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- 2026年01月21日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
HH3R;GPCR97
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pEGFP-HRH3人源基因质粒
别称: HH3R;GPCR97
启动子：CMV
复制子: pUC
终止子: SV40 poly(A) signal
质粒大小：6044bp
质粒标签：C-EGFP
原核抗性: Kan
筛选标记：G418
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
备注: NM_007232.2
质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Kan
真核抗性：Neo/G418
荧光蛋白：绿色
质粒简介
pEGFP-HRH3质粒是一个哺乳细胞过表达质粒，CMV启动子驱动HRH3人源基因和EGFP绿色荧光蛋白融合表达。本质粒由武汉淼灵生物科技有限公司构建并共享至淼灵质粒平台。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 6044 bp ds-DNA circular SYN 02-SEP-2017
DEFINITION synthetic circular DNA
KEYWORDS pEGFP-HRH3
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 6044)
AUTHORS admin
TITLE Direct Submission
http://www.miaolingbio.com
REFERENCE 2 (bases 1 to 6044)
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..6044
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
enhancer 61..364
/label=CMV enhancer
/note="CMV enhancer;human cytomegalovirus immediate early
enhancer"
promoter 365..568
/label=CMV promoter
/note="CMV promoter;human cytomegalovirus (CMV) immediate
early promoter"
misc_feature 634..1968
/label=HRH3
/note="Homo sapiens histamine receptor H3 (HRH3), mRNA
NCBI Reference Sequence: NM_007232.2"
CDS 1990..2709
/codon_start=1
/product="enhanced GFP"
/label=EGFP
/note="EGFP;mammalian codon-optimized"
/translation="MVSKGEELFTGVVPILVELDGDVNGHKFSVSGEGEGDATYGKLTL
KFICTTGKLPVPWPTLVTTLTYGVQCFSRYPDHMKQHDFFKSAMPEGYVQERTIFFKDD
GNYKTRAEVKFEGDTLVNRIELKGIDFKEDGNILGHKLEYNYNSHNVYIMADKQKNGIK
VNFKIRHNIEDGSVQLADHYQQNTPIGDGPVLLPDNHYLSTQSALSKDPNEKRDHMVLL
EFVTAAGITLGMDELYK"
polyA_signal 2832..2953
/label=SV40 poly(A) signal
/note="SV40 poly(A) signal;SV40 polyadenylation signal"
rep_origin complement(2960..3415)
/direction=LEFT
/label=f1 ori
/note="f1 ori;f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
promoter 3442..3546
/gene="bla"
/label=bla AmpR promoter
/note="AmpR promoter"
promoter 3548..3905
/label=SV40 promoter
/note="SV40 promoter;SV40 enhancer and early promoter"
rep_origin 3756..3891
/label=SV40 ori
/note="SV40 ori;SV40 origin of replication"
CDS 3940..4734
/codon_start=1
/gene="aph(3')-II (or nptII)"
/product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
/label=NeoR/KanR
/note="NeoR/KanR;confers resistance to neomycin, kanamycin,
and G418 (Geneticin(R))"
/translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPAT-CPFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
GLAPAELFARLKASMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
polyA_signal 4966..5013
/label=HSV TK poly(A) signal
/note="HSV TK poly(A) signal;herpesvirus thymidine kinase
polyadenylation signal"
rep_origin 5342..5930
/direction=RIGHT
/label=ori
/note="ori;high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
ORIGIN
1 tagttattaa tagtaatcaa ttacggggtc attagttcat agcccatata tggagttccg
61 cgttacataa cttacggtaa atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc cccgcccatt
121 gacgtcaata atgacgtatg ttcccatagt aacgccaata gggactttcc attgacgtca
181 atgggtggag tatttacggt aaactgccca cttggcagta catcaagtgt atcatatgcc
241 aagtacgccc cctattgacg tcaatgacgg taaatggccc gcctggcatt atgcccagta
301 catgacctta tgggactttc ctacttggca gtacatctac gtattagtca tcgctattac
361 catggtgatg cggttttggc agtacatcaa tgggcgtgga tagcggtttg actcacgggg
421 atttccaagt ctccacccca ttgacgtcaa tgggagtttg ttttggcacc aaaatcaacg
481 ggactttcca aaatgtcgta acaactccgc cccattgacg caaatgggcg gtaggcgtgt
541 acggtgggag gtctatataa gcagagctgg tttagtgaac cgtcagatcc gctagcgcta
601 ccggactcag atctcgagct caagcttgcc accatggagc gcgcgccgcc cgacgggccg
661 ctgaacgctt cgggggcgct ggcgggcgag gcggcggcgg cgggcggggc gcgcggcttc
721 tcggcagcct ggaccgcggt gctggccgcg ctcatggcgc tgctcatcgt ggccacggtg
781 ctgggcaacg cgctggtcat gctcgccttc gtggccgact cgagcctccg cacccagaac
841 aacttcttcc tgctcaacct cgccatctcc gacttcctcg tcggcgcctt ctgcatccca
901 ctgtatgtac cctacgtgct gacaggccgc tggaccttcg gccggggcct ctgcaagctg
961 tggctggtag tggactacct gctgtgcacc tcctctgcct tcaacatcgt gctcatcagc
1021 tacgaccgct tcctgtcggt cacccgagcg gtctcatacc gggcccagca gggtgacacg
1081 cggcgggcag tgcggaagat gctgctggtg tgggtgctgg ccttcctgct gtacggacca
1141 gccatcctga gctgggagta cctgtccggg ggcagctcca tccccgaggg ccactgctat
1201 gccgagttct tctacaactg gtacttcctc atcacggctt ccaccctgga gttctttacg
1261 cccttcctca gcgtcacctt ctttaacctc agcatctacc tgaacatcca gaggcgcacc
1321 cgcctccggc tggatggggc tcgagaggca gccggccccg agccccctcc cgaggcccag
1381 ccctcaccac ccccaccgcc tggctgctgg ggctgctggc agaaggggca cggggaggcc
1441 atgccgctgc acaggtatgg ggtgggtgag gcggccgtag gcgctgaggc cggggaggcg
1501 accctcgggg gtggcggtgg gggcggctcc gtggcttcac ccacctccag ctccggcagc
1561 tcctcgaggg gcactgagag gccgcgctca ctcaagaggg gctccaagcc gtcggcgtcc
1621 tcggcctcgc tggagaagcg catgaagatg gtgtcccaga gcttcaccca gcgctttcgg
1681 ctgtctcggg acaggaaagt ggccaagtcg ctggccgtca tcgtgagcat ctttgggctc
1741 tgctgggccc catacacgct gctgatgatc atccgggccg cctgccatgg ccactgcgtc
1801 cctgactact ggtacgaaac ctccttctgg ctcctgtggg ccaactcggc tgtcaaccct
1861 gtcctctacc ctctgtgcca ccacagcttc cgccgggcct tcaccaagct gctctgcccc
1921 cagaagctca aaatccagcc ccacagctcc ctggagcact gctggaagac ggatccaccg
1981 gtcgccacca tggtgagcaa gggcgaggag ctgttcaccg gggtggtgcc catcctggtc
2041 gagctggacg gcgacgtaaa cggccacaag ttcagcgtgt ccggcgaggg cgagggcgat
2101 gccacctacg gcaagctgac cctgaagttc atctgcacca ccggcaagct gcccgtgccc
2161 tggcccaccc tcgtgaccac cctgacctac ggcgtgcagt gcttcagccg ctaccccgac
2221 cacatgaagc agcacgactt cttcaagtcc gccatgcccg aaggctacgt ccaggagcgc
2281 accatcttct tcaaggacga cggcaactac aagacccgcg ccgaggtgaa gttcgagggc
2341 gacaccctgg tgaaccgcat cgagctgaag ggcatcgact tcaaggagga cggcaacatc
2401 ctggggcaca agctggagta caactacaac agccacaacg tctatatcat ggccgacaag
2461 cagaagaacg gcatcaaggt gaacttcaag atccgccaca acatcgagga cggcagcgtg
2521 cagctcgccg accactacca gcagaacacc cccatcggcg acggccccgt gctgctgccc
2581 gacaaccact acctgagcac ccagtccgcc ctgagcaaag accccaacga gaagcgcgat
2641 cacatggtcc tgctggagtt cgtgaccgcc gccgggatca ctctcggcat ggacgagctg
2701 tacaagtaaa gcggccgcga ctctagatca taatcagcca taccacattt gtagaggttt
2761 tacttgcttt aaaaaacctc ccacacctcc ccctgaacct gaaacataaa atgaatgcaa
2821 ttgttgttgt taacttgttt attgcagctt ataatggtta caaataaagc aatagcatca
2881 caaatttcac aaataaagca tttttttcac tgcattctag ttgtggtttg tccaaactca
2941 tcaatgtatc ttaaggcgta aattgtaagc gttaatattt tgttaaaatt cgcgttaaat
3001 ttttgttaaa tcagctcatt ttttaaccaa taggccgaaa tcggcaaaat cccttataaa
3061 tcaaaagaat agaccgagat agggttgagt gttgttccag tttggaacaa gagtccacta
3121 ttaaagaacg tggactccaa cgtcaaaggg cgaaaaaccg tctatcaggg cgatggccca
3181 ctacgtgaac catcacccta atcaagtttt ttggggtcga ggtgccgtaa agcactaaat
3241 cggaacccta aagggagccc ccgatttaga gcttgacggg gaaagccggc gaacgtggcg
3301 agaaaggaag ggaagaaagc gaaaggagcg ggcgctaggg cgctggcaag tgtagcggtc
3361 acgctgcgcg taaccaccac acccgccgcg cttaatgcgc cgctacaggg cgcgtcaggt
3421 ggcacttttc ggggaaatgt gcgcggaacc cctatttgtt tatttttcta aatacattca
3481 aatatgtatc cgctcatgag acaataaccc tgataaatgc ttcaataata ttgaaaaagg
3541 aagagtcctg aggcggaaag aaccagctgt ggaatgtgtg tcagttaggg tgtggaaagt
3601 ccccaggctc cccagcaggc agaagtatgc aaagcatgca tctcaattag tcagcaacca
3661 ggtgtggaaa gtccccaggc tccccagcag gcagaagtat gcaaagcatg catctcaatt
3721 agtcagcaac catagtcccg cccctaactc cgcccatccc gcccctaact ccgcccagtt
3781 ccgcccattc tccgccccat ggctgactaa ttttttttat ttatgcagag gccgaggccg
3841 cctcggcctc tgagctattc cagaagtagt gaggaggctt ttttggaggc ctaggctttt
3901 gcaaagatcg atcaagagac aggatgagga tcgtttcgca tgattgaaca agatggattg
3961 cacgcaggtt ctccggccgc ttgggtggag aggctattcg gctatgactg ggcacaacag
4021 acaatcggct gctctgatgc cgccgtgttc cggctgtcag cgcaggggcg cccggttctt
4081 tttgtcaaga ccgacctgtc cggtgccctg aatgaactgc aagacgaggc agcgcggcta
4141 tcgtggctgg ccacgacggg cgttccttgc gcagctgtgc tcgacgttgt cactgaagcg
4201 ggaagggact ggctgctatt gggcgaagtg ccggggcagg atctcctgtc atctcacctt
4261 gctcctgccg agaaagtatc catcatggct gatgcaatgc ggcggctgca tacgcttgat
4321 ccggctacct gcccattcga ccaccaagcg aaacatcgca tcgagcgagc acgtactcgg
4381 atggaagccg gtcttgtcga tcaggatgat ctggacgaag agcatcaggg gctcgcgcca
4441 gccgaactgt tcgccaggct caaggcgagc atgcccgacg gcgaggatct cgtcgtgacc
4501 catggcgatg cctgcttgcc gaatatcatg gtggaaaatg gccgcttttc tggattcatc
4561 gactgtggcc ggctgggtgt ggcggaccgc tatcaggaca tagcgttggc tacccgtgat
4621 attgctgaag agcttggcgg cgaatgggct gaccgcttcc tcgtgcttta cggtatcgcc
4681 gctcccgatt cgcagcgcat cgccttctat cgccttcttg acgagttctt ctgagcggga
4741 ctctggggtt cgaaatgacc gaccaagcga cgcccaacct gccatcacga gatttcgatt
4801 ccaccgccgc cttctatgaa aggttgggct tcggaatcgt tttccgggac gccggctgga
4861 tgatcctcca gcgcggggat ctcatgctgg agttcttcgc ccaccctagg gggaggctaa
4921 ctgaaacacg gaaggagaca ataccggaag gaacccgcgc tatgacggca ataaaaagac
4981 agaataaaac gcacggtgtt gggtcgtttg ttcataaacg cggggttcgg tcccagggct
5041 ggcactctgt cgatacccca ccgagacccc attggggcca atacgcccgc gtttcttcct
5101 tttccccacc ccacccccca agttcgggtg aaggcccagg gctcgcagcc aacgtcgggg
5161 cggcaggccc tgccatagcc tcaggttact catatatact ttagattgat ttaaaacttc
5221 atttttaatt taaaaggatc taggtgaaga tcctttttga taatctcatg accaaaatcc
5281 cttaacgtga gttttcgttc cactgagcgt cagaccccgt agaaaagatc aaaggatctt
5341 cttgagatcc tttttttctg cgcgtaatct gctgcttgca aacaaaaaaa ccaccgctac
5401 cagcggtggt ttgtttgccg gatcaagagc taccaactct ttttccgaag gtaactggct
5461 tcagcagagc gcagatacca aatactgtcc ttctagtgta gccgtagtta ggccaccact
5521 tcaagaactc tgtagcaccg cctacatacc tcgctctgct aatcctgtta ccagtggctg
5581 ctgccagtgg cgataagtcg tgtcttaccg ggttggactc aagacgatag ttaccggata
5641 aggcgcagcg gtcgggctga acggggggtt cgtgcacaca gcccagcttg gagcgaacga
5701 cctacaccga actgagatac ctacagcgtg agctatgaga aagcgccacg cttcccgaag
5761 ggagaaaggc ggacaggtat ccggtaagcg gcagggtcgg aacaggagag cgcacgaggg
5821 agcttccagg gggaaacgcc tggtatcttt atagtcctgt cgggtttcgc cacctctgac
5881 ttgagcgtcg atttttgtga tgctcgtcag gggggcggag cctatggaaa aacgccagca
5941 acgcggcctt tttacggttc ctggcctttt gctggccttt tgctcacatg ttctttcctg
6001 cgttatcccc tgattctgtg gataaccgta ttaccgccat gcat
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pEGFP-HRH3人源基因质粒
别称: HH3R;GPCR97
启动子：CMV
复制子: pUC
终止子: SV40 poly(A) signal
质粒大小：6044bp
质粒标签：C-EGFP
原核抗性: Kan
筛选标记：G418
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
备注: NM_007232.2
质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Kan
真核抗性：Neo/G418
荧光蛋白：绿色
质粒简介
pEGFP-HRH3质粒是一个哺乳细胞过表达质粒，CMV启动子驱动HRH3人源基因和EGFP绿色荧光蛋白融合表达。本质粒由武汉淼灵生物科技有限公司构建并共享至淼灵质粒平台。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 6044 bp ds-DNA circular SYN 02-SEP-2017
DEFINITION synthetic circular DNA
KEYWORDS pEGFP-HRH3
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 6044)
AUTHORS admin
TITLE Direct Submission
http://www.miaolingbio.com
REFERENCE 2 (bases 1 to 6044)
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..6044
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
enhancer 61..364
/label=CMV enhancer
/note="CMV enhancer;human cytomegalovirus immediate early
enhancer"
promoter 365..568
/label=CMV promoter
/note="CMV promoter;human cytomegalovirus (CMV) immediate
early promoter"
misc_feature 634..1968
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NCBI Reference Sequence: NM_007232.2"
CDS 1990..2709
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/label=EGFP
/note="EGFP;mammalian codon-optimized"
/translation="MVSKGEELFTGVVPILVELDGDVNGHKFSVSGEGEGDATYGKLTL
KFICTTGKLPVPWPTLVTTLTYGVQCFSRYPDHMKQHDFFKSAMPEGYVQERTIFFKDD
GNYKTRAEVKFEGDTLVNRIELKGIDFKEDGNILGHKLEYNYNSHNVYIMADKQKNGIK
VNFKIRHNIEDGSVQLADHYQQNTPIGDGPVLLPDNHYLSTQSALSKDPNEKRDHMVLL
EFVTAAGITLGMDELYK"
polyA_signal 2832..2953
/label=SV40 poly(A) signal
/note="SV40 poly(A) signal;SV40 polyadenylation signal"
rep_origin complement(2960..3415)
/direction=LEFT
/label=f1 ori
/note="f1 ori;f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
promoter 3442..3546
/gene="bla"
/label=bla AmpR promoter
/note="AmpR promoter"
promoter 3548..3905
/label=SV40 promoter
/note="SV40 promoter;SV40 enhancer and early promoter"
rep_origin 3756..3891
/label=SV40 ori
/note="SV40 ori;SV40 origin of replication"
CDS 3940..4734
/codon_start=1
/gene="aph(3')-II (or nptII)"
/product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
/label=NeoR/KanR
/note="NeoR/KanR;confers resistance to neomycin, kanamycin,
and G418 (Geneticin(R))"
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SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPAT-CPFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
GLAPAELFARLKASMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
polyA_signal 4966..5013
/label=HSV TK poly(A) signal
/note="HSV TK poly(A) signal;herpesvirus thymidine kinase
polyadenylation signal"
rep_origin 5342..5930
/direction=RIGHT
/label=ori
/note="ori;high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
ORIGIN
1 tagttattaa tagtaatcaa ttacggggtc attagttcat agcccatata tggagttccg
61 cgttacataa cttacggtaa atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc cccgcccatt
121 gacgtcaata atgacgtatg ttcccatagt aacgccaata gggactttcc attgacgtca
181 atgggtggag tatttacggt aaactgccca cttggcagta catcaagtgt atcatatgcc
241 aagtacgccc cctattgacg tcaatgacgg taaatggccc gcctggcatt atgcccagta
301 catgacctta tgggactttc ctacttggca gtacatctac gtattagtca tcgctattac
361 catggtgatg cggttttggc agtacatcaa tgggcgtgga tagcggtttg actcacgggg
421 atttccaagt ctccacccca ttgacgtcaa tgggagtttg ttttggcacc aaaatcaacg
481 ggactttcca aaatgtcgta acaactccgc cccattgacg caaatgggcg gtaggcgtgt
541 acggtgggag gtctatataa gcagagctgg tttagtgaac cgtcagatcc gctagcgcta
601 ccggactcag atctcgagct caagcttgcc accatggagc gcgcgccgcc cgacgggccg
661 ctgaacgctt cgggggcgct ggcgggcgag gcggcggcgg cgggcggggc gcgcggcttc
721 tcggcagcct ggaccgcggt gctggccgcg ctcatggcgc tgctcatcgt ggccacggtg
781 ctgggcaacg cgctggtcat gctcgccttc gtggccgact cgagcctccg cacccagaac
841 aacttcttcc tgctcaacct cgccatctcc gacttcctcg tcggcgcctt ctgcatccca
901 ctgtatgtac cctacgtgct gacaggccgc tggaccttcg gccggggcct ctgcaagctg
961 tggctggtag tggactacct gctgtgcacc tcctctgcct tcaacatcgt gctcatcagc
1021 tacgaccgct tcctgtcggt cacccgagcg gtctcatacc gggcccagca gggtgacacg
1081 cggcgggcag tgcggaagat gctgctggtg tgggtgctgg ccttcctgct gtacggacca
1141 gccatcctga gctgggagta cctgtccggg ggcagctcca tccccgaggg ccactgctat
1201 gccgagttct tctacaactg gtacttcctc atcacggctt ccaccctgga gttctttacg
1261 cccttcctca gcgtcacctt ctttaacctc agcatctacc tgaacatcca gaggcgcacc
1321 cgcctccggc tggatggggc tcgagaggca gccggccccg agccccctcc cgaggcccag
1381 ccctcaccac ccccaccgcc tggctgctgg ggctgctggc agaaggggca cggggaggcc
1441 atgccgctgc acaggtatgg ggtgggtgag gcggccgtag gcgctgaggc cggggaggcg
1501 accctcgggg gtggcggtgg gggcggctcc gtggcttcac ccacctccag ctccggcagc
1561 tcctcgaggg gcactgagag gccgcgctca ctcaagaggg gctccaagcc gtcggcgtcc
1621 tcggcctcgc tggagaagcg catgaagatg gtgtcccaga gcttcaccca gcgctttcgg
1681 ctgtctcggg acaggaaagt ggccaagtcg ctggccgtca tcgtgagcat ctttgggctc
1741 tgctgggccc catacacgct gctgatgatc atccgggccg cctgccatgg ccactgcgtc
1801 cctgactact ggtacgaaac ctccttctgg ctcctgtggg ccaactcggc tgtcaaccct
1861 gtcctctacc ctctgtgcca ccacagcttc cgccgggcct tcaccaagct gctctgcccc
1921 cagaagctca aaatccagcc ccacagctcc ctggagcact gctggaagac ggatccaccg
1981 gtcgccacca tggtgagcaa gggcgaggag ctgttcaccg gggtggtgcc catcctggtc
2041 gagctggacg gcgacgtaaa cggccacaag ttcagcgtgt ccggcgaggg cgagggcgat
2101 gccacctacg gcaagctgac cctgaagttc atctgcacca ccggcaagct gcccgtgccc
2161 tggcccaccc tcgtgaccac cctgacctac ggcgtgcagt gcttcagccg ctaccccgac
2221 cacatgaagc agcacgactt cttcaagtcc gccatgcccg aaggctacgt ccaggagcgc
2281 accatcttct tcaaggacga cggcaactac aagacccgcg ccgaggtgaa gttcgagggc
2341 gacaccctgg tgaaccgcat cgagctgaag ggcatcgact tcaaggagga cggcaacatc
2401 ctggggcaca agctggagta caactacaac agccacaacg tctatatcat ggccgacaag
2461 cagaagaacg gcatcaaggt gaacttcaag atccgccaca acatcgagga cggcagcgtg
2521 cagctcgccg accactacca gcagaacacc cccatcggcg acggccccgt gctgctgccc
2581 gacaaccact acctgagcac ccagtccgcc ctgagcaaag accccaacga gaagcgcgat
2641 cacatggtcc tgctggagtt cgtgaccgcc gccgggatca ctctcggcat ggacgagctg
2701 tacaagtaaa gcggccgcga ctctagatca taatcagcca taccacattt gtagaggttt
2761 tacttgcttt aaaaaacctc ccacacctcc ccctgaacct gaaacataaa atgaatgcaa
2821 ttgttgttgt taacttgttt attgcagctt ataatggtta caaataaagc aatagcatca
2881 caaatttcac aaataaagca tttttttcac tgcattctag ttgtggtttg tccaaactca
2941 tcaatgtatc ttaaggcgta aattgtaagc gttaatattt tgttaaaatt cgcgttaaat
3001 ttttgttaaa tcagctcatt ttttaaccaa taggccgaaa tcggcaaaat cccttataaa
3061 tcaaaagaat agaccgagat agggttgagt gttgttccag tttggaacaa gagtccacta
3121 ttaaagaacg tggactccaa cgtcaaaggg cgaaaaaccg tctatcaggg cgatggccca
3181 ctacgtgaac catcacccta atcaagtttt ttggggtcga ggtgccgtaa agcactaaat
3241 cggaacccta aagggagccc ccgatttaga gcttgacggg gaaagccggc gaacgtggcg
3301 agaaaggaag ggaagaaagc gaaaggagcg ggcgctaggg cgctggcaag tgtagcggtc
3361 acgctgcgcg taaccaccac acccgccgcg cttaatgcgc cgctacaggg cgcgtcaggt
3421 ggcacttttc ggggaaatgt gcgcggaacc cctatttgtt tatttttcta aatacattca
3481 aatatgtatc cgctcatgag acaataaccc tgataaatgc ttcaataata ttgaaaaagg
3541 aagagtcctg aggcggaaag aaccagctgt ggaatgtgtg tcagttaggg tgtggaaagt
3601 ccccaggctc cccagcaggc agaagtatgc aaagcatgca tctcaattag tcagcaacca
3661 ggtgtggaaa gtccccaggc tccccagcag gcagaagtat gcaaagcatg catctcaatt
3721 agtcagcaac catagtcccg cccctaactc cgcccatccc gcccctaact ccgcccagtt
3781 ccgcccattc tccgccccat ggctgactaa ttttttttat ttatgcagag gccgaggccg
3841 cctcggcctc tgagctattc cagaagtagt gaggaggctt ttttggaggc ctaggctttt
3901 gcaaagatcg atcaagagac aggatgagga tcgtttcgca tgattgaaca agatggattg
3961 cacgcaggtt ctccggccgc ttgggtggag aggctattcg gctatgactg ggcacaacag
4021 acaatcggct gctctgatgc cgccgtgttc cggctgtcag cgcaggggcg cccggttctt
4081 tttgtcaaga ccgacctgtc cggtgccctg aatgaactgc aagacgaggc agcgcggcta
4141 tcgtggctgg ccacgacggg cgttccttgc gcagctgtgc tcgacgttgt cactgaagcg
4201 ggaagggact ggctgctatt gggcgaagtg ccggggcagg atctcctgtc atctcacctt
4261 gctcctgccg agaaagtatc catcatggct gatgcaatgc ggcggctgca tacgcttgat
4321 ccggctacct gcccattcga ccaccaagcg aaacatcgca tcgagcgagc acgtactcgg
4381 atggaagccg gtcttgtcga tcaggatgat ctggacgaag agcatcaggg gctcgcgcca
4441 gccgaactgt tcgccaggct caaggcgagc atgcccgacg gcgaggatct cgtcgtgacc
4501 catggcgatg cctgcttgcc gaatatcatg gtggaaaatg gccgcttttc tggattcatc
4561 gactgtggcc ggctgggtgt ggcggaccgc tatcaggaca tagcgttggc tacccgtgat
4621 attgctgaag agcttggcgg cgaatgggct gaccgcttcc tcgtgcttta cggtatcgcc
4681 gctcccgatt cgcagcgcat cgccttctat cgccttcttg acgagttctt ctgagcggga
4741 ctctggggtt cgaaatgacc gaccaagcga cgcccaacct gccatcacga gatttcgatt
4801 ccaccgccgc cttctatgaa aggttgggct tcggaatcgt tttccgggac gccggctgga
4861 tgatcctcca gcgcggggat ctcatgctgg agttcttcgc ccaccctagg gggaggctaa
4921 ctgaaacacg gaaggagaca ataccggaag gaacccgcgc tatgacggca ataaaaagac
4981 agaataaaac gcacggtgtt gggtcgtttg ttcataaacg cggggttcgg tcccagggct
5041 ggcactctgt cgatacccca ccgagacccc attggggcca atacgcccgc gtttcttcct
5101 tttccccacc ccacccccca agttcgggtg aaggcccagg gctcgcagcc aacgtcgggg
5161 cggcaggccc tgccatagcc tcaggttact catatatact ttagattgat ttaaaacttc
5221 atttttaatt taaaaggatc taggtgaaga tcctttttga taatctcatg accaaaatcc
5281 cttaacgtga gttttcgttc cactgagcgt cagaccccgt agaaaagatc aaaggatctt
5341 cttgagatcc tttttttctg cgcgtaatct gctgcttgca aacaaaaaaa ccaccgctac
5401 cagcggtggt ttgtttgccg gatcaagagc taccaactct ttttccgaag gtaactggct
5461 tcagcagagc gcagatacca aatactgtcc ttctagtgta gccgtagtta ggccaccact
5521 tcaagaactc tgtagcaccg cctacatacc tcgctctgct aatcctgtta ccagtggctg
5581 ctgccagtgg cgataagtcg tgtcttaccg ggttggactc aagacgatag ttaccggata
5641 aggcgcagcg gtcgggctga acggggggtt cgtgcacaca gcccagcttg gagcgaacga
5701 cctacaccga actgagatac ctacagcgtg agctatgaga aagcgccacg cttcccgaag
5761 ggagaaaggc ggacaggtat ccggtaagcg gcagggtcgg aacaggagag cgcacgaggg
5821 agcttccagg gggaaacgcc tggtatcttt atagtcctgt cgggtttcgc cacctctgac
5881 ttgagcgtcg atttttgtga tgctcgtcag gggggcggag cctatggaaa aacgccagca
5941 acgcggcctt tttacggttc ctggcctttt gctggccttt tgctcacatg ttctttcctg
6001 cgttatcccc tgattctgtg gataaccgta ttaccgccat gcat
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P1154/pCMV-FLAG-SIRT4人源基因质粒 |
| P1166/pECMV-3×FLAG-LGALS13人源基因质粒 |
| P1167/pECMV-3×FLAG-IL4人源基因质粒 |
| P1168/pECMV-3×FLAG-IL6人源基因质粒 |
| P3802/pECMV-3×FLAG-MED10人源基因质粒 |
| P4927/pECMV-3×FLAG-YTHDF3人源基因质粒 |
| P4928/pECMV-3×FLAG-EIF4G2(1同义突变）人源基因质粒 |
| P4892/pCDNA3.1-3×HA-HDAC4人源基因质粒 |
| P4933/pCDNA3.0-HA-KPNA1人源基因质粒 |
| P4941/pCDNA3.1-PINK1-Myc人源基因质粒 |
| P4942/pECMV-3×FLAG-METTL14人源基因质粒 |
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文献和实验相关实验
Restriction Map and Multiple Cloning Site of pEGFP-N2. (Unique restriction sites are in color or bold.) The Not I site follows the EGFP stop codon. The Nhe I site cannot be used for fusions since it contains an in-frame stop codon
多克隆位点区 Restriction Map and Multiple Cloning Site of pEGFP-N1. (Unique restriction sites are in color or bold.) The Not I site follows the EGFP stop codon. The Xba I site (*) is methylated in the DNA provided by CLONTECH. If you wish to digest
多克隆位点区（MCS） Restriction Map and Multiple Cloning Site of pEGFP-C2. (Unique restriction sites are in color or bold.) Note that the Eag I site is not unique.) The Xba I site cannot be used for fusions
pEGFP-HRH3人源基因质粒
￥100 - 1000
