct tatcgaaatt aatacgactc
841 actataggga gacccaagct ggctagcgtt taaacttaag cttggtaccg agctcggatc
901 cactagtcca gtgtggtgga attctgcaga tatccagcac agtggcggcc gctcgagtct
961 agagggcccg tttaaacccg ctgatcagcc tcgactgtgc cttctagttg ccagccatct
1021 gttgtttgcc cctcccccgt gccttccttg accctggaag gtgccactcc cactgtcctt
1081 tcctaataaa atgaggaaat tgcatcgcat tgtctgagta ggtgtcattc tattctgggg
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1201 gatgcggtgg gctctatggc ttctgaggcg gaaagaacca gctggggctc tagggggtat
1261 ccccacgcgc cctgtagcgg cgcattaagc gcggcgggtg tggtggttac gcgcagcgtg
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1441 tttagtgctt tacggcacct cgaccccaaa aaacttgatt agggtgatgg ttcacgtagt
1501 gggccatcgc cctgatagac ggtttttcgc cctttgacgt tggagtccac gttctttaat
1561 agtggactct tgttccaaac tggaacaaca ctcaacccta tctcggtcta ttcttttgat
1621 ttataaggga ttttgccgat ttcggcctat tggttaaaaa atgagctgat ttaacaaaaa
1681 tttaacgcga attaattctg tggaatgtgt gtcagttagg gtgtggaaag tccccaggct
1741 ccccagcagg cagaagtatg caaagcatgc atctcaatta gtcagcaacc aggtgtggaa
1801 agtccccagg ctccccagca ggcagaagta tgcaaagcat gcatctcaat tagtcagcaa
1861 ccatagtccc gcccctaact ccgcccatcc cgcccctaac tccgcccagt tccgcccatt
1921 ctccgcccca tggctgacta atttttttta tttatgcaga ggccgaggcc gcctctgcct
1981 ctgagctatt ccagaagtag tgaggaggct tttttggagg cctaggcttt tgcaaaaagc
2041 tcccgggagc ttgtatatcc attttcggat ctgatcaaga gacaggatga ggatcgtttc
2101 gcatgattga acaagatgga ttgcacgcag gttctccggc cgcttgggtg gagaggctat
2161 tcggctatga ctgggcacaa cagacaatcg gctgctctga tgccgccgtg ttccggctgt
2221 cagcgcaggg gcgcccggtt ctttttgtca agaccgacct gtccggtgcc ctgaatgaac
2281 tgcaggacga ggcagcgcgg ctatcgtggc tggccacgac gggcgttcct tgcgcagctg
2341 tgctcgacgt tgtcactgaa gcgggaaggg actggctgct attgggcgaa gtgccggggc
2401 aggatctcct gtcatctcac cttgctcctg ccgagaaagt atccatcatg gctgatgcaa
2461 tgcggcggct gcatacgctt gatccggcta cctgcccatt cgaccaccaa gcgaaacatc
2521 gcatcgagcg agcacgtact cggatggaag ccggtcttgt cgatcaggat gatctggacg
2581 aagagcatca ggggctcgcg ccagccgaac tgttcgccag gctcaaggcg cgcatgcccg
2641 acggcgagga tctcgtcgtg acccatggcg atgcctgctt gccgaatatc atggtggaaa
2701 atggccgctt ttctggattc atcgactgtg gccggctggg tgtggcggac cgctatcagg
2761 acatagcgtt ggctacccgt gatattgctg aagagcttgg cggcgaatgg gctgaccgct
2821 tcctcgtgct ttacggtatc gccgctcccg attcgcagcg catcgccttc tatcgccttc
2881 ttgacgagtt cttctgagcg ggactctggg gttcgaaatg accgaccaag cgacgcccaa
2941 cctgccatca cgagatttcg attccaccgc cgccttctat gaaaggttgg gcttcggaat
3001 cgttttccgg gacgccggct ggatgatcct ccagcgcggg gatctcatgc tggagttctt
3061 cgcccacccc aacttgttta ttgcagctta taatggttac aaataaagca atagcatcac
3121 aaatttcaca aataaagcat ttttttcact gcattctagt tgtggtttgt ccaaactcat
3181 caatgtatct tatcatgtct gtataccgtc gacctctagc tagagcttgg cgtaatcatg
3241 gtcatagctg tttcctgtgt gaaattgtta tccgctcaca attccacaca acatacgagc
3301 cggaagcata aagtgtaaag cctggggtgc ctaatgagtg agctaactca cattaattgc
3361 gttgcgctca ctgcccgctt tccagtcggg aaacctgtcg tgccagctgc attaatgaat
3421 cggccaacgc gcggggagag gcggtttgcg tattgggcgc tcttccgctt cctcgctcac
3481 tgactcgctg cgctcggtcg ttcggctgcg gcgagcggta tcagctcact caaaggcggt
3541 aatacggtta tccacagaat caggggataa cgcaggaaag aacatgtgag caaaaggcca
3601 gcaaaaggcc aggaaccgta aaaaggccgc gttgctggcg tttttccata ggctccgccc
3661 ccctgacgag catcacaaaa atcgacgctc aagtcagagg tggcgaaacc cgacaggact
3721 ataaagatac caggcgtttc cccctggaag ctccctcgtg cgctctcctg ttccgaccct
3781 gccgcttacc ggatacctgt ccgcctttct cccttcggga agcgtggcgc tttctcatag
3841 ctcacgctgt aggtatctca gttcggtgta ggtcgttcgc tccaagctgg gctgtgtgca
3901 cgaacccccc gttcagcccg accgctgcgc cttatccggt aactatcgtc ttgagtccaa
3961 cccggtaaga cacgacttat cgccactggc agcagccact ggtaacagga ttagcagagc
4021 gaggtatgta ggcggtgcta cagagttctt gaagtggtgg cctaactacg gctacactag
4081 aagaacagta tttggtatct gcgctctgct gaagccagtt accttcggaa aaagagttgg
4141 tagctcttga tccggcaaac aaaccaccgc tggtagcggt ttttttgttt gcaagcagca
4201 gattacgcgc agaaaaaaag gatctcaaga agatcctttg atcttttcta cggggtctga
4261 cgctcagtgg aacgaaaact cacgttaagg gattttggtc atgagattat caaaaaggat
4321 cttcacctag atccttttaa attaaaaatg aagttttaaa tcaatctaaa gtatatatga
4381 gtaaacttgg tctgacagtt accaatgctt aatcagtgag gcacctatct cagcgatctg
4441 tctatttcgt tcatccatag ttgcctgact ccccgtcgtg tagataacta cgatacggga
4501 gggcttacca tctggcccca gtgctgcaat gataccgcga gacccacgct caccggctcc
4561 agatttatca gcaataaacc agccagccgg aagggccgag cgcagaagtg gtcctgcaac
4621 tttatccgcc tccatccagt ctattaattg ttgccgggaa gctagagtaa gtagttcgcc
4681 agttaatagt ttgcgcaacg ttgttgccat tgctacaggc atcgtggtgt cacgctcgtc
4741 gtttggtatg gcttcattca gctccggttc ccaacgatca aggcgagtta catgatcccc
4801 catgttgtgc aaaaaagcgg ttagctcctt cggtcctccg atcgttgtca gaagtaagtt
4861 ggccgcagtg ttatcactca tggttatggc agcactgcat aattctctta ctgtcatgcc
4921 atccgtaaga tgcttttctg tgactggtga gtactcaacc aagtcattct gagaatagtg
4981 tatgcggcga ccgagttgct cttgcccggc gtcaatacgg gataataccg cgccacatag
5041 cagaacttta aaagtgctca tcattggaaa acgttcttcg gggcgaaaac tctcaaggat
5101 cttaccgctg ttgagatcca gttcgatgta acccactcgt gcacccaact gatcttcagc
5161 atcttttact ttcaccagcg tttctgggtg agcaaaaaca ggaaggcaaa atgccgcaaa
5221 aaagggaata agggcgacac ggaaatgttg aatactcata ctcttccttt ttcaatatta
5281 ttgaagcatt tatcagggtt attgtctcat gagcggatac atatttgaat gtatttagaa
5341 aaataaacaa ataggggttc cgcgcacatt tccccgaaaa gtgccacctg acgtcgacgg
5401 atcgggagat ctcccgatcc cctatggt
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P1794/pENTR223-ARL17B人源基因质粒 |
| P1795/pENTR223-COX6A2人源基因质粒 |
| P1859/pENTR223-MLLT11人源基因质粒 |
| P1796/pENTR223-MLLT11-G262C人源基因质粒 |
| P0609/pENTR223-FNDC5人源基因质粒 |
| P0611/pENTR223-RLN2人源基因质粒 |
| P0531/pENTR223-LGALS13人源基因质粒 |
| P0540/pENTR223-FMR1人源基因质粒 |
| P0620/pENTR223-MS4A1人源基因质粒 |
| P1844/pENTR223-MAPK15人源基因质粒 |
| P1845/pENTR223-HMGN3人源基因质粒 |
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文献和实验相关实验
-1,pBADHis, pBADHislacZ，pLLP ompA, pINIIIompA, pMBP-P ,pMBP-C 共表达质粒：pCDFduet-1 以及pCDNA3.1，pEGFP-N2等 大肠杆菌Rosetta（DE3），Rasettagame（DE3），Top10F', BL21(DE3)plySS 等 酵母表达质粒： pPICZαA, pGAPZαA, 酵母细胞 KM71, X33 yingzi
1、质粒的概念 质粒（Plasmid）是一种存在于细菌、酵母等微生物细胞中的小型环状双链 DNA 分子，能够独立于宿主染色体进行自我复制，并通常携带对宿主生存非必需但具有特定功能的基因（如抗生素抗性基因）。质粒是分子生物学和基因工程中最重要的工具之一。 质粒根据其用途可以分为多种不同的类型，如用于保存序列信息的克隆质粒（如：pUC 系列质粒），用于表达蛋白的质粒（如哺乳动物细胞表达所用的 pcDNA3.1 系列质粒），用于基因编辑的质粒（如哺乳动物细胞基因编辑所用的 espCas9-2A
【求助】逆转录病毒、慢病毒载体与其他真核表达载体在稳定筛选时的区别？
.1等一些真核表达载体就行了还是选择慢病毒载体更好？ freecell 1. 在慢病毒载体中，由哺乳动物细胞翻译后的再加工修饰产生的外源蛋白，在活性方面远胜于原核表达系统及酵母、昆虫细胞等真核表达系统，表达的外源蛋白更加的接近天然蛋白。 2. 真核表达质粒的转染对于分裂增殖比较旺盛的体外培养细胞转染效果较好，但表达的目的基因常常随时间的延长而发生丢失。与真核表达质粒相比，病毒载体介导的基因转移可以整合入宿主的基因组中，具有更好的稳定性。最初研究的鼠干细胞
pCDNA3.1(+)哺乳表达质粒
￥100 - 1000
