DsRed-rab7 WT人源基因质粒

基本信息
名称：DsRed-rab7 WT人源基因质粒
别称: Plasmid#12661;RAB7A;PRO2706RAB7
复制子: pUC
原核抗性: Kan
筛选标记：G418
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度

质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Kan
真核抗性：Neo/G418
荧光蛋白：红色

质粒简介
            DsRed-rab7 WT人源基因哺乳细胞过表达质粒。

质粒图谱


质粒序列
LOCUS       Exported                6060 bp ds-DNA     circular SYN 03-DEC-2017
DEFINITION  synthetic circular DNA
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..6060
                     /organism="synthetic DNA construct"
                     /mol_type="other DNA"
     enhancer        68..371
                     /note="CMV enhancer"
                     /note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
     promoter        372..575
                     /note="CMV promoter"
                     /note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early 
                     promoter"
     regulatory      614..623
                     /regulatory_class="other"
                     /note="Kozak sequence"
                     /note="vertebrate consensus sequence for strong initiation 
                     of translation (Kozak, 1987)"
     CDS             620..1297
                     /codon_start=1
                     /product="wild-type DsRed"
                     /note="DsRed1"
                     /note="mammalian codon-optimized"
                     /translation="MVRSSKNVIKEFMRFKVRMEGTVNGHEFEIEGEGEGRPYEGHNTV
                     KLKVTKGGPLPFAWDILSPQFQYGSKVYVKHPADIPDYKKLSFPEGFKWERVMNFEDGG
                     VVTVTQDSSLQDGCFIYKVKFIGVNFPSDGPVMQKKTMGWEASTERLYPRDGVLKGEIH
                     KALKLKDGGHYLVEFKSIYMAKKPVQLPGYYYVDSKLDITSHNEDYTIVEQYERTEGRH
                     HLFL"
     CDS             1361..1387
                     /codon_start=1
                     /product="HA (human influenza hemagglutinin) epitope tag"
                     /note="HA"
                     /translation="YPYDVPDYA"
     CDS             1388..1414
                     /codon_start=1
                     /product="HA (human influenza hemagglutinin) epitope tag"
                     /note="HA"
                     /translation="YPYDVPDYA"
     misc_feature    1415..2038
                     /note="RAB7"
     polyA_signal    2855..2976
                     /note="SV40 poly(A) signal"
                     /note="SV40 polyadenylation signal"
     rep_origin      complement(2983..3438)
                     /direction=LEFT
                     /note="f1 ori"
                     /note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow 
                     indicates direction of (+) strand synthesis"
     promoter        3465..3569
                     /gene="bla"
                     /note="AmpR promoter"
     promoter        3571..3928
                     /note="SV40 promoter"
                     /note="SV40 enhancer and early promoter"
     rep_origin      3779..3914
                     /note="SV40 ori"
                     /note="SV40 origin of replication"
     CDS             3963..4757
                     /codon_start=1
                     /gene="aph(3')-II (or nptII)"
                     /product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
                     /note="NeoR/KanR"
                     /note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418 
                     (Geneticin(R))"
                     /translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
                     VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
                     SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPAT-CPFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
                     GLAPAELFARLKASMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
                     LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
     polyA_signal    4989..5036
                     /note="HSV TK poly(A) signal"
                     /note="herpes simplex virus thymidine kinase 
                     polyadenylation signal (Cole and Stacy, 1985)"
     rep_origin      5365..5953
                     /direction=RIGHT
                     /note="ori"
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                     replication"
ORIGIN
        1 catgcattag ttattaatag taatcaatta cggggtcatt agttcatagc ccatatatgg
       61 agttccgcgt tacataactt acggtaaatg gcccgcctgg ctgaccgccc aacgaccccc
      121 gcccattgac gtcaataatg acgtatgttc ccatagtaac gccaataggg actttccatt
      181 gacgtcaatg ggtggagtat ttacggtaaa ctgcccactt ggcagtacat caagtgtatc
      241 atatgccaag tacgccccct attgacgtca atgacggtaa atggcccgcc tggcattatg
      301 cccagtacat gaccttatgg gactttccta cttggcagta catctacgta ttagtcatcg
      361 ctattaccat ggtgatgcgg ttttggcagt acatcaatgg gcgtggatag cggtttgact
      421 cacggggatt tccaagtctc caccccattg acgtcaatgg gagtttgttt tggcaccaaa
      481 atcaacggga ctttccaaaa tgtcgtaaca actccgcccc attgacgcaa atgggcggta
      541 ggcgtgtacg gtgggaggtc tatataagca gagctggttt agtgaaccgt cagatccgct
      601 agcgctaccg gtcgccacca tggtgcgctc ctccaagaac gtcatcaagg agttcatgcg
      661 cttcaaggtg cgcatggagg gcaccgtgaa cggccacgag ttcgagatcg agggcgaggg
      721 cgagggccgc ccctacgagg gccacaacac cgtgaagctg aaggtgacca agggcggccc
      781 cctgcccttc gcctgggaca tcctgtcccc ccagttccag tacggctcca aggtgtacgt
      841 gaagcacccc gccgacatcc ccgactacaa gaagctgtcc ttccccgagg gcttcaagtg
      901 ggagcgcgtg atgaacttcg aggacggcgg cgtggtgacc gtgacccagg actcctccct
      961 gcaggacggc tgcttcatct acaaggtgaa gttcatcggc gtgaacttcc cctccgacgg
     1021 ccccgtaatg cagaagaaga ccatgggctg ggaggcctcc accgagcgcc tgtacccccg
     1081 cgacggcgtg ctgaagggcg agatccacaa ggccctgaag ctgaaggacg gcggccacta
     1141 cctggtggag ttcaagtcca tctacatggc caagaagccc gtgcagctgc ccggctacta
     1201 ctacgtggac tccaagctgg acatcacctc ccacaacgag gactacacca tcgtggagca
     1261 gtacgagcgc accgagggcc gccaccacct gttcctgctc agatctcgag ctcaagcttc
     1321 gaattctgca gtcgacggta ccgcgggccc gggatccatg tacccatacg atgttccgga
     1381 ttacgcttac ccatacgatg ttccggatta cgctggtacc tctaggaaga aagtgttgct
     1441 gaaggttatc atcctgggag attctggagt cgggaagaca tcactcatga accagtatgt
     1501 gaataagaaa ttcagcaatc agtacaaagc cacaatagga gctgactttc tgaccaagga
     1561 ggtgatggtg gatgacaggc tagtcacaat gcagatatgg gacacagcag gacaggaacg
     1621 gttccagtct ctcggtgtgg ccttctacag aggtgcagac tgctgcgttc tggtatttga
     1681 tgtgactgcc cccaacacat tcaaaaccct agatagctgg agagatgagt ttctcatcca
     1741 ggccagtccc cgagatcctg aaaacttccc atttgttgtg ttgggaaaca agattgacct
     1801 cgaaaacaga caagtggcca caaagcgggc acaggcctgg tgctacagca aaaacaacat
     1861 tccctacttt gagaccagtg ccaaggaggc catcaacgtg gagcaggcgt tccagacgat
     1921 tgcacggaat gcacttaagc aggaaacgga ggtggagctg tacaacgaat ttcctgaacc
     1981 tatcaaactg gacaagaatg accgggccaa ggcctcggca gaaagctgca gttgctgagg
     2041 atccatgtac ccatacgatg ttccggatta cgcttaccca tacgatgttc cggattacgc
     2101 tggtacctct aggaagaaag tgttgctgaa ggttatcatc ctgggagatt ctggagtcgg
     2161 gaagacatca ctcatgaacc agtatgtgaa taagaaattc agcaatcagt acaaagccac
     2221 aataggagct gactttctga ccaaggaggt gatggtggat gacaggctag tcacaatgca
     2281 gatatgggac acagcaggac aggaacggtt ccagtctctc ggtgtggcct tctacagagg
     2341 tgcagactgc tgcgttctgg tatttgatgt gactgccccc aacacattca aaaccctaga
     2401 tagctggaga gatgagtttc tcatccaggc cagtccccga gatcctgaaa acttcccatt
     2461 tgttgtgttg ggaaacaaga ttgacctcga aaacagacaa gtggccacaa agcgggcaca
     2521 ggcctggtgc tacagcaaaa acaacattcc ctactttgag accagtgcca aggaggccat
     2581 caacgtggag caggcgttcc agacgattgc acggaatgca cttaagcagg aaacggaggt
     2641 ggagctgtac aacgaatttc ctgaacctat caaactggac aagaatgacc gggccaaggc
     2701 ctcggcagaa agctgcagtt gctgaggatc caccggatct agataactga tcataatcag
     2761 ccataccaca tttgtagagg ttttacttgc tttaaaaaac ctcccacacc tccccctgaa
     2821 cctgaaacat aaaatgaatg caattgttgt tgttaacttg tttattgcag cttataatgg
     2881 ttacaaataa agcaatagca tcacaaattt cacaaataaa gcattttttt cactgcattc
     2941 tagttgtggt ttgtccaaac tcatcaatgt atcttaacgc gtaaattgta agcgttaata
     3001 ttttgttaaa attcgcgtta aatttttgtt aaatcagctc attttttaac caataggccg
     3061 aaatcggcaa aatcccttat aaatcaaaag aatagaccga gatagggttg agtgttgttc
     3121 cagtttggaa caagagtcca ctattaaaga acgtggactc caacgtcaaa gggcgaaaaa
     3181 ccgtctatca gggcgatggc ccactacgtg aaccatcacc ctaatcaagt tttttggggt
     3241 cgaggtgccg taaagcacta aatcggaacc ctaaagggag cccccgattt agagcttgac
     3301 ggggaaagcc ggcgaacgtg gcgagaaagg aagggaagaa agcgaaagga gcgggcgcta
     3361 gggcgctggc aagtgtagcg gtcacgctgc gcgtaaccac cacacccgcc gcgcttaatg
     3421 cgccgctaca gggcgcgtca ggtggcactt ttcggggaaa tgtgcgcgga acccctattt
     3481 gtttattttt ctaaatacat tcaaatatgt atccgctcat gagacaataa ccctgataaa
     3541 tgcttcaata atattgaaaa aggaagagtc ctgaggcgga aagaaccagc tgtggaatgt
     3601 gtgtcagtta gggtgtggaa agtccccagg ctccccagca ggcagaagta tgcaaagcat
     3661 gcatctcaat tagtcagcaa ccaggtgtgg aaagtcccca ggctccccag caggcagaag
     3721 tatgcaaagc atgcatctca attagtcagc aaccatagtc ccgcccctaa ctccgcccat
     3781 cccgccccta actccgccca gttccgccca ttctccgccc catggctgac taattttttt
     3841 tatttatgca gaggccgagg ccgcctcggc ctctgagcta ttccagaagt agtgaggagg
     3901 cttttttgga ggcctaggct tttgcaaaga tcgatcaaga gacaggatga ggatcgtttc
     3961 gcatgattga acaagatgga ttgcacgcag gttctccggc cgcttgggtg gagaggctat
     4021 tcggctatga ctgggcacaa cagacaatcg gctgctctga tgccgccgtg ttccggctgt
     4081 cagcgcaggg gcgcccggtt ctttttgtca agaccgacct gtccggtgcc ctgaatgaac
     4141 tgcaagacga ggcagcgcgg ctatcgtggc tggccacgac gggcgttcct tgcgcagctg
     4201 tgctcgacgt tgtcactgaa gcgggaaggg actggctgct attgggcgaa gtgccggggc
     4261 aggatctcct gtcatctcac cttgctcctg ccgagaaagt atccatcatg gctgatgcaa
     4321 tgcggcggct gcatacgctt gatccggcta cctgcccatt cgaccaccaa gcgaaacatc
     4381 gcatcgagcg agcacgtact cggatggaag ccggtcttgt cgatcaggat gatctggacg
     4441 aagagcatca ggggctcgcg ccagccgaac tgttcgccag gctcaaggcg agcatgcccg
     4501 acggcgagga tctcgtcgtg acccatggcg atgcctgctt gccgaatatc atggtggaaa
     4561 atggccgctt ttctggattc atcgactgtg gccggctggg tgtggcggac cgctatcagg
     4621 acatagcgtt ggctacccgt gatattgctg aagagcttgg cggcgaatgg gctgaccgct
     4681 tcctcgtgct ttacggtatc gccgctcccg attcgcagcg catcgccttc tatcgccttc
     4741 ttgacgagtt cttctgagcg ggactctggg gttcgaaatg accgaccaag cgacgcccaa
     4801 cctgccatca cgagatttcg attccaccgc cgccttctat gaaaggttgg gcttcggaat
     4861 cgttttccgg gacgccggct ggatgatcct ccagcgcggg gatctcatgc tggagttctt
     4921 cgcccaccct agggggaggc taactgaaac acggaaggag acaataccgg aaggaacccg
     4981 cgctatgacg gcaataaaaa gacagaataa aacgcacggt gttgggtcgt ttgttcataa
     5041 acgcggggtt cggtcccagg gctggcactc tgtcgatacc ccaccgagac cccattgggg
     5101 ccaatacgcc cgcgtttctt ccttttcccc accccacccc ccaagttcgg gtgaaggccc
     5161 agggctcgca gccaacgtcg gggcggcagg ccctgccata gcctcaggtt actcatatat
     5221 actttagatt gatttaaaac ttcattttta atttaaaagg atctaggtga agatcctttt
     5281 tgataatctc atgaccaaaa tcccttaacg tgagttttcg ttccactgag cgtcagaccc
     5341 cgtagaaaag atcaaaggat cttcttgaga tccttttttt ctgcgcgtaa tctgctgctt
     5401 gcaaacaaaa aaaccaccgc taccagcggt ggtttgtttg ccggatcaag agctaccaac
     5461 tctttttccg aaggtaactg gcttcagcag agcgcagata ccaaatactg ttcttctagt
     5521 gtagccgtag ttaggccacc acttcaagaa ctctgtagca ccgcctacat acctcgctct
     5581 gctaatcctg ttaccagtgg ctgctgccag tggcgataag tcgtgtctta ccgggttgga
     5641 ctcaagacga tagttaccgg ataaggcgca gcggtcgggc tgaacggggg gttcgtgcac
     5701 acagcccagc ttggagcgaa cgacctacac cgaactgaga tacctacagc gtgagctatg
     5761 agaaagcgcc acgcttcccg aagggagaaa ggcggacagg tatccggtaa gcggcagggt
     5821 cggaacagga gagcgcacga gggagcttcc agggggaaac gcctggtatc tttatagtcc
     5881 tgtcgggttt cgccacctct gacttgagcg tcgatttttg tgatgctcgt caggggggcg
     5941 gagcctatgg aaaaacgcca gcaacgcggc ctttttacgg ttcctggcct tttgctggcc
     6001 ttttgctcac atgttctttc ctgcgttatc ccctgattct gtggataacc gtattaccgc
//

质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片

P4112/pECMV-3×FLAG-NYX人源基因质粒

P4113/pECMV-3×FLAG-ABCD3人源基因质粒

P4114/pECMV-3×FLAG-GINS4人源基因质粒

P4115/pECMV-3×FLAG-ATP5PO人源基因质粒

P4116/pECMV-3×FLAG-CLTA人源基因质粒

P4117/pECMV-3×FLAG-CHMP4B人源基因质粒

P4118/pECMV-3×FLAG-PIGC人源基因质粒

P4119/pECMV-3×FLAG-PITHD1人源基因质粒

P4120/pECMV-3×FLAG-PRAF2人源基因质粒

P4121/pECMV-3×FLAG-PRDX1人源基因质粒