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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pBC-Hygro
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pBC-Hygro真菌表达质粒
别称: pBC-Hygro
质粒属性
质粒简介
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 6817 bp ds-DNA circular SYN 30-AUG-2016
DEFINITION synthetic circular DNA.
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS pBC-hygro
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 6817)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported 2016-02-20 from MiaoLingBio http://www.miaolingbio.com
REFERENCE 2 (bases 1 to 6817)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
REFERENCE 3 (bases 1 to 6817)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Tuesday, August 30, 2016 from SnapGene Viewer 3.1.4
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..6817
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
rep_origin complement(3..458)
/direction=LEFT
/note="f1 ori"
/note="f1 ori;f1 ori;f1 bacteriophage origin of
replication; arrow indicates direction of (+) strand
synthesis"
CDS complement(241..816)
/codon_start=1
/gene="lacZ fragment"
/product="LacZ-alpha fragment of beta-galactosidase"
/note="lacZ"
/note="lacZ fragment;lacZ-alpha"
/translation="MTMITPSAQLTLTKGNKSWSSTAVAAALELVDPPGCRNSISSLSI
PSTSRGGPVPNSPYSESYYARSLAVVLQRRDWENPGVTQLNRLAAHPPFASWRNSEEAR
TDRPSQQLRSLNGEWDAPCSGALSAAGVVVTRSVTATLASALAPAPFAFFPSFLATFAG
FPRQALNRGLPLGFRFSALRHLDPKKLD"
primer_bind 600..616
/note="M13 fwd"
/note="M13 fwd;M13 fwd;common sequencing primer, one of
multiple similar variants"
promoter 626..644
/note="T7 promoter"
/note="T7 promoter;T7 promoter;promoter for bacteriophage
T7 RNA polymerase"
misc_feature 653..760
/note="MCS"
/note="MCS;MCS;pBluescript multiple cloning site"
primer_bind 670..686
/note="KS primer"
/note="KS primer;KS primer;common sequencing primer, one of
multiple similar variants"
primer_bind complement(720..736)
/note="SK primer"
/note="SK primer;SK primer;common sequencing primer, one of
multiple similar variants"
promoter complement(773..791)
/note="T3 promoter"
/note="T3 promoter;T3 promoter;promoter for bacteriophage
T3 RNA polymerase"
primer_bind complement(812..828)
/note="M13 rev"
/note="M13 rev;M13 rev;common sequencing primer, one of
multiple similar variants"
protein_bind 836..852
/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="laco"
/note="lac repressor encoded by lacI lac operator;lac
operator;The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
promoter complement(860..890)
/note="lac promoter"
/note="lac promoter;lac promoter;promoter for the E. coli
lac operon"
protein_bind 905..926
/bound_moiety="E. coli catabolite activator protein"
/note="CAP"
/note="E. coli catabolite activator protein CAP bindin;CAP
binding site;CAP binding activates transcription in the
presence of cAMP."
rep_origin complement(1214..1802)
/direction=LEFT
/note="ori"
/note="ori;ori;high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC
origin of replication"
promoter 2022..2124
/note="cat promoter"
/note="cat promoter;cat promoter;promoter of the E. coli
cat gene encoding chloramphenicol acetyltransferase"
CDS 2125..2784
/codon_start=1
/gene="cat"
/product="chloramphenicol acetyltransferase"
/note="Chl"
/note="cat;CmR;confers resistance to chloramphenicol"
/translation="MEKKITGYTTVDISQWHRKEHFEAFQSVAQCTYNQTVQLDITAFL
KTVKKNKHKFYPAFIHILARLMNAHPELRMAMKDGELVIWDSVHPCYTVFHEQTETFSS
LWSEYHDDFRQFLHIYSQDVACYGENLAYFPKGFIENMFFVSANPWVSFTSFDLNVANM
DNFFAPVFTMGKYYTQGDKVLMPLAIQVHHAVCDGFHVGRMLNELQQYCDEWQGGA"
misc_feature 3732..4535
/note="CPC-1 Promoter"
CDS 4541..5566
/codon_start=1
/gene="aph(4)-Ia"
/product="aminoglycoside phosphotransferase from E. coli"
/note="aph"
/note="aph(4)-Ia;HygR;confers resistance to hygromycin"
/translation="MKKPELTATSVEKFLIEKFDSVSDLMQLSEGEESRAFSFDVGGRG
YVLRVNSCADGFYKDRYVYRHFASAALPIPEVLDIGEFSESLTYCISRRAQGVTLQDLP
ETELPAVLQPVAEAM-DAIAAADLSQTSGFGPFGPQGIGQYTTWRDFICAIADPHVYHWQ
TVMDDTVSASVAQALDELMLWAEDCPEVRHLVHADFGSNNVLTDNGRITAVIDWSEAMF
GDSQYEVANIFFWRPWLACMEQQTRYFERRHPELAGSPRLRAYMLRIGLDQLYQSLVDG
NFDDAAWAQGRCDAIVRSGAGTVGRTQIARRSAAVWTDGCVEVLADSGNRRPSTRPRAK
E"
misc_feature 5567..6501
/note="trpC Terminator"
promoter complement(6689..6794)
/gene="bla"
/note="bla bla AmpR promoter"
/note="bla AmpR promoter;AmpR promoter"
ORIGIN
1 ctaaattgta agcgttaata ttttgttaaa attcgcgtta aatttttgtt aaatcagctc
61 attttttaac caataggccg aaatcggcaa aatcccttat aaatcaaaag aatagaccga
121 gatagggttg agtgttgttc cagtttggaa caagagtcca ctattaaaga acgtggactc
181 caacgtcaaa gggcgaaaaa ccgtctatca gggcgatggc ccactacgtg aaccatcacc
241 ctaatcaagt tttttggggt cgaggtgccg taaagcacta aatcggaacc ctaaagggag
301 cccccgattt agagcttgac ggggaaagcc ggcgaacgtg gcgagaaagg aagggaagaa
361 agcgaaagga gcgggcgcta gggcgctggc aagtgtagcg gtcacgctgc gcgtaaccac
421 cacacccgcc gcgcttaatg cgccgctaca gggcgcgtcc cattcgccat tcaggctgcg
481 caactgttgg gaagggcgat cggtgcgggc ctcttcgcta ttacgccagc tggcgaaagg
541 gggatgtgct gcaaggcgat taagttgggt aacgccaggg ttttcccagt cacgacgttg
601 taaaacgacg gccagtgagc gcgcgtaata cgactcacta tagggcgaat tgggtaccgg
661 gccccccctc gaggtcgacg gtatcgataa gcttgatatc gaattcctgc agcccggggg
721 atccactagt tctagagcgg ccgccaccgc ggtggagctc cagcttttgt tccctttagt
781 gagggttaat tgcgcgcttg gcgtaatcat ggtcatagct gtttcctgtg tgaaattgtt
841 atccgctcac aattccacac aacatacgag ccggaagcat aaagtgtaaa gcctggggtg
901 cctaatgagt gagctaactc acattaattg cgttgcgctc actgcccgct ttccagtcgg
961 gaaacctgtc gtgccagctg cattaatgaa tcggccaacg cgcggggaga ggcggtttgc
1021 gtattgggcg ctcttccgct tcctcgctca ctgactcgct gcgctcggtc gttcggctgc
1081 ggcgagcggt atcagctcac tcaaaggcgg taatacggtt atccacagaa tcaggggata
1141 acgcaggaaa gaacatgtga gcaaaaggcc agcaaaaggc caggaaccgt aaaaaggccg
1201 cgttgctggc gtttttccat aggctccgcc cccctgacga gcatcacaaa aatcgacgct
1261 caagtcagag gtggcgaaac ccgacaggac tataaagata ccaggcgttt ccccctggaa
1321 gctccctcgt gcgctctcct gttccgaccc tgccgcttac cggatacctg tccgcctttc
1381 tcccttcggg aagcgtggcg ctttctcata gctcacgctg taggtatctc agttcggtgt
1441 aggtcgttcg ctccaagctg ggctgtgtgc acgaaccccc cgttcagccc gaccgctgcg
1501 ccttatccgg taactatcgt cttgagtcca acccggtaag acacgactta tcgccactgg
1561 cagcagccac tggtaacagg attagcagag cgaggtatgt aggcggtgct acagagttct
1621 tgaagtggtg gcctaactac ggctacacta gaaggacagt atttggtatc tgcgctctgc
1681 tgaagccagt taccttcgga aaaagagttg gtagctcttg atccggcaaa caaaccaccg
1741 ctggtagcgg tggttttttt gtttgcaagc agcagattac gcgcagaaaa aaaggatctc
1801 aagaagatcc tttgatcttt tctacggggt ctgacgctca gtggaacgaa aactcacgtt
1861 aagggatttt ggtcatgaga ttatcaaaaa ggatcttcac ctagatcctt ttcgaccgaa
1921 taaatacctg tgacggaaga tcacttcgca gaataaataa atcctggtgt ccctgttgat
1981 accgggaagc cctgggccaa cttttggcga aaatgagacg ttgatcggca cgtaagaggt
2041 tccaactttc accataatga aataagatca ctaccgggcg tattttttga gttgtcgaga
2101 ttttcaggag ctaaggaagc taaaatggag aaaaaaatca ctggatatac caccgttgat
2161 atatcccaat ggcatcgtaa agaacatttt gaggcatttc agtcagttgc tcaatgtacc
2221 tataaccaga ccgttcagct ggatattacg gcctttttaa agaccgtaaa gaaaaataag
2281 cacaagtttt atccggcctt tattcacatt cttgcccgcc tgatgaatgc tcatccggaa
2341 ttacgtatgg caatgaaaga cggtgagctg gtgatatggg atagtgttca cccttgttac
2401 accgttttcc atgagcaaac tgaaacgttt tcatcgctct ggagtgaata ccacgacgat
2461 ttccggcagt ttctacacat atattcgcaa gatgtggcgt gttacggtga aaacctggcc
2521 tatttcccta aagggtttat tgagaatatg tttttcgtct cagccaatcc ctgggtgagt
2581 ttcaccagtt ttgatttaaa cgtggccaat atggacaact tcttcgcccc cgttttcacc
2641 atgggcaaat attatacgca aggcgacaag gtgctgatgc cgctggcgat tcaggttcat
2701 catgccgttt gtgatggctt ccatgtcggc agaatgctta atgaattaca acagtactgc
2761 gatgagtggc agggcggggc gtaatttttt taaggcagtt attggtgccc ttaaacgcct
2821 ggttgctacg cctgaataag tgataataag cggatgaatg gcagaaattc gaaagcaaat
2881 tcgacccggt cgtcggttca gggcagggtc gttaaatagc cgcttatgtc tattgctggt
2941 ttaccggttt attgactacc ggaagcagtg tgaccgtgtg cttctcaaat gcctgaggcc
3001 agtttgctca ggctctcccc gtggaggtaa taattgacga tatgatcctt tttttctgat
3061 caaaagtgct catcattgga aaaccgagat gcgccgcgtg cggctgctgg agatggcgga
3121 cgcgatggat atgttctgcc aagggttggt ttgcgcattc acagttctcc gcaagaattg
3181 attggctcca attcttggag tggtgaatcc gttagcgagg tgccgccggc ttccattcag
3241 gtcgaggtgg cccggctcca tgcaccgcga cgcaacgcgg ggaggcagac aaggtatagg
3301 gcggcgccta caatccatgc caacccgttc catgtgctcg ccgaggcggc ataaatcgcc
3361 gtgacgatca gcggtccaat gatcgaagtt aggctggtaa gagccgcgag cgatccttga
3421 agctgtccct gatggtcgtc atctacctgc ctggacagca tggcctgcaa cgcgggcatc
3481 ccgatgccgc cggaagcgag aagaatcata atggggaagg ccatccagcc tcgcgtcgag
3541 ctttgaagtt gctgcaagct ggcttcaagc catcccatcc gaatgtgatg gatgcgttct
3601 ttctgggccg ttgcgacttt ggggatcgtc tttcccgcgc ccttggttgg aggccctgtc
3661 tccggtgtcc cttgtccctt ccaggcaagc gagcgaggtc cattcagatg gtgctccatc
3721 agcgttggct ttccgtctcc attggctctt ggcaattcgg tcagcggggc tgactgcctc
3781 aggtggggca gtgctagtgt gtgtaccgac ccgcaggatt ggtgctttgc ccagagctct
3841 acagaatagc gcgcgcatcc atatgttagt tctgcaattt tcttgtatcg gtgctgtgac
3901 tcatacttcc ccctttggct ggccttgcgg caaccaataa gaacgcacag tgaaatcttg
3961 cgggtgggga gtggatccat ggcgcctgca ttggcttggg gacgcgcact gtcgcacact
4021 tccatctgac ctttcagaag ggtttcgtgg tgggcaagga ccaaccggtt gcgcggccgt
4081 gcgtgggtgc ctcgcccggc actgccaggg ccactgcagt ggcagtttgc tgcctgatac
4141 aaaatccttc cctccgccca gttttccctc tttgaccttc ctttctcttc tctgcaacca
4201 aatccaccct atcaaaccaa aacagtatct cgaccgaggt atcaacctga atcagcaaca
4261 tcgtagccag catttgtctc cgtctctgca gaaccagcga gttgcaaaca ttatccaggc
4321 aacagggcac caactcactt cttcggcttt caccaatcgg tacagctctt ctcagaactc
4381 gcgtccgcaa cagttctacg cttcctcagc accttcttca gcttcaatcc tgaacactca
4441 gaaccgcgca cagcagcgcc ctcctgttcc cttgtttccc aaaagtaccg gtagtatttc
4501 gcacggaaag cagggcaaca agatgttctc aggtacccat atgaaaaagc ctgaactcac
4561 cgcgacgtct gtcgagaagt ttctgatcga aaagttcgac agcgtctccg acctgatgca
4621 gctctcggag ggcgaagaat ctcgtgcttt cagcttcgat gtaggagggc gtggatatgt
4681 cctgcgggta aatagctgcg ccgatggttt ctacaaagat cgttatgttt atcggcactt
4741 tgcatcggcc gcgctcccga ttccggaagt gcttgacatt ggggaattca gcgagagcct
4801 gacctattgc atctcccgcc gtgcacaggg tgtcacgttg caagacctgc ctgaaaccga
4861 actgcccgct gttctgcagc cggtcgcgga ggccatggat gcgatcgctg cggccgatct
4921 tagccagacg agcgggttcg gcccattcgg accgcaagga atcggtcaat acactacatg
4981 gcgtgatttc atatgcgcga ttgctgatcc ccatgtgtat cactggcaaa ctgtgatgga
5041 cgacaccgtc agtgcgtccg tcgcgcaggc tctcgatgag ctgatgcttt gggccgagga
5101 ctgccccgaa gtccggcacc tcgtgcacgc ggatttcggc tccaacaatg tcctgacgga
5161 caatggccgc ataacagcgg tcattgactg gagcgaggcg atgttcgggg attcccaata
5221 cgaggtcgcc aacatcttct tctggaggcc gtggttggct tgtatggagc agcagacgcg
5281 ctacttcgag cggaggcatc cggagcttgc aggatcgccg cggctccggg cgtatatgct
5341 ccgcattggt cttgaccaac tctatcagag cttggttgac ggcaatttcg atgatgcagc
5401 ttgggcgcag ggtcgatgcg acgcaatcgt ccgatccgga gccgggactg tcgggcgtac
5461 acaaatcgcc cgcagaagcg cggccgtctg gaccgatggc tgtgtagaag tactcgccga
5521 tagtggaaac cgacgcccca gcactcgtcc gagggcaaag gaatagagta gatgccgacc
5581 gggatccact taacgttact gaaatcatca aacagcttga cgaatctgga tataagatcg
5641 ttggtgtcga tgtcagctcc ggagttgaga caaatggtgt tcaggatctc gataagatac
5701 gttcatttgt ccaagcagca aagagtgcct tctagtgatt taatagctcc atgtcaacaa
5761 gaataaaacg cgtttcgggt ttacctcttc cagatacagc tcatctgcaa tgcattaatg
5821 cattggacct cgcaacccta gtacgccctt caggctccgg cgaagcagaa gaatagctta
5881 gcagagtcta ttttcatttt cgggagacga gatcaagcag atcaacggtc gtcaagagac
5941 ctacgagact gaggaatccg ctcttggctc cacgcgacta tatatttgtc tctaattgta
6001 ctttgacatg ctcctcttct ttactctgat agcttgacta tgaaaattcc gtcaccagcc
6061 cctgggttcg caaagataat tgcactgttt cttccttgaa ctctcaagcc tacaggacac
6121 acattcatcg taggtataaa cctcgaaaat cattcctact aagatgggta tacaatagta
6181 accatggttg cctagtgaat gctccgtaac acccaatacg ccggccgaaa cttttttaca
6241 actctcctat gagtcgttta cccagaatgc acaggtacac ttgtttagag gtaatccttc
6301 tttctagcta gaggatcctc tacgccggac gcatcgtggc cggcatcacc ggcgccacag
6361 gtgcggttgc tggcgcctat atcgccgaca tcaccgatgg ggaagatcgg gctcgccact
6421 tcgggctcat gagcgcttgt ttcggcgtgg gtatggtggc aggccccgtg gccgggggac
6481 tgttgggcgc catctccttg cgttcttcgg ggcgaaaact ctcaaggatc ttaccgctgt
6541 tgagatccag ttcgatgtaa cccactcgtg cacccaactg atcttcagca tcttttactt
6601 tcaccagcgt ttctgggtga gcaaaaacag gaaggcaaaa tgccgcaaaa aagggaataa
6661 gggcgacacg gaaatgttga atactcatac tcttcctttt tcaatattat tgaagcattt
6721 atcaagggtt attgtctcat gagcggatac atatttgaat gtatttagaa aaataaacaa
6781 ataggggttc cgcgcacatt tccccgaaaa gtgccac
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pBC-Hygro真菌表达质粒
别称: pBC-Hygro
| 启动子: | cpc1 |
|---|---|
| 复制子: | pUC |
| 终止子: | trpC |
| 质粒分类: | 其他宿主穿梭载体；丝状真菌表达质粒 |
| 质粒大小: | 6817bp |
| 质粒标签: | LacZ |
| 原核抗性: | Chl |
| 筛选标记: | Hyg |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
| 表达宿主: | 丝状真菌 |
| 5'测序引物: | M13F：TGTAAAACGACGGCCAGT |
| 3'测序引物: | M13R：CAGGAAACAGCTATGACC |
质粒属性
| 载体宿主： | 丝状真菌 |
|---|---|
| 载体用途： | 蛋白表达 |
| 基因种属： | |
| 基因类型： | ORF |
| 原核抗性： | Chl |
| 筛选标记： | Hyg |
| 荧光蛋白： |
质粒简介
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 6817 bp ds-DNA circular SYN 30-AUG-2016
DEFINITION synthetic circular DNA.
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS pBC-hygro
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 6817)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported 2016-02-20 from MiaoLingBio http://www.miaolingbio.com
REFERENCE 2 (bases 1 to 6817)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
REFERENCE 3 (bases 1 to 6817)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Tuesday, August 30, 2016 from SnapGene Viewer 3.1.4
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..6817
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
rep_origin complement(3..458)
/direction=LEFT
/note="f1 ori"
/note="f1 ori;f1 ori;f1 bacteriophage origin of
replication; arrow indicates direction of (+) strand
synthesis"
CDS complement(241..816)
/codon_start=1
/gene="lacZ fragment"
/product="LacZ-alpha fragment of beta-galactosidase"
/note="lacZ"
/note="lacZ fragment;lacZ-alpha"
/translation="MTMITPSAQLTLTKGNKSWSSTAVAAALELVDPPGCRNSISSLSI
PSTSRGGPVPNSPYSESYYARSLAVVLQRRDWENPGVTQLNRLAAHPPFASWRNSEEAR
TDRPSQQLRSLNGEWDAPCSGALSAAGVVVTRSVTATLASALAPAPFAFFPSFLATFAG
FPRQALNRGLPLGFRFSALRHLDPKKLD"
primer_bind 600..616
/note="M13 fwd"
/note="M13 fwd;M13 fwd;common sequencing primer, one of
multiple similar variants"
promoter 626..644
/note="T7 promoter"
/note="T7 promoter;T7 promoter;promoter for bacteriophage
T7 RNA polymerase"
misc_feature 653..760
/note="MCS"
/note="MCS;MCS;pBluescript multiple cloning site"
primer_bind 670..686
/note="KS primer"
/note="KS primer;KS primer;common sequencing primer, one of
multiple similar variants"
primer_bind complement(720..736)
/note="SK primer"
/note="SK primer;SK primer;common sequencing primer, one of
multiple similar variants"
promoter complement(773..791)
/note="T3 promoter"
/note="T3 promoter;T3 promoter;promoter for bacteriophage
T3 RNA polymerase"
primer_bind complement(812..828)
/note="M13 rev"
/note="M13 rev;M13 rev;common sequencing primer, one of
multiple similar variants"
protein_bind 836..852
/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="laco"
/note="lac repressor encoded by lacI lac operator;lac
operator;The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
promoter complement(860..890)
/note="lac promoter"
/note="lac promoter;lac promoter;promoter for the E. coli
lac operon"
protein_bind 905..926
/bound_moiety="E. coli catabolite activator protein"
/note="CAP"
/note="E. coli catabolite activator protein CAP bindin;CAP
binding site;CAP binding activates transcription in the
presence of cAMP."
rep_origin complement(1214..1802)
/direction=LEFT
/note="ori"
/note="ori;ori;high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC
origin of replication"
promoter 2022..2124
/note="cat promoter"
/note="cat promoter;cat promoter;promoter of the E. coli
cat gene encoding chloramphenicol acetyltransferase"
CDS 2125..2784
/codon_start=1
/gene="cat"
/product="chloramphenicol acetyltransferase"
/note="Chl"
/note="cat;CmR;confers resistance to chloramphenicol"
/translation="MEKKITGYTTVDISQWHRKEHFEAFQSVAQCTYNQTVQLDITAFL
KTVKKNKHKFYPAFIHILARLMNAHPELRMAMKDGELVIWDSVHPCYTVFHEQTETFSS
LWSEYHDDFRQFLHIYSQDVACYGENLAYFPKGFIENMFFVSANPWVSFTSFDLNVANM
DNFFAPVFTMGKYYTQGDKVLMPLAIQVHHAVCDGFHVGRMLNELQQYCDEWQGGA"
misc_feature 3732..4535
/note="CPC-1 Promoter"
CDS 4541..5566
/codon_start=1
/gene="aph(4)-Ia"
/product="aminoglycoside phosphotransferase from E. coli"
/note="aph"
/note="aph(4)-Ia;HygR;confers resistance to hygromycin"
/translation="MKKPELTATSVEKFLIEKFDSVSDLMQLSEGEESRAFSFDVGGRG
YVLRVNSCADGFYKDRYVYRHFASAALPIPEVLDIGEFSESLTYCISRRAQGVTLQDLP
ETELPAVLQPVAEAM-DAIAAADLSQTSGFGPFGPQGIGQYTTWRDFICAIADPHVYHWQ
TVMDDTVSASVAQALDELMLWAEDCPEVRHLVHADFGSNNVLTDNGRITAVIDWSEAMF
GDSQYEVANIFFWRPWLACMEQQTRYFERRHPELAGSPRLRAYMLRIGLDQLYQSLVDG
NFDDAAWAQGRCDAIVRSGAGTVGRTQIARRSAAVWTDGCVEVLADSGNRRPSTRPRAK
E"
misc_feature 5567..6501
/note="trpC Terminator"
promoter complement(6689..6794)
/gene="bla"
/note="bla bla AmpR promoter"
/note="bla AmpR promoter;AmpR promoter"
ORIGIN
1 ctaaattgta agcgttaata ttttgttaaa attcgcgtta aatttttgtt aaatcagctc
61 attttttaac caataggccg aaatcggcaa aatcccttat aaatcaaaag aatagaccga
121 gatagggttg agtgttgttc cagtttggaa caagagtcca ctattaaaga acgtggactc
181 caacgtcaaa gggcgaaaaa ccgtctatca gggcgatggc ccactacgtg aaccatcacc
241 ctaatcaagt tttttggggt cgaggtgccg taaagcacta aatcggaacc ctaaagggag
301 cccccgattt agagcttgac ggggaaagcc ggcgaacgtg gcgagaaagg aagggaagaa
361 agcgaaagga gcgggcgcta gggcgctggc aagtgtagcg gtcacgctgc gcgtaaccac
421 cacacccgcc gcgcttaatg cgccgctaca gggcgcgtcc cattcgccat tcaggctgcg
481 caactgttgg gaagggcgat cggtgcgggc ctcttcgcta ttacgccagc tggcgaaagg
541 gggatgtgct gcaaggcgat taagttgggt aacgccaggg ttttcccagt cacgacgttg
601 taaaacgacg gccagtgagc gcgcgtaata cgactcacta tagggcgaat tgggtaccgg
661 gccccccctc gaggtcgacg gtatcgataa gcttgatatc gaattcctgc agcccggggg
721 atccactagt tctagagcgg ccgccaccgc ggtggagctc cagcttttgt tccctttagt
781 gagggttaat tgcgcgcttg gcgtaatcat ggtcatagct gtttcctgtg tgaaattgtt
841 atccgctcac aattccacac aacatacgag ccggaagcat aaagtgtaaa gcctggggtg
901 cctaatgagt gagctaactc acattaattg cgttgcgctc actgcccgct ttccagtcgg
961 gaaacctgtc gtgccagctg cattaatgaa tcggccaacg cgcggggaga ggcggtttgc
1021 gtattgggcg ctcttccgct tcctcgctca ctgactcgct gcgctcggtc gttcggctgc
1081 ggcgagcggt atcagctcac tcaaaggcgg taatacggtt atccacagaa tcaggggata
1141 acgcaggaaa gaacatgtga gcaaaaggcc agcaaaaggc caggaaccgt aaaaaggccg
1201 cgttgctggc gtttttccat aggctccgcc cccctgacga gcatcacaaa aatcgacgct
1261 caagtcagag gtggcgaaac ccgacaggac tataaagata ccaggcgttt ccccctggaa
1321 gctccctcgt gcgctctcct gttccgaccc tgccgcttac cggatacctg tccgcctttc
1381 tcccttcggg aagcgtggcg ctttctcata gctcacgctg taggtatctc agttcggtgt
1441 aggtcgttcg ctccaagctg ggctgtgtgc acgaaccccc cgttcagccc gaccgctgcg
1501 ccttatccgg taactatcgt cttgagtcca acccggtaag acacgactta tcgccactgg
1561 cagcagccac tggtaacagg attagcagag cgaggtatgt aggcggtgct acagagttct
1621 tgaagtggtg gcctaactac ggctacacta gaaggacagt atttggtatc tgcgctctgc
1681 tgaagccagt taccttcgga aaaagagttg gtagctcttg atccggcaaa caaaccaccg
1741 ctggtagcgg tggttttttt gtttgcaagc agcagattac gcgcagaaaa aaaggatctc
1801 aagaagatcc tttgatcttt tctacggggt ctgacgctca gtggaacgaa aactcacgtt
1861 aagggatttt ggtcatgaga ttatcaaaaa ggatcttcac ctagatcctt ttcgaccgaa
1921 taaatacctg tgacggaaga tcacttcgca gaataaataa atcctggtgt ccctgttgat
1981 accgggaagc cctgggccaa cttttggcga aaatgagacg ttgatcggca cgtaagaggt
2041 tccaactttc accataatga aataagatca ctaccgggcg tattttttga gttgtcgaga
2101 ttttcaggag ctaaggaagc taaaatggag aaaaaaatca ctggatatac caccgttgat
2161 atatcccaat ggcatcgtaa agaacatttt gaggcatttc agtcagttgc tcaatgtacc
2221 tataaccaga ccgttcagct ggatattacg gcctttttaa agaccgtaaa gaaaaataag
2281 cacaagtttt atccggcctt tattcacatt cttgcccgcc tgatgaatgc tcatccggaa
2341 ttacgtatgg caatgaaaga cggtgagctg gtgatatggg atagtgttca cccttgttac
2401 accgttttcc atgagcaaac tgaaacgttt tcatcgctct ggagtgaata ccacgacgat
2461 ttccggcagt ttctacacat atattcgcaa gatgtggcgt gttacggtga aaacctggcc
2521 tatttcccta aagggtttat tgagaatatg tttttcgtct cagccaatcc ctgggtgagt
2581 ttcaccagtt ttgatttaaa cgtggccaat atggacaact tcttcgcccc cgttttcacc
2641 atgggcaaat attatacgca aggcgacaag gtgctgatgc cgctggcgat tcaggttcat
2701 catgccgttt gtgatggctt ccatgtcggc agaatgctta atgaattaca acagtactgc
2761 gatgagtggc agggcggggc gtaatttttt taaggcagtt attggtgccc ttaaacgcct
2821 ggttgctacg cctgaataag tgataataag cggatgaatg gcagaaattc gaaagcaaat
2881 tcgacccggt cgtcggttca gggcagggtc gttaaatagc cgcttatgtc tattgctggt
2941 ttaccggttt attgactacc ggaagcagtg tgaccgtgtg cttctcaaat gcctgaggcc
3001 agtttgctca ggctctcccc gtggaggtaa taattgacga tatgatcctt tttttctgat
3061 caaaagtgct catcattgga aaaccgagat gcgccgcgtg cggctgctgg agatggcgga
3121 cgcgatggat atgttctgcc aagggttggt ttgcgcattc acagttctcc gcaagaattg
3181 attggctcca attcttggag tggtgaatcc gttagcgagg tgccgccggc ttccattcag
3241 gtcgaggtgg cccggctcca tgcaccgcga cgcaacgcgg ggaggcagac aaggtatagg
3301 gcggcgccta caatccatgc caacccgttc catgtgctcg ccgaggcggc ataaatcgcc
3361 gtgacgatca gcggtccaat gatcgaagtt aggctggtaa gagccgcgag cgatccttga
3421 agctgtccct gatggtcgtc atctacctgc ctggacagca tggcctgcaa cgcgggcatc
3481 ccgatgccgc cggaagcgag aagaatcata atggggaagg ccatccagcc tcgcgtcgag
3541 ctttgaagtt gctgcaagct ggcttcaagc catcccatcc gaatgtgatg gatgcgttct
3601 ttctgggccg ttgcgacttt ggggatcgtc tttcccgcgc ccttggttgg aggccctgtc
3661 tccggtgtcc cttgtccctt ccaggcaagc gagcgaggtc cattcagatg gtgctccatc
3721 agcgttggct ttccgtctcc attggctctt ggcaattcgg tcagcggggc tgactgcctc
3781 aggtggggca gtgctagtgt gtgtaccgac ccgcaggatt ggtgctttgc ccagagctct
3841 acagaatagc gcgcgcatcc atatgttagt tctgcaattt tcttgtatcg gtgctgtgac
3901 tcatacttcc ccctttggct ggccttgcgg caaccaataa gaacgcacag tgaaatcttg
3961 cgggtgggga gtggatccat ggcgcctgca ttggcttggg gacgcgcact gtcgcacact
4021 tccatctgac ctttcagaag ggtttcgtgg tgggcaagga ccaaccggtt gcgcggccgt
4081 gcgtgggtgc ctcgcccggc actgccaggg ccactgcagt ggcagtttgc tgcctgatac
4141 aaaatccttc cctccgccca gttttccctc tttgaccttc ctttctcttc tctgcaacca
4201 aatccaccct atcaaaccaa aacagtatct cgaccgaggt atcaacctga atcagcaaca
4261 tcgtagccag catttgtctc cgtctctgca gaaccagcga gttgcaaaca ttatccaggc
4321 aacagggcac caactcactt cttcggcttt caccaatcgg tacagctctt ctcagaactc
4381 gcgtccgcaa cagttctacg cttcctcagc accttcttca gcttcaatcc tgaacactca
4441 gaaccgcgca cagcagcgcc ctcctgttcc cttgtttccc aaaagtaccg gtagtatttc
4501 gcacggaaag cagggcaaca agatgttctc aggtacccat atgaaaaagc ctgaactcac
4561 cgcgacgtct gtcgagaagt ttctgatcga aaagttcgac agcgtctccg acctgatgca
4621 gctctcggag ggcgaagaat ctcgtgcttt cagcttcgat gtaggagggc gtggatatgt
4681 cctgcgggta aatagctgcg ccgatggttt ctacaaagat cgttatgttt atcggcactt
4741 tgcatcggcc gcgctcccga ttccggaagt gcttgacatt ggggaattca gcgagagcct
4801 gacctattgc atctcccgcc gtgcacaggg tgtcacgttg caagacctgc ctgaaaccga
4861 actgcccgct gttctgcagc cggtcgcgga ggccatggat gcgatcgctg cggccgatct
4921 tagccagacg agcgggttcg gcccattcgg accgcaagga atcggtcaat acactacatg
4981 gcgtgatttc atatgcgcga ttgctgatcc ccatgtgtat cactggcaaa ctgtgatgga
5041 cgacaccgtc agtgcgtccg tcgcgcaggc tctcgatgag ctgatgcttt gggccgagga
5101 ctgccccgaa gtccggcacc tcgtgcacgc ggatttcggc tccaacaatg tcctgacgga
5161 caatggccgc ataacagcgg tcattgactg gagcgaggcg atgttcgggg attcccaata
5221 cgaggtcgcc aacatcttct tctggaggcc gtggttggct tgtatggagc agcagacgcg
5281 ctacttcgag cggaggcatc cggagcttgc aggatcgccg cggctccggg cgtatatgct
5341 ccgcattggt cttgaccaac tctatcagag cttggttgac ggcaatttcg atgatgcagc
5401 ttgggcgcag ggtcgatgcg acgcaatcgt ccgatccgga gccgggactg tcgggcgtac
5461 acaaatcgcc cgcagaagcg cggccgtctg gaccgatggc tgtgtagaag tactcgccga
5521 tagtggaaac cgacgcccca gcactcgtcc gagggcaaag gaatagagta gatgccgacc
5581 gggatccact taacgttact gaaatcatca aacagcttga cgaatctgga tataagatcg
5641 ttggtgtcga tgtcagctcc ggagttgaga caaatggtgt tcaggatctc gataagatac
5701 gttcatttgt ccaagcagca aagagtgcct tctagtgatt taatagctcc atgtcaacaa
5761 gaataaaacg cgtttcgggt ttacctcttc cagatacagc tcatctgcaa tgcattaatg
5821 cattggacct cgcaacccta gtacgccctt caggctccgg cgaagcagaa gaatagctta
5881 gcagagtcta ttttcatttt cgggagacga gatcaagcag atcaacggtc gtcaagagac
5941 ctacgagact gaggaatccg ctcttggctc cacgcgacta tatatttgtc tctaattgta
6001 ctttgacatg ctcctcttct ttactctgat agcttgacta tgaaaattcc gtcaccagcc
6061 cctgggttcg caaagataat tgcactgttt cttccttgaa ctctcaagcc tacaggacac
6121 acattcatcg taggtataaa cctcgaaaat cattcctact aagatgggta tacaatagta
6181 accatggttg cctagtgaat gctccgtaac acccaatacg ccggccgaaa cttttttaca
6241 actctcctat gagtcgttta cccagaatgc acaggtacac ttgtttagag gtaatccttc
6301 tttctagcta gaggatcctc tacgccggac gcatcgtggc cggcatcacc ggcgccacag
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6421 tcgggctcat gagcgcttgt ttcggcgtgg gtatggtggc aggccccgtg gccgggggac
6481 tgttgggcgc catctccttg cgttcttcgg ggcgaaaact ctcaaggatc ttaccgctgt
6541 tgagatccag ttcgatgtaa cccactcgtg cacccaactg atcttcagca tcttttactt
6601 tcaccagcgt ttctgggtga gcaaaaacag gaaggcaaaa tgccgcaaaa aagggaataa
6661 gggcgacacg gaaatgttga atactcatac tcttcctttt tcaatattat tgaagcattt
6721 atcaagggtt attgtctcat gagcggatac atatttgaat gtatttagaa aaataaacaa
6781 ataggggttc cgcgcacatt tccccgaaaa gtgccac
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P0622/pCMV6-XL4-SGLT2人源基因质粒 |
| P0529/pEGFP-IL13人源基因质粒 |
| P0530/pEGFP-TNF人源基因质粒 |
| P0532/pEGFP-IL4人源基因质粒 |
| P0594/pEGFP-IL6人源基因质粒 |
| P0626/pEGFP-CCL2人源基因质粒 |
| P0627/pEGFP-IL8人源基因质粒 |
| P0638/pEGFP-Linker-IL17A人源基因质粒 |
| P0640/pEGFP-CXCL1人源基因质粒 |
| P0641/pEGFP-TGFB1人源基因质粒 |
| P0613/pEGFP-MD2①人源基因质粒 |
风险提示：丁香通仅作为第三方平台，为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全，合理判断，谨慎选购商品，商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品，请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
文献和实验相关实验
shRNAs(short hairpin RNAs)在哺乳动物细胞中引发的基因沉默
(double-stranded RNA)诱导的基因沉默广泛存在于各种物种当中,包括植物、真菌、昆虫、原生动物以及真核生物等[1] 。通过研究小片段干扰RNAs(siRNAs)和表达后的shRNAs在哺乳动物细胞中的作用，研究人员发现人或鼠基因组的任何基因都能成为dsRNAs诱导基因沉默的靶向基因。因此，RNAi很快成为哺乳动物细胞体系研究的标准实验技术。 我们和其他一些实验室构建了用于哺乳动物细胞产生小片段dsRNA的体内表达载体,类似于内源表达的hairpin RNAs[2]。在试验中
pBAD24 大肠杆菌质粒 pLAFR-3 大肠杆菌质粒 Tet 不需要诱导，组成性表达质粒，大质粒，不能用试剂盒提取 pT-GroE 大肠杆菌质粒 Chl 伴侣分子 T载体 大肠
Luciferase 报告基因技术 自然界中广泛分布着生物发光有机体，其中包括细菌、真菌、鱼、昆虫等。 在这些生物发光有机体中催化生物发光反应的各种酶都称之为荧光素酶 （Luciferases），底物则命名为荧光素（Luciferin）。自1986― 1987 年首次被当作 报告基因使用以来，荧光素酶基因已成为目前运用最广泛的报告基因之一。尽管 来自不同物种的荧光素酶及底物存在有很大的差异，但有一个共同点，即在生物 发光反应体系中均需发生氧化反应。它通过两个步骤
pBC-Hygro真菌表达质粒
￥100 - 1000
