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- 2025年07月09日
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- 详细信息
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
NM;DMRV;IBM2;Uae1;GLCNE
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pCDNA3.1-GNE-Myc-His人源基因质粒
别称: NM;DMRV;IBM2;Uae1;GLCNE
启动子：CMV
复制子: pUC
原核抗性: Amp
筛选标记：G418
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Amp
真核抗性：Neo/G418
荧光蛋白：
质粒简介
pCDNA3.1-GNE-myc-His(NM_001128227.2)是一个人源基因哺乳细胞表达质粒。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 7775 bp ds-DNA circular SYN 19-DEC-2017
DEFINITION synthetic circular DNA
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..7775
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
enhancer 235..614
/label=CMV enhancer
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 615..818
/label=CMV promoter
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
promoter 863..881
/label=T7 promoter
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
regulatory 983..992
/regulatory_class="other"
/note="vertebrate consensus sequence for strong initiation
of translation (Kozak, 1987)"
misc_feature 989..3247
/label=GNE
CDS 3260..3289
/codon_start=1
/product="Myc (human c-Myc proto-oncogene) epitope tag"
/label=Myc
/translation="EQKLISEEDL"
CDS 3305..3322
/codon_start=1
/product="6xHis affinity tag"
/label=6xHis
/translation="HHHHHH"
polyA_signal 3372..3596
/label=bGH poly(A) signal
/note="bovine growth hormone polyadenylation signal"
rep_origin 3642..4070
/direction=RIGHT
/label=f1 ori
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
promoter 4084..4413
/label=SV40 promoter
/note="SV40 enhancer and early promoter"
rep_origin 4264..4399
/label=SV40 ori
/note="SV40 origin of replication"
CDS 4480..5274
/codon_start=1
/gene="aph(3')-II (or nptII)"
/product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
/label=Neo
/note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418
(Geneticin(R))"
/translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPAT-CPFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
GLAPAELFARLKARMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
polyA_signal 5448..5569
/label=SV40 poly(A) signal
/note="SV40 polyadenylation signal"
rep_origin complement(6020..6608)
/direction=LEFT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(6779..7639)
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/label=Amp
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
promoter complement(7640..7744)
/gene="bla"
/label=AmpR promoter
ORIGIN
1 gacggatcgg gagatctccc gatcccctat ggtgcactct cagtacaatc tgctctgatg
61 ccgcatagtt aagccagtat ctgctccctg cttgtgtgtt ggaggtcgct gagtagtgcg
121 cgagcaaaat ttaagctaca acaaggcaag gcttgaccga caattgcatg aagaatctgc
181 ttagggttag gcgttttgcg ctgcttcgcg atgtacgggc cagatatacg cgttgacatt
241 gattattgac tagttattaa tagtaatcaa ttacggggtc attagttcat agcccatata
301 tggagttccg cgttacataa cttacggtaa atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc
361 cccgcccatt gacgtcaata atgacgtatg ttcccatagt aacgccaata gggactttcc
421 attgacgtca atgggtggag tatttacggt aaactgccca cttggcagta catcaagtgt
481 atcatatgcc aagtacgccc cctattgacg tcaatgacgg taaatggccc gcctggcatt
541 atgcccagta catgacctta tgggactttc ctacttggca gtacatctac gtattagtca
601 tcgctattac catggtgatg cggttttggc agtacatcaa tgggcgtgga tagcggtttg
661 actcacgggg atttccaagt ctccacccca ttgacgtcaa tgggagtttg ttttggcacc
721 aaaatcaacg ggactttcca aaatgtcgta acaactccgc cccattgacg caaatgggcg
781 gtaggcgtgt acggtgggag gtctatataa gcagagctct ctggctaact agagaaccca
841 ctgcttactg gcttatcgaa attaatacga ctcactatag ggagacccaa gctggctagc
901 gtttaaacgg gccctctaga ctcgagcggc cgccactgtg ctggatatct gcagaattcc
961 accacactgg actagtggat ccgccaccat ggaaacctat ggttatctgc agagggagtc
1021 atgctttcaa ggacctcatg aactctattt taagaacctc tcaaaacgaa acaagcaaat
1081 catggagaag aatggaaata accgaaagct gcgggtttgt gttgctactt gtaaccgtgc
1141 agattattct aaacttgccc cgatcatgtt tggcattaaa accgaacctg agttctttga
1201 acttgatgtt gtggtacttg gctctcacct gatagatgac tatggaaata catatcgaat
1261 gattgaacaa gatgactttg acattaacac caggctacac acaattgtga ggggagaaga
1321 tgaggcagcc atggtggagt cagtaggcct ggccctagtg aagctgccag atgtccttaa
1381 tcgcctgaag cctgatatca tgattgttca tggagacagg tttgatgccc tggctctggc
1441 cacatctgct gccttgatga acatccgaat ccttcacatt gaaggtgggg aagtcagtgg
1501 gaccattgat gactctatca gacatgccat aacaaaactg gctcattatc atgtgtgctg
1561 cacccgcagt gcagagcagc acctgatatc catgtgtgag gaccatgatc gcatcctttt
1621 ggcaggctgc ccttcctatg acaaacttct ctcagccaag aacaaagact acatgagcat
1681 cattcgcatg tggctaggtg atgatgtaaa atctaaagat tacattgttg cactacagca
1741 ccctgtgacc actgacatta agcattccat aaaaatgttt gaattaacat tggatgcact
1801 tatctcattt aacaagcgga ccctagtcct gtttccaaat attgacgcag ggagcaaaga
1861 gatggttcga gtgatgcgga agaagggcat tgagcatcat cccaactttc gtgcagttaa
1921 acacgtccca tttgaccagt ttatacagtt ggttgcccat gctggctgta tgattgggaa
1981 cagcagctgt ggggttcgag aagttggagc ttttggaaca cctgtgatca acctgggaac
2041 acgtcagatt ggaagagaaa caggggagaa tgttcttcat gtccgggatg ctgacaccca
2101 agacaaaata ttgcaagcac tgcaccttca gtttggtaaa cagtaccctt gttcaaagat
2161 atatggggat ggaaatgctg ttccaaggat tttgaagttt ctcaaatcta tcgatcttca
2221 agagccactg caaaagaaat tctgctttcc tcctgtgaag gagaatatct ctcaagatat
2281 tgaccatatt cttgaaactc taagtgcctt ggccgttgat cttggcggga cgaacctccg
2341 agttgcaata gtcagcatga agggtgaaat agttaagaag tatactcagt tcaatcctaa
2401 aacctatgaa gagaggatta atttaatcct acagatgtgt gtggaagctg cagcagaagc
2461 tgtaaaactg aactgcagaa ttttgggagt aggcatttcc acaggtggcc gtgtaaatcc
2521 tcgggaagga attgtgctgc attcaaccaa actgatccaa gagtggaact ctgtggacct
2581 taggaccccc ctttctgaca ctttgcatct ccctgtgtgg gtagacaatg atggcaactg
2641 tgctgccctg gcggaaagga aatttggcca aggaaaggga ctggaaaact ttgttacact
2701 tatcacaggc acaggaatcg gtggtggaat tatccatcag catgaattga tccacggaag
2761 ctccttctgt gctgcagaac tgggccacct tgttgtgtct ctggatgggc ctgattgttc
2821 ctgtggaagc catgggtgca ttgaagcata cgcctctgga atggccttgc agagggaggc
2881 aaaaaagctc catgatgagg acctgctctt ggtggaaggg atgtcagtgc caaaagatga
2941 ggctgtgggt gcgctccatc tcatccaagc tgcgaaactt ggcaatgcga aggcccagag
3001 catcctaaga acagctggaa cagctttggg tcttggggtt gtgaacatcc tccataccat
3061 gaatccctcc cttgtgatcc tctccggagt cctggccagt cactatatcc acattgtcaa
3121 agacgtcatt cgccagcagg ccttgtcctc cgtgcaggac gtggatgtgg tggtttcgga
3181 tttggttgac cccgccctgc tgggtgctgc cagcatggtt ctggactaca caacacgcag
3241 gatctacaag cttgggcccg aacaaaaact catctcagaa gaggatctga atagcgccgt
3301 cgaccatcat catcatcatc attgagttta aacggtctcc agcttaagtt taaaccgctg
3361 atcagcctcg actgtgcctt ctagttgcca gccatctgtt gtttgcccct cccccgtgcc
3421 ttccttgacc ctggaaggtg ccactcccac tgtcctttcc taataaaatg aggaaattgc
3481 atcgcattgt ctgagtaggt gtcattctat tctggggggt ggggtggggc aggacagcaa
3541 gggggaggat tgggaagaca atagcaggca tgctggggat gcggtgggct ctatggcttc
3601 tgaggcggaa agaaccagct ggggctctag ggggtatccc cacgcgccct gtagcggcgc
3661 attaagcgcg gcgggtgtgg tggttacgcg cagcgtgacc gctacacttg ccagcgccct
3721 agcgcccgct cctttcgctt tcttcccttc ctttctcgcc acgttcgccg gctttccccg
3781 tcaagctcta aatcgggggc tccctttagg gttccgattt agtgctttac ggcacctcga
3841 ccccaaaaaa cttgattagg gtgatggttc acgtagtggg ccatcgccct gatagacggt
3901 ttttcgccct ttgacgttgg agtccacgtt ctttaatagt ggactcttgt tccaaactgg
3961 aacaacactc aaccctatct cggtctattc ttttgattta taagggattt tgccgatttc
4021 ggcctattgg ttaaaaaatg agctgattta acaaaaattt aacgcgaatt aattctgtgg
4081 aatgtgtgtc agttagggtg tggaaagtcc ccaggctccc cagcaggcag aagtatgcaa
4141 agcatgcatc tcaattagtc agcaaccagg tgtggaaagt ccccaggctc cccagcaggc
4201 agaagtatgc aaagcatgca tctcaattag tcagcaacca tagtcccgcc cctaactccg
4261 cccatcccgc ccctaactcc gcccagttcc gcccattctc cgccccatgg ctgactaatt
4321 ttttttattt atgcagaggc cgaggccgcc tctgcctctg agctattcca gaagtagtga
4381 ggaggctttt ttggaggcct aggcttttgc aaaaagctcc cgggagcttg tatatccatt
4441 ttcggatctg atcaagagac aggatgagga tcgtttcgca tgattgaaca agatggattg
4501 cacgcaggtt ctccggccgc ttgggtggag aggctattcg gctatgactg ggcacaacag
4561 acaatcggct gctctgatgc cgccgtgttc cggctgtcag cgcaggggcg cccggttctt
4621 tttgtcaaga ccgacctgtc cggtgccctg aatgaactgc aggacgaggc agcgcggcta
4681 tcgtggctgg ccacgacggg cgttccttgc gcagctgtgc tcgacgttgt cactgaagcg
4741 ggaagggact ggctgctatt gggcgaagtg ccggggcagg atctcctgtc atctcacctt
4801 gctcctgccg agaaagtatc catcatggct gatgcaatgc ggcggctgca tacgcttgat
4861 ccggctacct gcccattcga ccaccaagcg aaacatcgca tcgagcgagc acgtactcgg
4921 atggaagccg gtcttgtcga tcaggatgat ctggacgaag agcatcaggg gctcgcgcca
4981 gccgaactgt tcgccaggct caaggcgcgc atgcccgacg gcgaggatct cgtcgtgacc
5041 catggcgatg cctgcttgcc gaatatcatg gtggaaaatg gccgcttttc tggattcatc
5101 gactgtggcc ggctgggtgt ggcggaccgc tatcaggaca tagcgttggc tacccgtgat
5161 attgctgaag agcttggcgg cgaatgggct gaccgcttcc tcgtgcttta cggtatcgcc
5221 gctcccgatt cgcagcgcat cgccttctat cgccttcttg acgagttctt ctgagcggga
5281 ctctggggtt cgaaatgacc gaccaagcga cgcccaacct gccatcacga gatttcgatt
5341 ccaccgccgc cttctatgaa aggttgggct tcggaatcgt tttccgggac gccggctgga
5401 tgatcctcca gcgcggggat ctcatgctgg agttcttcgc ccaccccaac ttgtttattg
5461 cagcttataa tggttacaaa taaagcaata gcatcacaaa tttcacaaat aaagcatttt
5521 tttcactgca ttctagttgt ggtttgtcca aactcatcaa tgtatcttat catgtctgta
5581 taccgtcgac ctctagctag agcttggcgt aatcatggtc atagctgttt cctgtgtgaa
5641 attgttatcc gctcacaatt ccacacaaca tacgagccgg aagcataaag tgtaaagcct
5701 ggggtgccta atgagtgagc taactcacat taattgcgtt gcgctcactg cccgctttcc
5761 agtcgggaaa cctgtcgtgc cagctgcatt aatgaatcgg ccaacgcgcg gggagaggcg
5821 gtttgcgtat tgggcgctct tccgcttcct cgctcactga ctcgctgcgc tcggtcgttc
5881 ggctgcggcg agcggtatca gctcactcaa aggcggtaat acggttatcc acagaatcag
5941 gggataacgc aggaaagaac atgtgagcaa aaggccagca aaaggccagg aaccgtaaaa
6001 aggccgcgtt gctggcgttt ttccataggc tccgcccccc tgacgagcat cacaaaaatc
6061 gacgctcaag tcagaggtgg cgaaacccga caggactata aagataccag gcgtttcccc
6121 ctggaagctc cctcgtgcgc tctcctgttc cgaccctgcc gcttaccgga tacctgtccg
6181 cctttctccc ttcgggaagc gtggcgcttt ctcatagctc acgctgtagg tatctcagtt
6241 cggtgtaggt cgttcgctcc aagctgggct gtgtgcacga accccccgtt cagcccgacc
6301 gctgcgcctt atccggtaac tatcgtcttg agtccaaccc ggtaagacac gacttatcgc
6361 cactggcagc agccactggt aacaggatta gcagagcgag gtatgtaggc ggtgctacag
6421 agttcttgaa gtggtggcct aactacggct acactagaag aacagtattt ggtatctgcg
6481 ctctgctgaa gccagttacc ttcggaaaaa gagttggtag ctcttgatcc ggcaaacaaa
6541 ccaccgctgg tagcggtggt ttttttgttt gcaagcagca gattacgcgc agaaaaaaag
6601 gatctcaaga agatcctttg atcttttcta cggggtctga cgctcagtgg aacgaaaact
6661 cacgttaagg gattttggtc atgagattat caaaaaggat cttcacctag atccttttaa
6721 attaaaaatg aagttttaaa tcaatctaaa gtatatatga gtaaacttgg tctgacagtt
6781 accaatgctt aatcagtgag gcacctatct cagcgatctg tctatttcgt tcatccatag
6841 ttgcctgact ccccgtcgtg tagataacta cgatacggga gggcttacca tctggcccca
6901 gtgctgcaat gataccgcga gacccacgct caccggctcc agatttatca gcaataaacc
6961 agccagccgg aagggccgag cgcagaagtg gtcctgcaac tttatccgcc tccatccagt
7021 ctattaattg ttgccgggaa gctagagtaa gtagttcgcc agttaatagt ttgcgcaacg
7081 ttgttgccat tgctacaggc atcgtggtgt cacgctcgtc gtttggtatg gcttcattca
7141 gctccggttc ccaacgatca aggcgagtta catgatcccc catgttgtgc aaaaaagcgg
7201 ttagctcctt cggtcctccg atcgttgtca gaagtaagtt ggccgcagtg ttatcactca
7261 tggttatggc agcactgcat aattctctta ctgtcatgcc atccgtaaga tgcttttctg
7321 tgactggtga gtactcaacc aagtcattct gagaatagtg tatgcggcga ccgagttgct
7381 cttgcccggc gtcaatacgg gataataccg cgccacatag cagaacttta aaagtgctca
7441 tcattggaaa acgttcttcg gggcgaaaac tctcaaggat cttaccgctg ttgagatcca
7501 gttcgatgta acccactcgt gcacccaact gatcttcagc atcttttact ttcaccagcg
7561 tttctgggtg agcaaaaaca ggaaggcaaa atgccgcaaa aaagggaata agggcgacac
7621 ggaaatgttg aatactcata ctcttccttt ttcaatatta ttgaagcatt tatcagggtt
7681 attgtctcat gagcggatac atatttgaat gtatttagaa aaataaacaa ataggggttc
7741 cgcgcacatt tccccgaaaa gtgccacctg acgtc
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pCDNA3.1-GNE-Myc-His人源基因质粒
别称: NM;DMRV;IBM2;Uae1;GLCNE
启动子：CMV
复制子: pUC
原核抗性: Amp
筛选标记：G418
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Amp
真核抗性：Neo/G418
荧光蛋白：
质粒简介
pCDNA3.1-GNE-myc-His(NM_001128227.2)是一个人源基因哺乳细胞表达质粒。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 7775 bp ds-DNA circular SYN 19-DEC-2017
DEFINITION synthetic circular DNA
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..7775
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
enhancer 235..614
/label=CMV enhancer
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 615..818
/label=CMV promoter
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
promoter 863..881
/label=T7 promoter
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
regulatory 983..992
/regulatory_class="other"
/note="vertebrate consensus sequence for strong initiation
of translation (Kozak, 1987)"
misc_feature 989..3247
/label=GNE
CDS 3260..3289
/codon_start=1
/product="Myc (human c-Myc proto-oncogene) epitope tag"
/label=Myc
/translation="EQKLISEEDL"
CDS 3305..3322
/codon_start=1
/product="6xHis affinity tag"
/label=6xHis
/translation="HHHHHH"
polyA_signal 3372..3596
/label=bGH poly(A) signal
/note="bovine growth hormone polyadenylation signal"
rep_origin 3642..4070
/direction=RIGHT
/label=f1 ori
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
promoter 4084..4413
/label=SV40 promoter
/note="SV40 enhancer and early promoter"
rep_origin 4264..4399
/label=SV40 ori
/note="SV40 origin of replication"
CDS 4480..5274
/codon_start=1
/gene="aph(3')-II (or nptII)"
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/label=Neo
/note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418
(Geneticin(R))"
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VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPAT-CPFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
GLAPAELFARLKARMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
polyA_signal 5448..5569
/label=SV40 poly(A) signal
/note="SV40 polyadenylation signal"
rep_origin complement(6020..6608)
/direction=LEFT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(6779..7639)
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/label=Amp
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
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LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
promoter complement(7640..7744)
/gene="bla"
/label=AmpR promoter
ORIGIN
1 gacggatcgg gagatctccc gatcccctat ggtgcactct cagtacaatc tgctctgatg
61 ccgcatagtt aagccagtat ctgctccctg cttgtgtgtt ggaggtcgct gagtagtgcg
121 cgagcaaaat ttaagctaca acaaggcaag gcttgaccga caattgcatg aagaatctgc
181 ttagggttag gcgttttgcg ctgcttcgcg atgtacgggc cagatatacg cgttgacatt
241 gattattgac tagttattaa tagtaatcaa ttacggggtc attagttcat agcccatata
301 tggagttccg cgttacataa cttacggtaa atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc
361 cccgcccatt gacgtcaata atgacgtatg ttcccatagt aacgccaata gggactttcc
421 attgacgtca atgggtggag tatttacggt aaactgccca cttggcagta catcaagtgt
481 atcatatgcc aagtacgccc cctattgacg tcaatgacgg taaatggccc gcctggcatt
541 atgcccagta catgacctta tgggactttc ctacttggca gtacatctac gtattagtca
601 tcgctattac catggtgatg cggttttggc agtacatcaa tgggcgtgga tagcggtttg
661 actcacgggg atttccaagt ctccacccca ttgacgtcaa tgggagtttg ttttggcacc
721 aaaatcaacg ggactttcca aaatgtcgta acaactccgc cccattgacg caaatgggcg
781 gtaggcgtgt acggtgggag gtctatataa gcagagctct ctggctaact agagaaccca
841 ctgcttactg gcttatcgaa attaatacga ctcactatag ggagacccaa gctggctagc
901 gtttaaacgg gccctctaga ctcgagcggc cgccactgtg ctggatatct gcagaattcc
961 accacactgg actagtggat ccgccaccat ggaaacctat ggttatctgc agagggagtc
1021 atgctttcaa ggacctcatg aactctattt taagaacctc tcaaaacgaa acaagcaaat
1081 catggagaag aatggaaata accgaaagct gcgggtttgt gttgctactt gtaaccgtgc
1141 agattattct aaacttgccc cgatcatgtt tggcattaaa accgaacctg agttctttga
1201 acttgatgtt gtggtacttg gctctcacct gatagatgac tatggaaata catatcgaat
1261 gattgaacaa gatgactttg acattaacac caggctacac acaattgtga ggggagaaga
1321 tgaggcagcc atggtggagt cagtaggcct ggccctagtg aagctgccag atgtccttaa
1381 tcgcctgaag cctgatatca tgattgttca tggagacagg tttgatgccc tggctctggc
1441 cacatctgct gccttgatga acatccgaat ccttcacatt gaaggtgggg aagtcagtgg
1501 gaccattgat gactctatca gacatgccat aacaaaactg gctcattatc atgtgtgctg
1561 cacccgcagt gcagagcagc acctgatatc catgtgtgag gaccatgatc gcatcctttt
1621 ggcaggctgc ccttcctatg acaaacttct ctcagccaag aacaaagact acatgagcat
1681 cattcgcatg tggctaggtg atgatgtaaa atctaaagat tacattgttg cactacagca
1741 ccctgtgacc actgacatta agcattccat aaaaatgttt gaattaacat tggatgcact
1801 tatctcattt aacaagcgga ccctagtcct gtttccaaat attgacgcag ggagcaaaga
1861 gatggttcga gtgatgcgga agaagggcat tgagcatcat cccaactttc gtgcagttaa
1921 acacgtccca tttgaccagt ttatacagtt ggttgcccat gctggctgta tgattgggaa
1981 cagcagctgt ggggttcgag aagttggagc ttttggaaca cctgtgatca acctgggaac
2041 acgtcagatt ggaagagaaa caggggagaa tgttcttcat gtccgggatg ctgacaccca
2101 agacaaaata ttgcaagcac tgcaccttca gtttggtaaa cagtaccctt gttcaaagat
2161 atatggggat ggaaatgctg ttccaaggat tttgaagttt ctcaaatcta tcgatcttca
2221 agagccactg caaaagaaat tctgctttcc tcctgtgaag gagaatatct ctcaagatat
2281 tgaccatatt cttgaaactc taagtgcctt ggccgttgat cttggcggga cgaacctccg
2341 agttgcaata gtcagcatga agggtgaaat agttaagaag tatactcagt tcaatcctaa
2401 aacctatgaa gagaggatta atttaatcct acagatgtgt gtggaagctg cagcagaagc
2461 tgtaaaactg aactgcagaa ttttgggagt aggcatttcc acaggtggcc gtgtaaatcc
2521 tcgggaagga attgtgctgc attcaaccaa actgatccaa gagtggaact ctgtggacct
2581 taggaccccc ctttctgaca ctttgcatct ccctgtgtgg gtagacaatg atggcaactg
2641 tgctgccctg gcggaaagga aatttggcca aggaaaggga ctggaaaact ttgttacact
2701 tatcacaggc acaggaatcg gtggtggaat tatccatcag catgaattga tccacggaag
2761 ctccttctgt gctgcagaac tgggccacct tgttgtgtct ctggatgggc ctgattgttc
2821 ctgtggaagc catgggtgca ttgaagcata cgcctctgga atggccttgc agagggaggc
2881 aaaaaagctc catgatgagg acctgctctt ggtggaaggg atgtcagtgc caaaagatga
2941 ggctgtgggt gcgctccatc tcatccaagc tgcgaaactt ggcaatgcga aggcccagag
3001 catcctaaga acagctggaa cagctttggg tcttggggtt gtgaacatcc tccataccat
3061 gaatccctcc cttgtgatcc tctccggagt cctggccagt cactatatcc acattgtcaa
3121 agacgtcatt cgccagcagg ccttgtcctc cgtgcaggac gtggatgtgg tggtttcgga
3181 tttggttgac cccgccctgc tgggtgctgc cagcatggtt ctggactaca caacacgcag
3241 gatctacaag cttgggcccg aacaaaaact catctcagaa gaggatctga atagcgccgt
3301 cgaccatcat catcatcatc attgagttta aacggtctcc agcttaagtt taaaccgctg
3361 atcagcctcg actgtgcctt ctagttgcca gccatctgtt gtttgcccct cccccgtgcc
3421 ttccttgacc ctggaaggtg ccactcccac tgtcctttcc taataaaatg aggaaattgc
3481 atcgcattgt ctgagtaggt gtcattctat tctggggggt ggggtggggc aggacagcaa
3541 gggggaggat tgggaagaca atagcaggca tgctggggat gcggtgggct ctatggcttc
3601 tgaggcggaa agaaccagct ggggctctag ggggtatccc cacgcgccct gtagcggcgc
3661 attaagcgcg gcgggtgtgg tggttacgcg cagcgtgacc gctacacttg ccagcgccct
3721 agcgcccgct cctttcgctt tcttcccttc ctttctcgcc acgttcgccg gctttccccg
3781 tcaagctcta aatcgggggc tccctttagg gttccgattt agtgctttac ggcacctcga
3841 ccccaaaaaa cttgattagg gtgatggttc acgtagtggg ccatcgccct gatagacggt
3901 ttttcgccct ttgacgttgg agtccacgtt ctttaatagt ggactcttgt tccaaactgg
3961 aacaacactc aaccctatct cggtctattc ttttgattta taagggattt tgccgatttc
4021 ggcctattgg ttaaaaaatg agctgattta acaaaaattt aacgcgaatt aattctgtgg
4081 aatgtgtgtc agttagggtg tggaaagtcc ccaggctccc cagcaggcag aagtatgcaa
4141 agcatgcatc tcaattagtc agcaaccagg tgtggaaagt ccccaggctc cccagcaggc
4201 agaagtatgc aaagcatgca tctcaattag tcagcaacca tagtcccgcc cctaactccg
4261 cccatcccgc ccctaactcc gcccagttcc gcccattctc cgccccatgg ctgactaatt
4321 ttttttattt atgcagaggc cgaggccgcc tctgcctctg agctattcca gaagtagtga
4381 ggaggctttt ttggaggcct aggcttttgc aaaaagctcc cgggagcttg tatatccatt
4441 ttcggatctg atcaagagac aggatgagga tcgtttcgca tgattgaaca agatggattg
4501 cacgcaggtt ctccggccgc ttgggtggag aggctattcg gctatgactg ggcacaacag
4561 acaatcggct gctctgatgc cgccgtgttc cggctgtcag cgcaggggcg cccggttctt
4621 tttgtcaaga ccgacctgtc cggtgccctg aatgaactgc aggacgaggc agcgcggcta
4681 tcgtggctgg ccacgacggg cgttccttgc gcagctgtgc tcgacgttgt cactgaagcg
4741 ggaagggact ggctgctatt gggcgaagtg ccggggcagg atctcctgtc atctcacctt
4801 gctcctgccg agaaagtatc catcatggct gatgcaatgc ggcggctgca tacgcttgat
4861 ccggctacct gcccattcga ccaccaagcg aaacatcgca tcgagcgagc acgtactcgg
4921 atggaagccg gtcttgtcga tcaggatgat ctggacgaag agcatcaggg gctcgcgcca
4981 gccgaactgt tcgccaggct caaggcgcgc atgcccgacg gcgaggatct cgtcgtgacc
5041 catggcgatg cctgcttgcc gaatatcatg gtggaaaatg gccgcttttc tggattcatc
5101 gactgtggcc ggctgggtgt ggcggaccgc tatcaggaca tagcgttggc tacccgtgat
5161 attgctgaag agcttggcgg cgaatgggct gaccgcttcc tcgtgcttta cggtatcgcc
5221 gctcccgatt cgcagcgcat cgccttctat cgccttcttg acgagttctt ctgagcggga
5281 ctctggggtt cgaaatgacc gaccaagcga cgcccaacct gccatcacga gatttcgatt
5341 ccaccgccgc cttctatgaa aggttgggct tcggaatcgt tttccgggac gccggctgga
5401 tgatcctcca gcgcggggat ctcatgctgg agttcttcgc ccaccccaac ttgtttattg
5461 cagcttataa tggttacaaa taaagcaata gcatcacaaa tttcacaaat aaagcatttt
5521 tttcactgca ttctagttgt ggtttgtcca aactcatcaa tgtatcttat catgtctgta
5581 taccgtcgac ctctagctag agcttggcgt aatcatggtc atagctgttt cctgtgtgaa
5641 attgttatcc gctcacaatt ccacacaaca tacgagccgg aagcataaag tgtaaagcct
5701 ggggtgccta atgagtgagc taactcacat taattgcgtt gcgctcactg cccgctttcc
5761 agtcgggaaa cctgtcgtgc cagctgcatt aatgaatcgg ccaacgcgcg gggagaggcg
5821 gtttgcgtat tgggcgctct tccgcttcct cgctcactga ctcgctgcgc tcggtcgttc
5881 ggctgcggcg agcggtatca gctcactcaa aggcggtaat acggttatcc acagaatcag
5941 gggataacgc aggaaagaac atgtgagcaa aaggccagca aaaggccagg aaccgtaaaa
6001 aggccgcgtt gctggcgttt ttccataggc tccgcccccc tgacgagcat cacaaaaatc
6061 gacgctcaag tcagaggtgg cgaaacccga caggactata aagataccag gcgtttcccc
6121 ctggaagctc cctcgtgcgc tctcctgttc cgaccctgcc gcttaccgga tacctgtccg
6181 cctttctccc ttcgggaagc gtggcgcttt ctcatagctc acgctgtagg tatctcagtt
6241 cggtgtaggt cgttcgctcc aagctgggct gtgtgcacga accccccgtt cagcccgacc
6301 gctgcgcctt atccggtaac tatcgtcttg agtccaaccc ggtaagacac gacttatcgc
6361 cactggcagc agccactggt aacaggatta gcagagcgag gtatgtaggc ggtgctacag
6421 agttcttgaa gtggtggcct aactacggct acactagaag aacagtattt ggtatctgcg
6481 ctctgctgaa gccagttacc ttcggaaaaa gagttggtag ctcttgatcc ggcaaacaaa
6541 ccaccgctgg tagcggtggt ttttttgttt gcaagcagca gattacgcgc agaaaaaaag
6601 gatctcaaga agatcctttg atcttttcta cggggtctga cgctcagtgg aacgaaaact
6661 cacgttaagg gattttggtc atgagattat caaaaaggat cttcacctag atccttttaa
6721 attaaaaatg aagttttaaa tcaatctaaa gtatatatga gtaaacttgg tctgacagtt
6781 accaatgctt aatcagtgag gcacctatct cagcgatctg tctatttcgt tcatccatag
6841 ttgcctgact ccccgtcgtg tagataacta cgatacggga gggcttacca tctggcccca
6901 gtgctgcaat gataccgcga gacccacgct caccggctcc agatttatca gcaataaacc
6961 agccagccgg aagggccgag cgcagaagtg gtcctgcaac tttatccgcc tccatccagt
7021 ctattaattg ttgccgggaa gctagagtaa gtagttcgcc agttaatagt ttgcgcaacg
7081 ttgttgccat tgctacaggc atcgtggtgt cacgctcgtc gtttggtatg gcttcattca
7141 gctccggttc ccaacgatca aggcgagtta catgatcccc catgttgtgc aaaaaagcgg
7201 ttagctcctt cggtcctccg atcgttgtca gaagtaagtt ggccgcagtg ttatcactca
7261 tggttatggc agcactgcat aattctctta ctgtcatgcc atccgtaaga tgcttttctg
7321 tgactggtga gtactcaacc aagtcattct gagaatagtg tatgcggcga ccgagttgct
7381 cttgcccggc gtcaatacgg gataataccg cgccacatag cagaacttta aaagtgctca
7441 tcattggaaa acgttcttcg gggcgaaaac tctcaaggat cttaccgctg ttgagatcca
7501 gttcgatgta acccactcgt gcacccaact gatcttcagc atcttttact ttcaccagcg
7561 tttctgggtg agcaaaaaca ggaaggcaaa atgccgcaaa aaagggaata agggcgacac
7621 ggaaatgttg aatactcata ctcttccttt ttcaatatta ttgaagcatt tatcagggtt
7681 attgtctcat gagcggatac atatttgaat gtatttagaa aaataaacaa ataggggttc
7741 cgcgcacatt tccccgaaaa gtgccacctg acgtc
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P3638/pCMV-SPORT6-NEIL1（1点突变）人源基因质粒 |
| P3639/pCMV-SPORT6-SLC47A1人源基因质粒 |
| P3640/pCMV-SPORT6-PRKCSH人源基因质粒 |
| P3641/pCMV-SPORT6-TM7SF2(1同义突变）人源基因质粒 |
| P3642/pCMV-SPORT6-SPAG16人源基因质粒 |
| P3643/pCMV-SPORT6-LMO4人源基因质粒 |
| P3644/pCMV-SPORT6-HVCN1人源基因质粒 |
| P3646/pCMV-SPORT6-EMP3人源基因质粒 |
| P3647/pCMV-SPORT6-FKBP7人源基因质粒 |
| P4894/pCMV-SPORT6-GALNT14（1同义突变）人源基因质粒 |
| P4895/pCMV-SPORT6-EIF4G2（1同义突变）人源基因质粒 |
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pCDNA3.1-GNE-Myc-His人源基因质粒
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