![pGL4.73[hRluc /SV40]哺乳报告质粒](https://img1.dxycdn.com/2021/1019/677/5526651771582230153-14.jpg)
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pGL4.73[hRluc-SV40]
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100
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上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pGL4.73[hRluc /SV40]哺乳报告质粒
别称: pGL4.73[hRluc-SV40]
质粒属性
质粒简介
The pGL4.73[hRluc/SV40] Vector encodes the luciferase reporter gene hRluc (Renilla reniformis) and is designed for high expression and reduced anomalous transcription. The pGL4 Vectors are engineered with fewer consensus regulatory sequences and a synthetic gene, which has been codon optimized for mammalian expression.The pGL4.73[hRluc/SV40] Vector contains the hRluc reporter gene and an SV40 early enhancer/promoter and can be used as an expression control or a co-reporter vector.
质粒图谱
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质粒序列
LOCUS Exported 3921 bp ds-DNA circular SYN 26-JUL-2013
DEFINITION SV40 promoter-containing internal control vector for strong
constitutive expression of Renilla luciferase.
ACCESSION AY738229
VERSION .
KEYWORDS pGL4.73[hRluc SV40]
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 3921)
AUTHORS Promega
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Sunday, September 4, 2016 from SnapGene Viewer 3.1.4
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..3921
/organism="synthetic DNA construct"
/lab_host="Mammalian Cells"
/mol_type="other DNA"
promoter 106..463
/note="SV40 promoter"
/note="SV40 enhancer and early promoter"
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/note="SV40 ori"
/note="SV40 origin of replication"
CDS 499..1434
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/product="Renilla luciferase"
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/note="human codon-optimized"
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KGLHFSQEDAPDEMGKYIKSFVERVLKNEQ"
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/note="SV40 poly(A) signal"
/note="SV40 polyadenylation signal"
rep_origin complement(2015..2603)
/direction=LEFT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(2803..3663)
/codon_start=1
/product="beta-lactamase"
/note="AmpR"
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
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LIKHW"
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/note="synthetic polyadenylation signal"
misc_feature 3830..3921
/note="pause site"
/note="RNA polymerase II transcriptional pause signal from
the human alpha-2 globin gene"
ORIGIN
1 ggcctaactg gccggtacct gagctcgcta gcctcgagga tatcagatct gcgcagcacc
61 atggcctgaa ataacctctg aaagaggaac ttggttaggt accttctgag gcggaaagaa
121 ccagctgtgg aatgtgtgtc agttagggtg tggaaagtcc ccaggctccc cagcaggcag
181 aagtatgcaa agcatgcatc tcaattagtc agcaaccagg tgtggaaagt ccccaggctc
241 cccagcaggc agaagtatgc aaagcatgca tctcaattag tcagcaacca tagtcccgcc
301 cctaactccg cccatcccgc ccctaactcc gcccagttcc gcccattctc cgccccatgg
361 ctgactaatt ttttttattt atgcagaggc cgaggccgcc tcggcctctg agctattcca
421 gaagtagtga ggaggctttt ttggaggcct aggcttttgc aaaaagcttg gcaatccggt
481 actgttggta aagccaccat ggcttccaag gtgtacgacc ccgagcaacg caaacgcatg
541 atcactgggc ctcagtggtg ggctcgctgc aagcaaatga acgtgctgga ctccttcatc
601 aactactatg attccgagaa gcacgccgag aacgccgtga tttttctgca tggtaacgct
661 gcctccagct acctgtggag gcacgtcgtg cctcacatcg agcccgtggc tagatgcatc
721 atccctgatc tgatcggaat gggtaagtcc ggcaagagcg ggaatggctc atatcgcctc
781 ctggatcact acaagtacct caccgcttgg ttcgagctgc tgaaccttcc aaagaaaatc
841 atctttgtgg gccacgactg gggggcttgt ctggcctttc actactccta cgagcaccaa
901 gacaagatca aggccatcgt ccatgctgag agtgtcgtgg acgtgatcga gtcctgggac
961 gagtggcctg acatcgagga ggatatcgcc ctgatcaaga gcgaagaggg cgagaaaatg
1021 gtgcttgaga ataacttctt cgtcgagacc atgctcccaa gcaagatcat gcggaaactg
1081 gagcctgagg agttcgctgc ctacctggag ccattcaagg agaagggcga ggttagacgg
1141 cctaccctct cctggcctcg cgagatccct ctcgttaagg gaggcaagcc cgacgtcgtc
1201 cagattgtcc gcaactacaa cgcctacctt cgggccagcg acgatctgcc taagatgttc
1261 atcgagtccg accctgggtt cttttccaac gctattgtcg agggagctaa gaagttccct
1321 aacaccgagt tcgtgaaggt gaagggcctc cacttcagcc aggaggacgc tccagatgaa
1381 atgggtaagt acatcaagag cttcgtggag cgcgtgctga agaacgagca gtaattctag
1441 agtcggggcg gccggccgct tcgagcagac atgataagat acattgatga gtttggacaa
1501 accacaacta gaatgcagtg aaaaaaatgc tttatttgtg aaatttgtga tgctattgct
1561 ttatttgtaa ccattataag ctgcaataaa caagttaaca acaacaattg cattcatttt
1621 atgtttcagg ttcaggggga ggtgtgggag gttttttaaa gcaagtaaaa cctctacaaa
1681 tgtggtaaaa tcgataagga tccgtcgacc gatgcccttg agagccttca acccagtcag
1741 ctccttccgg tgggcgcggg gcatgactat cgtcgccgca cttatgactg tcttctttat
1801 catgcaactc gtaggacagg tgccggcagc gctcttccgc ttcctcgctc actgactcgc
1861 tgcgctcggt cgttcggctg cggcgagcgg tatcagctca ctcaaaggcg gtaatacggt
1921 tatccacaga atcaggggat aacgcaggaa agaacatgtg agcaaaaggc cagcaaaagg
1981 ccaggaaccg taaaaaggcc gcgttgctgg cgtttttcca taggctccgc ccccctgacg
2041 agcatcacaa aaatcgacgc tcaagtcaga ggtggcgaaa cccgacagga ctataaagat
2101 accaggcgtt tccccctgga agctccctcg tgcgctctcc tgttccgacc ctgccgctta
2161 ccggatacct gtccgccttt ctcccttcgg gaagcgtggc gctttctcat agctcacgct
2221 gtaggtatct cagttcggtg taggtcgttc gctccaagct gggctgtgtg cacgaacccc
2281 ccgttcagcc cgaccgctgc gccttatccg gtaactatcg tcttgagtcc aacccggtaa
2341 gacacgactt atcgccactg gcagcagcca ctggtaacag gattagcaga gcgaggtatg
2401 taggcggtgc tacagagttc ttgaagtggt ggcctaacta cggctacact agaagaacag
2461 tatttggtat ctgcgctctg ctgaagccag ttaccttcgg aaaaagagtt ggtagctctt
2521 gatccggcaa acaaaccacc gctggtagcg gtggtttttt tgtttgcaag cagcagatta
2581 cgcgcagaaa aaaaggatct caagaagatc ctttgatctt ttctacgggg tctgacgctc
2641 agtggaacga aaactcacgt taagggattt tggtcatgag attatcaaaa aggatcttca
2701 cctagatcct tttaaattaa aaatgaagtt ttaaatcaat ctaaagtata tatgagtaaa
2761 cttggtctga cagcggccgc aaatgctaaa ccactgcagt ggttaccagt gcttgatcag
2821 tgaggcaccg atctcagcga tctgcctatt tcgttcgtcc atagtggcct gactccccgt
2881 cgtgtagatc actacgattc gtgagggctt accatcaggc cccagcgcag caatgatgcc
2941 gcgagagccg cgttcaccgg cccccgattt gtcagcaatg aaccagccag cagggagggc
3001 cgagcgaaga agtggtcctg ctactttgtc cgcctccatc cagtctatga gctgctgtcg
3061 tgatgctaga gtaagaagtt cgccagtgag tagtttccga agagttgtgg ccattgctac
3121 tggcatcgtg gtatcacgct cgtcgttcgg tatggcttcg ttcaactctg gttcccagcg
3181 gtcaagccgg gtcacatgat cacccatatt atgaagaaat gcagtcagct ccttagggcc
3241 tccgatcgtt gtcagaagta agttggccgc ggtgttgtcg ctcatggtaa tggcagcact
3301 acacaattct cttaccgtca tgccatccgt aagatgcttt tccgtgaccg gcgagtactc
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3661 catactcgtc ctttttcaat attattgaag catttatcag ggttactagt acgtctctca
3721 aggataagta agtaatatta aggtacggga ggtattggac aggccgcaat aaaatatctt
3781 tattttcatt acatctgtgt gttggttttt tgtgtgaatc gatagtacta acatacgctc
3841 tccatcaaaa caaaacgaaa caaaacaaac tagcaaaata ggctgtcccc agtgcaagtg
3901 caggtgccag aacatttctc t
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
![pGL4.73[hRluc /SV40]哺乳报告质粒](https://img1.dxycdn.com/2021/0710/533/6058013828668851943-14.jpg)
![pGL4.73[hRluc /SV40]哺乳报告质粒](https://img1.dxycdn.com/2021/0917/317/4198811795965934053-14.png)
名称：pGL4.73[hRluc /SV40]哺乳报告质粒
别称: pGL4.73[hRluc-SV40]
| 启动子: | SV40 |
|---|---|
| 复制子: | pUC |
| 终止子: | SV40 poly(A) signal |
| 质粒分类: | 哺乳细胞，信号通路报告载体 |
| 质粒大小: | 3921bp |
| 原核抗性: | Amp |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
| 表达宿主: | 哺乳细胞 |
| 诱导方式: | 无须诱导，瞬时表达 |
| 5'测序引物: | RVP3:CTAGCAAAATAGGCTGTCCC |
| 3'测序引物: | 根据序列设计引物 |
质粒属性
| 载体宿主： | 哺乳细胞 |
|---|---|
| 载体用途： | 启动子检测 |
| 基因种属： | |
| 基因类型： | Promoter |
| 原核抗性： | Amp |
| 真核抗性： | |
| 荧光蛋白： | rLuc |
质粒简介
The pGL4.73[hRluc/SV40] Vector encodes the luciferase reporter gene hRluc (Renilla reniformis) and is designed for high expression and reduced anomalous transcription. The pGL4 Vectors are engineered with fewer consensus regulatory sequences and a synthetic gene, which has been codon optimized for mammalian expression.The pGL4.73[hRluc/SV40] Vector contains the hRluc reporter gene and an SV40 early enhancer/promoter and can be used as an expression control or a co-reporter vector.
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 3921 bp ds-DNA circular SYN 26-JUL-2013
DEFINITION SV40 promoter-containing internal control vector for strong
constitutive expression of Renilla luciferase.
ACCESSION AY738229
VERSION .
KEYWORDS pGL4.73[hRluc SV40]
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 3921)
AUTHORS Promega
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Sunday, September 4, 2016 from SnapGene Viewer 3.1.4
http://www.miaolingbio.com
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source 1..3921
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/lab_host="Mammalian Cells"
/mol_type="other DNA"
promoter 106..463
/note="SV40 promoter"
/note="SV40 enhancer and early promoter"
rep_origin 314..449
/note="SV40 ori"
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/codon_start=1
/product="Renilla luciferase"
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AVIFLHGNAASSYLWRHVVPHIEPVARCIIPDLIGMGKSGKSGNGSYRLLDHYKYLTAW
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/note="SV40 poly(A) signal"
/note="SV40 polyadenylation signal"
rep_origin complement(2015..2603)
/direction=LEFT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(2803..3663)
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/product="beta-lactamase"
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related antibiotics"
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LIKHW"
polyA_signal 3768..3816
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the human alpha-2 globin gene"
ORIGIN
1 ggcctaactg gccggtacct gagctcgcta gcctcgagga tatcagatct gcgcagcacc
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1681 tgtggtaaaa tcgataagga tccgtcgacc gatgcccttg agagccttca acccagtcag
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1981 ccaggaaccg taaaaaggcc gcgttgctgg cgtttttcca taggctccgc ccccctgacg
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2101 accaggcgtt tccccctgga agctccctcg tgcgctctcc tgttccgacc ctgccgctta
2161 ccggatacct gtccgccttt ctcccttcgg gaagcgtggc gctttctcat agctcacgct
2221 gtaggtatct cagttcggtg taggtcgttc gctccaagct gggctgtgtg cacgaacccc
2281 ccgttcagcc cgaccgctgc gccttatccg gtaactatcg tcttgagtcc aacccggtaa
2341 gacacgactt atcgccactg gcagcagcca ctggtaacag gattagcaga gcgaggtatg
2401 taggcggtgc tacagagttc ttgaagtggt ggcctaacta cggctacact agaagaacag
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3601 aacaggcaag caaaatgccg caaagaaggg aatgagtgcg acacgaaaat gttggatgct
3661 catactcgtc ctttttcaat attattgaag catttatcag ggttactagt acgtctctca
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P3323/pCMV-SPORT6-CEP57人源基因质粒 |
| P3324/pCMV-SPORT6-PSAT1（1同义突变）人源基因质粒 |
| P3325/pCMV-SPORT6-MGMT人源基因质粒 |
| P3326/pCMV-SPORT6-PPIH人源基因质粒 |
| P3327/pCMV-SPORT6-PREB人源基因质粒 |
| P3328/pCMV-SPORT6-PPP5C人源基因质粒 |
| P3329/pCMV-SPORT6-TMEM33人源基因质粒 |
| P3330/pCMV-SPORT6-TNFRSF10B（2点突变）人源基因质粒 |
| P3331/pCMV-SPORT6-RAD1人源基因质粒 |
| P3332/pCMV-SPORT6-PAPOLA人源基因质粒 |
| P3333/pCMV-SPORT6-ZNF160（1点突变）人源基因质粒 |
| P3334/pCMV-SPORT6-SLX1A人源基因质粒 |
| P3335/pCMV-SPORT6-LY6K人源基因质粒 |
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