- ￥100 - 1000
- Xybio
- 上海
- P0408
- 2025年07月16日
9 年钻石会员
企业认证
相关产品推荐更多 >
万千商家帮你免费找货
0 人在求购买到急需产品
- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pGL4.73[hRluc-SV40]
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pGL4.73[hRluc /SV40]哺乳报告质粒
别称: pGL4.73[hRluc-SV40]
质粒属性
质粒简介
The pGL4.73[hRluc/SV40] Vector encodes the luciferase reporter gene hRluc (Renilla reniformis) and is designed for high expression and reduced anomalous transcription. The pGL4 Vectors are engineered with fewer consensus regulatory sequences and a synthetic gene, which has been codon optimized for mammalian expression.The pGL4.73[hRluc/SV40] Vector contains the hRluc reporter gene and an SV40 early enhancer/promoter and can be used as an expression control or a co-reporter vector.
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 3921 bp ds-DNA circular SYN 26-JUL-2013
DEFINITION SV40 promoter-containing internal control vector for strong
constitutive expression of Renilla luciferase.
ACCESSION AY738229
VERSION .
KEYWORDS pGL4.73[hRluc SV40]
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 3921)
AUTHORS Promega
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Sunday, September 4, 2016 from SnapGene Viewer 3.1.4
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..3921
/organism="synthetic DNA construct"
/lab_host="Mammalian Cells"
/mol_type="other DNA"
promoter 106..463
/note="SV40 promoter"
/note="SV40 enhancer and early promoter"
rep_origin 314..449
/note="SV40 ori"
/note="SV40 origin of replication"
CDS 499..1434
/codon_start=1
/product="Renilla luciferase"
/note="hRluc"
/note="human codon-optimized"
/translation="MASKVYDPEQRKRMITGPQWWARCKQMNVLDSFINYYDSEKHAEN
AVIFLHGNAASSYLWRHVVPHIEPVARCIIPDLIGMGKSGKSGNGSYRLLDHYKYLTAW
FELLNLPKKIIFVGHDWGACLAFHYSYEHQDKIKAIVHAESVVDVIESWDEWPDIEEDI
ALIKSEEGEKMVLENNFFVETMLPSKIMRKLEPEEFAAYLEPFKEKGEVRRPTLSWPRE
IPLVKGGKPDVVQIVRNYNAYLRASDDLPKMFIESDPGFFSNAIVEGAKKFPNTEFVKV
KGLHFSQEDAPDEMGKYIKSFVERVLKNEQ"
polyA_signal 1475..1596
/note="SV40 poly(A) signal"
/note="SV40 polyadenylation signal"
rep_origin complement(2015..2603)
/direction=LEFT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(2803..3663)
/codon_start=1
/product="beta-lactamase"
/note="AmpR"
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
polyA_signal 3768..3816
/note="synthetic polyadenylation signal"
misc_feature 3830..3921
/note="pause site"
/note="RNA polymerase II transcriptional pause signal from
the human alpha-2 globin gene"
ORIGIN
1 ggcctaactg gccggtacct gagctcgcta gcctcgagga tatcagatct gcgcagcacc
61 atggcctgaa ataacctctg aaagaggaac ttggttaggt accttctgag gcggaaagaa
121 ccagctgtgg aatgtgtgtc agttagggtg tggaaagtcc ccaggctccc cagcaggcag
181 aagtatgcaa agcatgcatc tcaattagtc agcaaccagg tgtggaaagt ccccaggctc
241 cccagcaggc agaagtatgc aaagcatgca tctcaattag tcagcaacca tagtcccgcc
301 cctaactccg cccatcccgc ccctaactcc gcccagttcc gcccattctc cgccccatgg
361 ctgactaatt ttttttattt atgcagaggc cgaggccgcc tcggcctctg agctattcca
421 gaagtagtga ggaggctttt ttggaggcct aggcttttgc aaaaagcttg gcaatccggt
481 actgttggta aagccaccat ggcttccaag gtgtacgacc ccgagcaacg caaacgcatg
541 atcactgggc ctcagtggtg ggctcgctgc aagcaaatga acgtgctgga ctccttcatc
601 aactactatg attccgagaa gcacgccgag aacgccgtga tttttctgca tggtaacgct
661 gcctccagct acctgtggag gcacgtcgtg cctcacatcg agcccgtggc tagatgcatc
721 atccctgatc tgatcggaat gggtaagtcc ggcaagagcg ggaatggctc atatcgcctc
781 ctggatcact acaagtacct caccgcttgg ttcgagctgc tgaaccttcc aaagaaaatc
841 atctttgtgg gccacgactg gggggcttgt ctggcctttc actactccta cgagcaccaa
901 gacaagatca aggccatcgt ccatgctgag agtgtcgtgg acgtgatcga gtcctgggac
961 gagtggcctg acatcgagga ggatatcgcc ctgatcaaga gcgaagaggg cgagaaaatg
1021 gtgcttgaga ataacttctt cgtcgagacc atgctcccaa gcaagatcat gcggaaactg
1081 gagcctgagg agttcgctgc ctacctggag ccattcaagg agaagggcga ggttagacgg
1141 cctaccctct cctggcctcg cgagatccct ctcgttaagg gaggcaagcc cgacgtcgtc
1201 cagattgtcc gcaactacaa cgcctacctt cgggccagcg acgatctgcc taagatgttc
1261 atcgagtccg accctgggtt cttttccaac gctattgtcg agggagctaa gaagttccct
1321 aacaccgagt tcgtgaaggt gaagggcctc cacttcagcc aggaggacgc tccagatgaa
1381 atgggtaagt acatcaagag cttcgtggag cgcgtgctga agaacgagca gtaattctag
1441 agtcggggcg gccggccgct tcgagcagac atgataagat acattgatga gtttggacaa
1501 accacaacta gaatgcagtg aaaaaaatgc tttatttgtg aaatttgtga tgctattgct
1561 ttatttgtaa ccattataag ctgcaataaa caagttaaca acaacaattg cattcatttt
1621 atgtttcagg ttcaggggga ggtgtgggag gttttttaaa gcaagtaaaa cctctacaaa
1681 tgtggtaaaa tcgataagga tccgtcgacc gatgcccttg agagccttca acccagtcag
1741 ctccttccgg tgggcgcggg gcatgactat cgtcgccgca cttatgactg tcttctttat
1801 catgcaactc gtaggacagg tgccggcagc gctcttccgc ttcctcgctc actgactcgc
1861 tgcgctcggt cgttcggctg cggcgagcgg tatcagctca ctcaaaggcg gtaatacggt
1921 tatccacaga atcaggggat aacgcaggaa agaacatgtg agcaaaaggc cagcaaaagg
1981 ccaggaaccg taaaaaggcc gcgttgctgg cgtttttcca taggctccgc ccccctgacg
2041 agcatcacaa aaatcgacgc tcaagtcaga ggtggcgaaa cccgacagga ctataaagat
2101 accaggcgtt tccccctgga agctccctcg tgcgctctcc tgttccgacc ctgccgctta
2161 ccggatacct gtccgccttt ctcccttcgg gaagcgtggc gctttctcat agctcacgct
2221 gtaggtatct cagttcggtg taggtcgttc gctccaagct gggctgtgtg cacgaacccc
2281 ccgttcagcc cgaccgctgc gccttatccg gtaactatcg tcttgagtcc aacccggtaa
2341 gacacgactt atcgccactg gcagcagcca ctggtaacag gattagcaga gcgaggtatg
2401 taggcggtgc tacagagttc ttgaagtggt ggcctaacta cggctacact agaagaacag
2461 tatttggtat ctgcgctctg ctgaagccag ttaccttcgg aaaaagagtt ggtagctctt
2521 gatccggcaa acaaaccacc gctggtagcg gtggtttttt tgtttgcaag cagcagatta
2581 cgcgcagaaa aaaaggatct caagaagatc ctttgatctt ttctacgggg tctgacgctc
2641 agtggaacga aaactcacgt taagggattt tggtcatgag attatcaaaa aggatcttca
2701 cctagatcct tttaaattaa aaatgaagtt ttaaatcaat ctaaagtata tatgagtaaa
2761 cttggtctga cagcggccgc aaatgctaaa ccactgcagt ggttaccagt gcttgatcag
2821 tgaggcaccg atctcagcga tctgcctatt tcgttcgtcc atagtggcct gactccccgt
2881 cgtgtagatc actacgattc gtgagggctt accatcaggc cccagcgcag caatgatgcc
2941 gcgagagccg cgttcaccgg cccccgattt gtcagcaatg aaccagccag cagggagggc
3001 cgagcgaaga agtggtcctg ctactttgtc cgcctccatc cagtctatga gctgctgtcg
3061 tgatgctaga gtaagaagtt cgccagtgag tagtttccga agagttgtgg ccattgctac
3121 tggcatcgtg gtatcacgct cgtcgttcgg tatggcttcg ttcaactctg gttcccagcg
3181 gtcaagccgg gtcacatgat cacccatatt atgaagaaat gcagtcagct ccttagggcc
3241 tccgatcgtt gtcagaagta agttggccgc ggtgttgtcg ctcatggtaa tggcagcact
3301 acacaattct cttaccgtca tgccatccgt aagatgcttt tccgtgaccg gcgagtactc
3361 aaccaagtcg ttttgtgagt agtgtatacg gcgaccaagc tgctcttgcc cggcgtctat
3421 acgggacaac accgcgccac atagcagtac tttgaaagtg ctcatcatcg ggaatcgttc
3481 ttcggggcgg aaagactcaa ggatcttgcc gctattgaga tccagttcga tatagcccac
3541 tcttgcaccc agttgatctt cagcatcttt tactttcacc agcgtttcgg ggtgtgcaaa
3601 aacaggcaag caaaatgccg caaagaaggg aatgagtgcg acacgaaaat gttggatgct
3661 catactcgtc ctttttcaat attattgaag catttatcag ggttactagt acgtctctca
3721 aggataagta agtaatatta aggtacggga ggtattggac aggccgcaat aaaatatctt
3781 tattttcatt acatctgtgt gttggttttt tgtgtgaatc gatagtacta acatacgctc
3841 tccatcaaaa caaaacgaaa caaaacaaac tagcaaaata ggctgtcccc agtgcaagtg
3901 caggtgccag aacatttctc t
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pGL4.73[hRluc /SV40]哺乳报告质粒
别称: pGL4.73[hRluc-SV40]
| 启动子: | SV40 |
|---|---|
| 复制子: | pUC |
| 终止子: | SV40 poly(A) signal |
| 质粒分类: | 哺乳细胞，信号通路报告载体 |
| 质粒大小: | 3921bp |
| 原核抗性: | Amp |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
| 表达宿主: | 哺乳细胞 |
| 诱导方式: | 无须诱导，瞬时表达 |
| 5'测序引物: | RVP3:CTAGCAAAATAGGCTGTCCC |
| 3'测序引物: | 根据序列设计引物 |
质粒属性
| 载体宿主： | 哺乳细胞 |
|---|---|
| 载体用途： | 启动子检测 |
| 基因种属： | |
| 基因类型： | Promoter |
| 原核抗性： | Amp |
| 真核抗性： | |
| 荧光蛋白： | rLuc |
质粒简介
The pGL4.73[hRluc/SV40] Vector encodes the luciferase reporter gene hRluc (Renilla reniformis) and is designed for high expression and reduced anomalous transcription. The pGL4 Vectors are engineered with fewer consensus regulatory sequences and a synthetic gene, which has been codon optimized for mammalian expression.The pGL4.73[hRluc/SV40] Vector contains the hRluc reporter gene and an SV40 early enhancer/promoter and can be used as an expression control or a co-reporter vector.
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 3921 bp ds-DNA circular SYN 26-JUL-2013
DEFINITION SV40 promoter-containing internal control vector for strong
constitutive expression of Renilla luciferase.
ACCESSION AY738229
VERSION .
KEYWORDS pGL4.73[hRluc SV40]
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 3921)
AUTHORS Promega
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Sunday, September 4, 2016 from SnapGene Viewer 3.1.4
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..3921
/organism="synthetic DNA construct"
/lab_host="Mammalian Cells"
/mol_type="other DNA"
promoter 106..463
/note="SV40 promoter"
/note="SV40 enhancer and early promoter"
rep_origin 314..449
/note="SV40 ori"
/note="SV40 origin of replication"
CDS 499..1434
/codon_start=1
/product="Renilla luciferase"
/note="hRluc"
/note="human codon-optimized"
/translation="MASKVYDPEQRKRMITGPQWWARCKQMNVLDSFINYYDSEKHAEN
AVIFLHGNAASSYLWRHVVPHIEPVARCIIPDLIGMGKSGKSGNGSYRLLDHYKYLTAW
FELLNLPKKIIFVGHDWGACLAFHYSYEHQDKIKAIVHAESVVDVIESWDEWPDIEEDI
ALIKSEEGEKMVLENNFFVETMLPSKIMRKLEPEEFAAYLEPFKEKGEVRRPTLSWPRE
IPLVKGGKPDVVQIVRNYNAYLRASDDLPKMFIESDPGFFSNAIVEGAKKFPNTEFVKV
KGLHFSQEDAPDEMGKYIKSFVERVLKNEQ"
polyA_signal 1475..1596
/note="SV40 poly(A) signal"
/note="SV40 polyadenylation signal"
rep_origin complement(2015..2603)
/direction=LEFT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(2803..3663)
/codon_start=1
/product="beta-lactamase"
/note="AmpR"
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
polyA_signal 3768..3816
/note="synthetic polyadenylation signal"
misc_feature 3830..3921
/note="pause site"
/note="RNA polymerase II transcriptional pause signal from
the human alpha-2 globin gene"
ORIGIN
1 ggcctaactg gccggtacct gagctcgcta gcctcgagga tatcagatct gcgcagcacc
61 atggcctgaa ataacctctg aaagaggaac ttggttaggt accttctgag gcggaaagaa
121 ccagctgtgg aatgtgtgtc agttagggtg tggaaagtcc ccaggctccc cagcaggcag
181 aagtatgcaa agcatgcatc tcaattagtc agcaaccagg tgtggaaagt ccccaggctc
241 cccagcaggc agaagtatgc aaagcatgca tctcaattag tcagcaacca tagtcccgcc
301 cctaactccg cccatcccgc ccctaactcc gcccagttcc gcccattctc cgccccatgg
361 ctgactaatt ttttttattt atgcagaggc cgaggccgcc tcggcctctg agctattcca
421 gaagtagtga ggaggctttt ttggaggcct aggcttttgc aaaaagcttg gcaatccggt
481 actgttggta aagccaccat ggcttccaag gtgtacgacc ccgagcaacg caaacgcatg
541 atcactgggc ctcagtggtg ggctcgctgc aagcaaatga acgtgctgga ctccttcatc
601 aactactatg attccgagaa gcacgccgag aacgccgtga tttttctgca tggtaacgct
661 gcctccagct acctgtggag gcacgtcgtg cctcacatcg agcccgtggc tagatgcatc
721 atccctgatc tgatcggaat gggtaagtcc ggcaagagcg ggaatggctc atatcgcctc
781 ctggatcact acaagtacct caccgcttgg ttcgagctgc tgaaccttcc aaagaaaatc
841 atctttgtgg gccacgactg gggggcttgt ctggcctttc actactccta cgagcaccaa
901 gacaagatca aggccatcgt ccatgctgag agtgtcgtgg acgtgatcga gtcctgggac
961 gagtggcctg acatcgagga ggatatcgcc ctgatcaaga gcgaagaggg cgagaaaatg
1021 gtgcttgaga ataacttctt cgtcgagacc atgctcccaa gcaagatcat gcggaaactg
1081 gagcctgagg agttcgctgc ctacctggag ccattcaagg agaagggcga ggttagacgg
1141 cctaccctct cctggcctcg cgagatccct ctcgttaagg gaggcaagcc cgacgtcgtc
1201 cagattgtcc gcaactacaa cgcctacctt cgggccagcg acgatctgcc taagatgttc
1261 atcgagtccg accctgggtt cttttccaac gctattgtcg agggagctaa gaagttccct
1321 aacaccgagt tcgtgaaggt gaagggcctc cacttcagcc aggaggacgc tccagatgaa
1381 atgggtaagt acatcaagag cttcgtggag cgcgtgctga agaacgagca gtaattctag
1441 agtcggggcg gccggccgct tcgagcagac atgataagat acattgatga gtttggacaa
1501 accacaacta gaatgcagtg aaaaaaatgc tttatttgtg aaatttgtga tgctattgct
1561 ttatttgtaa ccattataag ctgcaataaa caagttaaca acaacaattg cattcatttt
1621 atgtttcagg ttcaggggga ggtgtgggag gttttttaaa gcaagtaaaa cctctacaaa
1681 tgtggtaaaa tcgataagga tccgtcgacc gatgcccttg agagccttca acccagtcag
1741 ctccttccgg tgggcgcggg gcatgactat cgtcgccgca cttatgactg tcttctttat
1801 catgcaactc gtaggacagg tgccggcagc gctcttccgc ttcctcgctc actgactcgc
1861 tgcgctcggt cgttcggctg cggcgagcgg tatcagctca ctcaaaggcg gtaatacggt
1921 tatccacaga atcaggggat aacgcaggaa agaacatgtg agcaaaaggc cagcaaaagg
1981 ccaggaaccg taaaaaggcc gcgttgctgg cgtttttcca taggctccgc ccccctgacg
2041 agcatcacaa aaatcgacgc tcaagtcaga ggtggcgaaa cccgacagga ctataaagat
2101 accaggcgtt tccccctgga agctccctcg tgcgctctcc tgttccgacc ctgccgctta
2161 ccggatacct gtccgccttt ctcccttcgg gaagcgtggc gctttctcat agctcacgct
2221 gtaggtatct cagttcggtg taggtcgttc gctccaagct gggctgtgtg cacgaacccc
2281 ccgttcagcc cgaccgctgc gccttatccg gtaactatcg tcttgagtcc aacccggtaa
2341 gacacgactt atcgccactg gcagcagcca ctggtaacag gattagcaga gcgaggtatg
2401 taggcggtgc tacagagttc ttgaagtggt ggcctaacta cggctacact agaagaacag
2461 tatttggtat ctgcgctctg ctgaagccag ttaccttcgg aaaaagagtt ggtagctctt
2521 gatccggcaa acaaaccacc gctggtagcg gtggtttttt tgtttgcaag cagcagatta
2581 cgcgcagaaa aaaaggatct caagaagatc ctttgatctt ttctacgggg tctgacgctc
2641 agtggaacga aaactcacgt taagggattt tggtcatgag attatcaaaa aggatcttca
2701 cctagatcct tttaaattaa aaatgaagtt ttaaatcaat ctaaagtata tatgagtaaa
2761 cttggtctga cagcggccgc aaatgctaaa ccactgcagt ggttaccagt gcttgatcag
2821 tgaggcaccg atctcagcga tctgcctatt tcgttcgtcc atagtggcct gactccccgt
2881 cgtgtagatc actacgattc gtgagggctt accatcaggc cccagcgcag caatgatgcc
2941 gcgagagccg cgttcaccgg cccccgattt gtcagcaatg aaccagccag cagggagggc
3001 cgagcgaaga agtggtcctg ctactttgtc cgcctccatc cagtctatga gctgctgtcg
3061 tgatgctaga gtaagaagtt cgccagtgag tagtttccga agagttgtgg ccattgctac
3121 tggcatcgtg gtatcacgct cgtcgttcgg tatggcttcg ttcaactctg gttcccagcg
3181 gtcaagccgg gtcacatgat cacccatatt atgaagaaat gcagtcagct ccttagggcc
3241 tccgatcgtt gtcagaagta agttggccgc ggtgttgtcg ctcatggtaa tggcagcact
3301 acacaattct cttaccgtca tgccatccgt aagatgcttt tccgtgaccg gcgagtactc
3361 aaccaagtcg ttttgtgagt agtgtatacg gcgaccaagc tgctcttgcc cggcgtctat
3421 acgggacaac accgcgccac atagcagtac tttgaaagtg ctcatcatcg ggaatcgttc
3481 ttcggggcgg aaagactcaa ggatcttgcc gctattgaga tccagttcga tatagcccac
3541 tcttgcaccc agttgatctt cagcatcttt tactttcacc agcgtttcgg ggtgtgcaaa
3601 aacaggcaag caaaatgccg caaagaaggg aatgagtgcg acacgaaaat gttggatgct
3661 catactcgtc ctttttcaat attattgaag catttatcag ggttactagt acgtctctca
3721 aggataagta agtaatatta aggtacggga ggtattggac aggccgcaat aaaatatctt
3781 tattttcatt acatctgtgt gttggttttt tgtgtgaatc gatagtacta acatacgctc
3841 tccatcaaaa caaaacgaaa caaaacaaac tagcaaaata ggctgtcccc agtgcaagtg
3901 caggtgccag aacatttctc t
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P3323/pCMV-SPORT6-CEP57人源基因质粒 |
| P3324/pCMV-SPORT6-PSAT1（1同义突变）人源基因质粒 |
| P3325/pCMV-SPORT6-MGMT人源基因质粒 |
| P3326/pCMV-SPORT6-PPIH人源基因质粒 |
| P3327/pCMV-SPORT6-PREB人源基因质粒 |
| P3328/pCMV-SPORT6-PPP5C人源基因质粒 |
| P3329/pCMV-SPORT6-TMEM33人源基因质粒 |
| P3330/pCMV-SPORT6-TNFRSF10B（2点突变）人源基因质粒 |
| P3331/pCMV-SPORT6-RAD1人源基因质粒 |
| P3332/pCMV-SPORT6-PAPOLA人源基因质粒 |
| P3333/pCMV-SPORT6-ZNF160（1点突变）人源基因质粒 |
| P3334/pCMV-SPORT6-SLX1A人源基因质粒 |
| P3335/pCMV-SPORT6-LY6K人源基因质粒 |
风险提示：丁香通仅作为第三方平台，为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全，合理判断，谨慎选购商品，商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品，请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
文献和实验相关实验
水仙子2005 我想分别构建FOXO1 和 SIRT1基因启动子/luciferase报告质粒，用于研究X基因是否能够调控这两个启动子。但是不知道该扩增两个基因启动子区域的哪一段插入pGL3（promega）中。 另外，promega的pGL3有pGL3-basic和pGL3-enhancer，该选择哪个？ 水仙子2005 继续求助 sxd5266 pGL3-basic 没有SV40
萤火虫荧光素酶反应的残留发光，小于未湮灭反应值的0.0004%。图6 用PLB裂解哺乳细胞的高效率和被动或主动裂解方法。用pGL3-Control 和pRL-SV40载体DNA共转染图示的培养哺乳细胞，制备裂解液时，向贴壁细胞加入PLB，温和摇动培养液达15分钟 （被动细胞裂解），或从培养板中刮下贴壁细胞，在-80℃进行1次冻/融循环（主动细胞裂解）。萤火虫和Renilla荧光素酶活力用DLR方法确定，如图4所示。为了便于比较，报告基因活力用主动裂解方法对每种细胞进行归一化。图A:萤火
染色体DNA从某固定的起点开始，按一定顺序进行半保留复制，以完成使 DNA的某一部分得以复制成为双份的过程。复制时从起点开始有向两个方向进行者，也有是单方向进行者。前者有如包括人类在内的哺乳类、果蝇等昆虫类， SV40、噬菌体 T7、λ噬菌体等，后一类为数不多，有噬菌体中的 P2及φ x174等。
pGL4.73[hRluc /SV40]哺乳报告质粒
￥100 - 1000
