DsRed-Rab5 WT狗源基因质粒

基本信息
名称：DsRed-Rab5 WT狗源基因质粒
别称: Plasmid#13050
复制子: pUC
原核抗性: Kan
筛选标记：G418
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度

质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：狗
基因类型：ORF
原核抗性：Kan
真核抗性：Neo/G418
荧光蛋白：

质粒简介
 DsRed-Rab5 WT质粒由上海烜雅生物科技有限公司提供

质粒图谱


质粒序列
LOCUS       Exported                5369 bp ds-DNA     circular SYN 26-NOV-2017
DEFINITION  synthetic circular DNA
SOURCE      synthetic DNA construct
  ORGANISM  synthetic DNA construct
REFERENCE   1  (bases 1 to 5369)
            http://www.miaolingbio.com
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..5369
                     /organism="synthetic DNA construct"
                     /mol_type="other DNA"
     enhancer        16..319
                     /label=CMV enhancer
                     /note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
     promoter        320..523
                     /label=CMV promoter
                     /note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early 
                     promoter"
     CDS             568..1242
                     /codon_start=1
                     /product="improved tetrameric variant of DsRed fluorescent 
                     protein"
                     /label=DsRed2
                     /note="mammalian codon-optimized"
                     /translation="MASSENVITEFMRFKVRMEGTVNGHEFEIEGEGEGRPYEGHNTVK
                     LKVTKGGPLPFAWDILSPQFQYGSKVYVKHPADIPDYKKLSFPEGFKWERVMNFEDGGV
                     ATVTQDSSLQDGCFIYKVKFIGVNFPSDGPVMQKKTMGWEASTERLYPRDGVLKGETHK
                     ALKLKDGGHYLVEFKSIYMAKKPVQLPGYYYVDAKLDITSHNEDYTIVEQYERTEGRHH
                     LFL"
     CDS             1261..1287
                     /codon_start=1
                     /product="HA (human influenza hemagglutinin) epitope tag"
                     /label=HA
                     /translation="YPYDVPDYA"
     misc_feature    1291..1935
                     /label=RAB5A
                     /note="NM_001003317.2"
     polyA_signal    2112..2233
                     /label=SV40 poly(A) signal
                     /note="SV40 polyadenylation signal"
     rep_origin      complement(2240..2695)
                     /direction=LEFT
                     /label=f1 ori
                     /note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow 
                     indicates direction of (+) strand synthesis"
     promoter        2722..2826
                     /gene="bla"
                     /label=AmpR promoter
     promoter        2828..3185
                     /label=SV40 promoter
                     /note="SV40 enhancer and early promoter"
     rep_origin      3036..3171
                     /label=SV40 ori
                     /note="SV40 origin of replication"
     CDS             3220..4014
                     /codon_start=1
                     /gene="aph(3')-II (or nptII)"
                     /product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
                     /label=NeoR/KanR
                     /note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418 
                     (Geneticin(R))"
                     /translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
                     VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
                     SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPAT-CPFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
                     GLAPAELFARLKASMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
                     LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
     polyA_signal    4246..4293
                     /label=HSV TK poly(A) signal
                     /note="herpes simplex virus thymidine kinase 
                     polyadenylation signal (Cole and Stacy, 1985)"
     rep_origin      4622..5210
                     /direction=RIGHT
                     /label=ori
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                     replication"
ORIGIN
        1 atatatggag ttccgcgtta cataacttac ggtaaatggc ccgcctggct gaccgcccaa
       61 cgacccccgc ccattgacgt caataatgac gtatgttccc atagtaacgc caatagggac
      121 tttccattga cgtcaatggg tggagtattt acggtaaact gcccacttgg cagtacatca
      181 agtgtatcat atgccaagta cgccccctat tgacgtcaat gacggtaaat ggcccgcctg
      241 gcattatgcc cagtacatga ccttatggga ctttcctact tggcagtaca tctacgtatt
      301 agtcatcgct attaccatgg tgatgcggtt ttggcagtac atcaatgggc gtggatagcg
      361 gtttgactca cggggatttc caagtctcca ccccattgac gtcaatggga gtttgttttg
      421 gcaccaaaat caacgggact ttccaaaatg tcgtaacaac tccgccccat tgacgcaaat
      481 gggcggtagg cgtgtacggt gggaggtcta tataagcaga gctggtttag tgaaccgtca
      541 gatccgctag cgctaccggt cgccaccatg gcctcctccg agaacgtcat caccgagttc
      601 atgcgcttca aggtgcgcat ggagggcacc gtgaacggcc acgagttcga gatcgagggc
      661 gagggcgagg gccgccccta cgagggccac aacaccgtga agctgaaggt gaccaagggc
      721 ggccccctgc ccttcgcctg ggacatcctg tccccccagt tccagtacgg ctccaaggtg
      781 tacgtgaagc accccgccga catccccgac tacaagaagc tgtccttccc cgagggcttc
      841 aagtgggagc gcgtgatgaa cttcgaggac ggcggcgtgg cgaccgtgac ccaggactcc
      901 tccctgcagg acggctgctt catctacaag gtgaagttca tcggcgtgaa cttcccctcc
      961 gacggccccg tgatgcagaa gaagaccatg ggctgggagg cctccaccga gcgcctgtac
     1021 ccccgcgacg gcgtgctgaa gggcgagacc cacaaggccc tgaagctgaa ggacggcggc
     1081 cactacctgg tggagttcaa gtccatctac atggccaaga agcccgtgca gctgcccggc
     1141 tactactacg tggacgccaa gctggacatc acctcccaca acgaggacta caccatcgtg
     1201 gagcagtacg agcgcaccga gggccgccac cacctgttcc tgagatctgc cgccatggca
     1261 tatccatatg acgtcccaga ctatgctggc gctagtcgag gcgcaacaag acccaacggg
     1321 ccaaatactg gaaataaaat atgccagttc aaactagtac ttctgggaga gtctgctgtt
     1381 ggcaaatcaa gcctagtgct tcgttttgtg aagggccaat ttcatgaatt tcaagagagt
     1441 accatagggg ctgcttttct aacccaaact gtgtgtcttg atgatacaac agtaaagttt
     1501 gaaatatggg atacagctgg tcaagaacga taccatagct tagcaccaat gtactacaga
     1561 ggagcacaag cagccatagt tgtatatgat atcacaaatg aggagtcctt tgccagagcc
     1621 aaaaactggg ttaaagaact tcagaggcaa gccagtccta acattgtaat agctttatca
     1681 ggaaacaagg ctgatcttgc aaataaaaga gctgtcgatt tccaggaagc acagtcctat
     1741 gcagatgaca acagtttatt attcatggag acatcagcta aaacatcgat gaatgtaaat
     1801 gaaatattca tggcaatagc taaaaagttg ccaaagaacg aaccacagaa tccaggagca
     1861 aattctgcca gaggaagagg agtagacctt actgaaccca cgcagccaac caggaatcag
     1921 tgttgtagta actagctcga gctcaagctt cgaattctgc agtcgacggt accgcgggcc
     1981 cgggatccac cggatctaga taactgatca taatcagcca taccacattt gtagaggttt
     2041 tacttgcttt aaaaaacctc ccacacctcc ccctgaacct gaaacataaa atgaatgcaa
     2101 ttgttgttgt taacttgttt attgcagctt ataatggtta caaataaagc aatagcatca
     2161 caaatttcac aaataaagca tttttttcac tgcattctag ttgtggtttg tccaaactca
     2221 tcaatgtatc ttaacgcgta aattgtaagc gttaatattt tgttaaaatt cgcgttaaat
     2281 ttttgttaaa tcagctcatt ttttaaccaa taggccgaaa tcggcaaaat cccttataaa
     2341 tcaaaagaat agaccgagat agggttgagt gttgttccag tttggaacaa gagtccacta
     2401 ttaaagaacg tggactccaa cgtcaaaggg cgaaaaaccg tctatcaggg cgatggccca
     2461 ctacgtgaac catcacccta atcaagtttt ttggggtcga ggtgccgtaa agcactaaat
     2521 cggaacccta aagggagccc ccgatttaga gcttgacggg gaaagccggc gaacgtggcg
     2581 agaaaggaag ggaagaaagc gaaaggagcg ggcgctaggg cgctggcaag tgtagcggtc
     2641 acgctgcgcg taaccaccac acccgccgcg cttaatgcgc cgctacaggg cgcgtcaggt
     2701 ggcacttttc ggggaaatgt gcgcggaacc cctatttgtt tatttttcta aatacattca
     2761 aatatgtatc cgctcatgag acaataaccc tgataaatgc ttcaataata ttgaaaaagg
     2821 aagagtcctg aggcggaaag aaccagctgt ggaatgtgtg tcagttaggg tgtggaaagt
     2881 ccccaggctc cccagcaggc agaagtatgc aaagcatgca tctcaattag tcagcaacca
     2941 ggtgtggaaa gtccccaggc tccccagcag gcagaagtat gcaaagcatg catctcaatt
     3001 agtcagcaac catagtcccg cccctaactc cgcccatccc gcccctaact ccgcccagtt
     3061 ccgcccattc tccgccccat ggctgactaa ttttttttat ttatgcagag gccgaggccg
     3121 cctcggcctc tgagctattc cagaagtagt gaggaggctt ttttggaggc ctaggctttt
     3181 gcaaagatcg atcaagagac aggatgagga tcgtttcgca tgattgaaca agatggattg
     3241 cacgcaggtt ctccggccgc ttgggtggag aggctattcg gctatgactg ggcacaacag
     3301 acaatcggct gctctgatgc cgccgtgttc cggctgtcag cgcaggggcg cccggttctt
     3361 tttgtcaaga ccgacctgtc cggtgccctg aatgaactgc aagacgaggc agcgcggcta
     3421 tcgtggctgg ccacgacggg cgttccttgc gcagctgtgc tcgacgttgt cactgaagcg
     3481 ggaagggact ggctgctatt gggcgaagtg ccggggcagg atctcctgtc atctcacctt
     3541 gctcctgccg agaaagtatc catcatggct gatgcaatgc ggcggctgca tacgcttgat
     3601 ccggctacct gcccattcga ccaccaagcg aaacatcgca tcgagcgagc acgtactcgg
     3661 atggaagccg gtcttgtcga tcaggatgat ctggacgaag agcatcaggg gctcgcgcca
     3721 gccgaactgt tcgccaggct caaggcgagc atgcccgacg gcgaggatct cgtcgtgacc
     3781 catggcgatg cctgcttgcc gaatatcatg gtggaaaatg gccgcttttc tggattcatc
     3841 gactgtggcc ggctgggtgt ggcggaccgc tatcaggaca tagcgttggc tacccgtgat
     3901 attgctgaag agcttggcgg cgaatgggct gaccgcttcc tcgtgcttta cggtatcgcc
     3961 gctcccgatt cgcagcgcat cgccttctat cgccttcttg acgagttctt ctgagcggga
     4021 ctctggggtt cgaaatgacc gaccaagcga cgcccaacct gccatcacga gatttcgatt
     4081 ccaccgccgc cttctatgaa aggttgggct tcggaatcgt tttccgggac gccggctgga
     4141 tgatcctcca gcgcggggat ctcatgctgg agttcttcgc ccaccctagg gggaggctaa
     4201 ctgaaacacg gaaggagaca ataccggaag gaacccgcgc tatgacggca ataaaaagac
     4261 agaataaaac gcacggtgtt gggtcgtttg ttcataaacg cggggttcgg tcccagggct
     4321 ggcactctgt cgatacccca ccgagacccc attggggcca atacgcccgc gtttcttcct
     4381 tttccccacc ccacccccca agttcgggtg aaggcccagg gctcgcagcc aacgtcgggg
     4441 cggcaggccc tgccatagcc tcaggttact catatatact ttagattgat ttaaaacttc
     4501 atttttaatt taaaaggatc taggtgaaga tcctttttga taatctcatg accaaaatcc
     4561 cttaacgtga gttttcgttc cactgagcgt cagaccccgt agaaaagatc aaaggatctt
     4621 cttgagatcc tttttttctg cgcgtaatct gctgcttgca aacaaaaaaa ccaccgctac
     4681 cagcggtggt ttgtttgccg gatcaagagc taccaactct ttttccgaag gtaactggct
     4741 tcagcagagc gcagatacca aatactgttc ttctagtgta gccgtagtta ggccaccact
     4801 tcaagaactc tgtagcaccg cctacatacc tcgctctgct aatcctgtta ccagtggctg
     4861 ctgccagtgg cgataagtcg tgtcttaccg ggttggactc aagacgatag ttaccggata
     4921 aggcgcagcg gtcgggctga acggggggtt cgtgcacaca gcccagcttg gagcgaacga
     4981 cctacaccga actgagatac ctacagcgtg agctatgaga aagcgccacg cttcccgaag
     5041 ggagaaaggc ggacaggtat ccggtaagcg gcagggtcgg aacaggagag cgcacgaggg
     5101 agcttccagg gggaaacgcc tggtatcttt atagtcctgt cgggtttcgc cacctctgac
     5161 ttgagcgtcg atttttgtga tgctcgtcag gggggcggag cctatggaaa aacgccagca
     5221 acgcggcctt tttacggttc ctggcctttt gctggccttt tgctcacatg ttctttcctg
     5281 cgttatcccc tgattctgtg gataaccgta ttaccgccat gcattagtta ttaatagtaa
     5341 tcaattacgg ggtcattagt tcatagccc
//

质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片

P4213/pCMV-SPORT6-SIPA1人源基因质粒

P4214/pCMV-SPORT6-APIP人源基因质粒

P4215/pCMV-SPORT6-RNPC3人源基因质粒

P4216/pCMV-SPORT6-KRAS（1点突变）人源基因质粒

P4217/pCMV-SPORT6-P4HB人源基因质粒

P4218/pCMV-SPORT6-IL1B人源基因质粒

P4219/pCMV-SPORT6-DDIT4L人源基因质粒

P4220/pCMV-SPORT6-ALG11人源基因质粒

P4221/pCMV-SPORT6-ALDH3B1人源基因质粒

P4222/pCMV-SPORT6-PHGDH（1同义突变）人源基因质粒