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- 保存条件:
-20
- 保质期:
2年
- 英文名:
pG-Tf2
- 库存:
100
- 供应商:
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格:
干粉/液体
名称:pGro7大肠伴侣质粒
别称: pG-Tf2
| 质粒分类: | 大肠杆菌载体;伴侣分子表达质粒 |
|---|---|
| 质粒大小: | 8.3Kb |
| 原核抗性: | Chl |
| 筛选标记: | 四环素Tet |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
| 表达宿主: | 大肠杆菌 |
| 培养条件: | 37℃,有氧,LB |
| 诱导方式: | 阿拉伯糖 |
| 备注: | 伴侣分子表达质粒 |
质粒属性
| 载体宿主: | 大肠杆菌 |
|---|---|
| 载体用途: | 包装辅助 |
| 基因种属: | |
| 基因类型: | ORF |
| 原核抗性: | Chl |
| 真核抗性: | |
| 荧光蛋白: |
质粒简介
pGro7质粒由上海烜雅生物科技有限公司提供
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 8290 bp ds-DNA circular SYN 13-SEP-2016
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS Untitled 2
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 8290)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Tuesday, September 13, 2016 from SnapGene Viewer 3.1.4
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..8290
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
protein_bind 30..47
/gene="tetO"
/bound_moiety="tetracycline repressor TetR"
/note="tet operator"
/note="bacterial operator O2 for the tetR and tetA genes"
RBS 98..109
/note="strong bacterial ribosome binding site (Elowitz and
Leibler, 2000)"
CDS 206..259
/codon_start=1
/product="GroES chaperone mobile loop that interacts with
GroEL"
/note="S loop"
/translation="EVETKSAGGIVLTGSAAA"
terminator 4387..4473
/gene="Escherichia coli rrnB"
/note="rrnB T1 terminator"
/note="transcription terminator T1 from the E. coli rrnB
gene"
promoter 4533..4588
/gene="tetR"
/note="tetR/tetA promoters"
/note="overlapping promoters for bacterial tetR and tetA"
protein_bind 4534..4552
/gene="tetO"
/bound_moiety="tetracycline repressor TetR"
/note="tet operator"
/note="bacterial operator O2 for the tetR and tetA genes"
protein_bind 4564..4582
/bound_moiety="tetracycline repressor TetR"
/note="tet operator"
/note="bacterial operator O1 for the tetR and tetA genes"
CDS 4607..5230
/codon_start=1
/gene="tetR from transposon Tn10"
/product="tetracycline repressor TetR"
/note="TetR"
/note="TetR binds to the tetracycline operator tetO to
inhibit transcription. This inhibition can be relieved by
adding tetracycline or doxycycline."
/translation="MSRLDKSKVINSALELLNEVGIEGLTTRKLAQKLGVEQPTLYWHV
KNKRALLDALAIEMLDRHHTHFCPLEGESWQDFLRNNAKSFRCALLSHRDGAKVHLGTR
PTEKQYETLENQLAFLCQQGFSLENALYALSAVGHFTLGCVLEDQEHQVAKEERETPTT
DSMPPLLRQAIELFDHQGAEPAFLFGLELIICGLEKQLKCESGS"
CDS complement(6245..6904)
/codon_start=1
/gene="cat"
/product="chloramphenicol acetyltransferase"
/note="CmR"
/note="confers resistance to chloramphenicol"
/translation="MEKKITGYTTVDISQWHRKEHFEAFQSVAQCTYNQTVQLDITAFL
KTVKKNKHKFYPAFIHILARLMNAHPEFRMAMKDGELVIWDSVHPCYTVFHEQTETFSS
LWSEYHDDFRQFLHIYSQDVACYGENLAYFPKGFIENMFFVSANPWVSFTSFDLNVANM
DNFFAPVFTMGKYYTQGDKVLMPLAIQVHHAVCDGFHVGRMLNELQQYCDEWQGGA"
promoter complement(6905..7007)
/note="cat promoter"
/note="promoter of the E. coli cat gene encoding
chloramphenicol acetyltransferase"
rep_origin complement(7533..8077)
/direction=LEFT
/note="p15A ori"
/note="Plasmids containing the medium-copy-number p15A
origin of replication can be propagated in E. coli cells
that contain a second plasmid with the ColE1 origin."
ORIGIN
1 ctcgagaaat cataaaaaat ttatttgctt ccctatcagt gatagagtat aatagagtcg
61 aattgttagc ggagaagaat ttcacacaga attcattaaa gaggagaaag tcgaggcgtc
121 acccataaca gatacggact ttctcaaagg agagttatca atgaatattc gtccattgca
181 tgatcgcgtg atcgtcaagc gtaaagaagt tgaaactaaa tctgctggcg gcatcgttct
241 gaccggctct gcagcggcta aatccacccg cggcgaagtg ctggctgtcg gcaatggccg
301 tatccttgaa aatggcgaag tgaagccgct ggatgtgaaa gttggcgaca tcgttatttt
361 caacgatggc tacggtgtga aatctgagaa gatcgacaat gaagaagtgt tgatcatgtc
421 cgaaagcgac attctggcaa ttgttgaagc gtaatccgcg cacgacactg aacatacgaa
481 tttaaggaat aaagataatg gcagctaaag acgtaaaatt cggtaacgac gctcgtgtga
541 aaatgctgcg cggcgtaaac gtactggcag atgcagtgaa agttaccctc ggtccaaaag
601 gccgtaacgt agttctggat aaatctttcg gtgcaccgac catcaccaaa gatggtgttt
661 ccgttgctcg tgaaatcgaa ctggaagaca agttcgaaaa tatgggtgcg cagatggtga
721 aagaagttgc ctctaaagca aacgacgctg caggcgacgg taccaccact gcaaccgtac
781 tggctcaggc tatcatcact gaaggtctga aagctgttgc tgcgggcatg aacccgatgg
841 acctgaaacg tggtatcgac aaagcggtta ccgctgcagt tgaagaactg aaagcgctgt
901 ccgtaccatg ctctgactct aaagcgattg ctcaggttgg taccatctcc gctaactccg
961 acgaaaccgt aggtaaactg atcgctgaag cgatggacaa agtcggtaaa gaaggcgtta
1021 tcaccgttga agacggtacc ggtctgcagg acgaactgga cgtggttgaa ggtatgcagt
1081 tcgaccgtgg ctacctgtct ccttacttca tcaacaagcc ggaaactggc gcagtagaac
1141 tggaaagccc gttcatcctg ctggctgaca agaaaatctc caacatccgc gaaatgctgc
1201 cggttctgga agctgttgcc aaagcaggca aaccgctgct gatcatcgct gaagatgtag
1261 aaggcgaagc gctggcaact ctggttgtta acaccatgcg tggcatcgtg aaagtcgctg
1321 cggttaaagc accgggcttc ggcgatcgtc gtaaagctat gctgcaggat atcgcaaccc
1381 tgactggcgg taccgtgatc tctgaagaga tcggtatgga gctggaaaaa gcaaccctgg
1441 aagacctggg tcaggctaaa cgtgttgtga tcaacaaaga caccaccact atcatcgatg
1501 gcgtgggtga agaagctgca atccagggcc gtgttgctca gatccgtcag cagattgaag
1561 aagcaacttc tgactacgac cgtgaaaaac tgcaggaacg cgtagcgaaa ctggcaggcg
1621 gcgttgcagt tatcaaagtg ggtgctgcta ccgaagttga aatgaaagag aaaaaagcac
1681 gcgttgaaga tgccctgcac gcgacccgtg ctgcggtaga agaaggcgtg gttgctggtg
1741 gtggtgttgc gctgatccgc gtagcgtcta aactggctga cctgcgtggt cagaacgaag
1801 accagaacgt gggtatcaaa gttgcactgc gtgcaatgga agctccgctg cgtcagatcg
1861 tattgaactg cggcgaagaa ccgtctgttg ttgctaacac cgttaaaggc ggcgacggca
1921 actacggtta caacgcagca accgaagaat acggcaacat gatcgacatg ggtatcctgg
1981 atccaaccaa agtaactcgt tctgctctgc agtacgcagc ttctgtggct ggcctgatga
2041 tcaccaccga atgcatggtt accgacctgc cgaaaaacga tgcagctgac ttaggcgctg
2101 ctggcggtat gggcggcatg ggtggcatgg gcggcatgat gtaattgccc tgcacctcgc
2161 agaaataaac aaacccccct gtgatttttt gaggtaacaa gatgcaagtt tcagttgaaa
2221 ccactcaagg ccttggccgc cgtgtaacga ttactatcgc tgctgacagc atcgagaccg
2281 ctgttaaaag cgagctggtc aacgttgcga aaaaagtacg tattgacggc ttccgcaaag
2341 gcaaagtgcc aatgaatatc gttgctcagc gttatggcgc gtctgtacgc caggacgttc
2401 tgggtgacct gatgagccgt aacttcattg acgccatcat taaagaaaaa atcaatccgg
2461 ctggcgcacc gacttatgtt ccgggcgaat acaagctggg tgaagacttc acttactctg
2521 tagagtttga agtttatccg gaagttgaac tgcagggtct ggaagcgatc gaagttgaaa
2581 aaccgatcgt tgaagtgacc gacgctgacg ttgacggcat gctggatact ctgcgtaaac
2641 agcaggcgac ctggaaagaa aaagacggcg ctgttgaagc agaagaccgc gtaaccatcg
2701 acttcaccgg ttctgtagac ggcgaagagt tcgaaggcgg taaagcgtct gatttcgtac
2761 tggcgatggg ccagggtcgt atgatcccgg gctttgaaga cggtatcaaa ggccacaaag
2821 ctggcgaaga gttcaccatc gacgtgacct tcccggaaga ataccacgca gaaaacctga
2881 aaggtaaagc agcgaaattc gctatcaacc tgaagaaagt tgaagagcgt gaactgccgg
2941 aactgactgc agaattcatc aaacgtttcg gcgttgaaga tggttccgta gaaggtctgc
3001 gcgctgaagt gcgtaaaaac atggagcgcg agctgaagag cgccatccgt aaccgcgtta
3061 agtctcaggc gatcgaaggt ctggtaaaag ctaacgacat cgacgtaccg gctgcgctga
3121 tcgacagcga aatcgacgtt ctgcgtcgcc aggctgcaca gcgtttcggt ggcaacgaaa
3181 aacaagctct ggaactgccg cgcgaactgt tcgaagaaca ggctaaacgc cgcgtagttg
3241 ttggcctgct gctgggcgaa gttatccgca ccaacgagct gaaagctgac gaagagcgcg
3301 tgaaaggcct gatcgaagag atggcttctg cgtacgaaga tccgaaagaa gttatcgagt
3361 tctacagcaa aaacaaagaa ctgatggaca acatgcgcaa tgttgctctg gaagaacagg
3421 ctgttgaagc tgtactggcg aaagcgaaag tgactgaaaa agaaaccact ttcaacgagc
3481 tgatgaacca gcaggcgtaa tttacgcagc ataacgcgct aaattcgcac aaaggcccgt
3541 caccgccagg tggtgggctt ttttttgtca tgttaaggaa cgcgtcattt ttctgactgg
3601 ccaggttgaa gaccacatgg ctaacctgat tgtggcgcag atgctgttcc tggaagcaga
3661 aaacccagaa aaagatatct atctgtacat taactcccca ggcggggtga tcactgccgg
3721 gatgtctatc tatgacacca tgcagtttat caagcctgat gtcagcacca tctgtatggg
3781 ccaggcggcc tcgatgggcg ctttcttgct gaccgcaggg gcaaaaggta aacgtttttg
3841 cctgccgaat tcgcgcgtga tgattcacca accgttgggc ggctaccagg gccaggcgac
3901 cgatatcgaa attcatgccc gtgaaattct gaaagttaaa gggcgcatga atgaacttat
3961 ggcgcttcat acgggtcaat cattagaaca gattgaacgt gataccgagc gcgatcgctt
4021 cctttccgcc cctgaagcgg tggaatacgg tctggtcgat tcgattctga cccatcgtaa
4081 ttgatgccag aggcgcaact gtgccgctat acttatccag ggcggcacaa cgctgtaagc
4141 gcttgcgcct gagaatggca tttgcgtcgt cgtgtgcggc acaaagaaca aagaagaggt
4201 tttgacccat gacagataaa cgcaaagatg gctcaggcaa attgctgtat tgctcttttt
4261 gcggcaaaag ccagcatgaa gtgcgcaagc tgattgccgg tccatccgtg tatatctgcg
4321 acgaatgtgt tgatttatgt aacgacatca ttcggggcag aaatgtctgg gggtttctag
4381 aggcatcaaa taaaacgaaa ggctcagtcg aaagactggg cctttcgttt tatctgttgt
4441 ttgtcggtga acgctctcct gagtaggaca aatccgccgc cctagaccta gggtcgactc
4501 tagaggatct actagtcata tggatttcac ttttctctat cactgatagg gagtggtaaa
4561 ataactctat caatgataga gtgtcaacaa aaattaggaa ttaatgatgt ctagattaga
4621 taaaagtaaa gtgattaaca gcgcattaga gctgcttaat gaggtcggaa tcgaaggttt
4681 aacaacccgt aaactcgccc agaagctagg tgtagagcag cctacattgt attggcatgt
4741 aaaaaataag cgggctttgc tcgacgcctt agccattgag atgttagata ggcaccatac
4801 tcacttttgc cctttagaag gggaaagctg gcaagatttt ttacgtaata acgctaaaag
4861 ttttagatgt gctttactaa gtcatcgcga tggagcaaaa gtacatttag gtacacggcc
4921 tacagaaaaa cagtatgaaa ctctcgaaaa tcaattagcc tttttatgcc aacaaggttt
4981 ttcactagag aatgcattat atgcactcag cgctgtgggg cattttactt taggttgcgt
5041 attggaagat caagagcatc aagtcgctaa agaagaaagg gaaacaccta ctactgatag
5101 tatgccgcca ttattacgac aagctatcga attatttgat caccaaggtg cagagccagc
5161 cttcttattc ggccttgaat tgatcatatg cggattagaa aaacaactta aatgtgaaag
5221 tgggtcttaa aagcagcata acctttttcc gtgatggtaa cttcacggta accaagatgt
5281 cgagttaacc accctttaga ttcataaagc gaaaataatg cggctccaac gtacccacct
5341 aaatggaaac ggatcggatc tcgggcagcg ttgggtcctg gccacgggtg cgcatgatcg
5401 tgctcctgtc gttgaggacc cggctaggct ggcggggttg ccttactggt tagcagaatg
5461 aatcaccgat acgcgagcga acgtgaagcg actgctgctg caaaacgtct gcgacctgag
5521 caacaacatg aatggtcttc ggtttccgtg tttcgtaaag tctggaaacg cggaagtccc
5581 ctacgtgctg ctgaagttgc ccgcaacaga gagtggaacc aaccggtgat accacgatac
5641 tatgactgag agtcaacgcc atgagcggcc tcatttctta ttctgagtta caacagtccg
5701 caccgctgtc cggtagctcc ttccggtggg cgcggggcat gactatcgtc gccgcactta
5761 tgactgtctt ctttatcatg caactcgtag gacaggtgcc ggcagcgccc aacagtcccc
5821 cggccacggg gcctgccacc atacccacgc cgaaacaagc gccctgcacc attatgttcc
5881 ggatctgcat cgcaggatgc tgctggctac cctgtggaac acctacatct gtattaacga
5941 agcgctaacc gtttttatca ggctctggga ggcagaataa atgatcatat cgtcaattat
6001 tacctccacg gggagagcct gagcaaactg gcctcaggca tttgagaagc acacggtcac
6061 actgcttccg gtagtcaata aaccggtaaa ccagcaatag acataagcgg ctatttaacg
6121 accctgccct gaaccgacga ccgggtcgaa tttgctttcg aatttctgcc attcatccgc
6181 ttattatcac ttattcaggc gtagcaccag gcgtttaagg gcaccaataa ctgccttaaa
6241 aaaattacgc cccgccctgc cactcatcgc agtactgttg taattcatta agcattctgc
6301 cgacatggaa gccatcacag acggcatgat gaacctgaat cgccagcggc atcagcacct
6361 tgtcgccttg cgtataatat ttgcccatgg tgaaaacggg ggcgaagaag ttgtccatat
6421 tggccacgtt taaatcaaaa ctggtgaaac tcacccaggg attggctgag acgaaaaaca
6481 tattctcaat aaacccttta gggaaatagg ccaggttttc accgtaacac gccacatctt
6541 gcgaatatat gtgtagaaac tgccggaaat cgtcgtggta ttcactccag agcgatgaaa
6601 acgtttcagt ttgctcatgg aaaacggtgt aacaagggtg aacactatcc catatcacca
6661 gctcaccgtc tttcattgcc atacggaatt ccggatgagc attcatcagg cgggcaagaa
6721 tgtgaataaa ggccggataa aacttgtgct tatttttctt tacggtcttt aaaaaggccg
6781 taatatccag ctgaacggtc tggttatagg tacattgagc aactgactga aatgcctcaa
6841 aatgttcttt acgatgccat tgggatatat caacggtggt atatccagtg atttttttct
6901 ccattttagc ttccttagct cctgaaaatc tcgataactc aaaaaatacg cccggtagtg
6961 atcttatttc attatggtga aagttggaac ctcttacgtg ccgatcaacg tctcattttc
7021 gccaaaagtt ggcccagggc ttcccggtat caacagggac accaggattt atttattctg
7081 cgaagtgatc ttccgtcaca ggtatttatt cggcgcaaag tgcgtcgggt gatgctgcca
7141 acttactgat ttagtgtatg atggtgtttt tgaggtgctc cagtggcttc tgtttctatc
7201 agctgtccct cctgttcagc tactgacggg gtggtgcgta acggcaaaag caccgccgga
7261 catcagcgct agcggagtgt atactggctt actatgttgg cactgatgag ggtgtcagtg
7321 aagtgcttca tgtggcagga gaaaaaaggc tgcaccggtg cgtcagcaga atatgtgata
7381 caggatatat tccgcttcct cgctcactga ctcgctacgc tcggtcgttc gactgcggcg
7441 agcggaaatg gcttacgaac ggggcggaga tttcctggaa gatgccagga agatacttaa
7501 cagggaagtg agagggccgc ggcaaagccg tttttccata ggctccgccc ccctgacaag
7561 catcacgaaa tctgacgctc aaatcagtgg tggcgaaacc cgacaggact ataaagatac
7621 caggcgtttc ccctggcggc tccctcgtgc gctctcctgt tcctgccttt cggtttaccg
7681 gtgtcattcc gctgttatgg ccgcgtttgt ctcattccac gcctgacact cagttccggg
7741 taggcagttc gctccaagct ggactgtatg cacgaacccc ccgttcagtc cgaccgctgc
7801 gccttatccg gtaactatcg tcttgagtcc aacccggaaa gacatgcaaa agcaccactg
7861 gcagcagcca ctggtaattg atttagagga gttagtcttg aagtcatgcg ccggttaagg
7921 ctaaactgaa aggacaagtt ttggtgactg cgctcctcca agccagttac ctcggttcaa
7981 agagttggta gctcagagaa ccttcgaaaa accgccctgc aaggcggttt tttcgttttc
8041 agagcaagag attacgcgca gaccaaaacg atctcaagaa gatcatctta ttaatcagat
8101 aaaatatttc tagatttcag tgcaatttat ctcttcaaat gtagcacctg aagtcagccc
8161 catacgatat aagttgtaat tctcatgttt gacagcttat catcgataag cttgcatgcc
8221 ctaagaaacc attattatca tgacattaac ctataaaaat aggcgtatca cgaggccctt
8281 tcgtcttcac
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后,请先根据产品管壁标签来判断产品形式,并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉(常温运输,存于-20度,90天保质期,请务必转化挑单克隆培养,不要直接使用和测序)
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒;
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min,加入2μl质粒,再冰浴30min后,42℃热激60s,不要搅动,再冰浴2min;(从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作)
③加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡37℃培养45min;
④6000rpm离心5min,仅留100μl上清液重悬细菌沉淀,并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;(可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布,可以比传统涂布方法获得更多转化子)
⑤将平板正向培养1h,再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h;
(菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态,要先转克隆感受态,重提质粒后再导入表达感受态)
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中,加入对应抗生素,220rpm震荡培养14h,根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种(冰袋运输,存于-80℃,保质期90天,请务必划线挑单克隆培养)
四区划线后挑单菌落培养,酵母菌需要先液体复苏再四区划线,再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种(冰袋运输,存于4℃,保质期7天)
穿刺接种,液体培养后四区划线,再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板(冰袋运输,存于4℃,保质期7天)
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒(冰袋运输,存于-20℃,保质期90天)
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒(常温运输,存于-20度,90天保质期,请务必转化挑单克隆培养,不要直接使用和测序)
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中,加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min,吸取5ul质粒转化,离心全涂。
二、转化图片
| P0768/pDL11真菌表达质粒 |
| P0364/pBC-Hygro真菌表达质粒 |
| P1093/pCT74-Hygro-sGFP真菌表达质粒 |
| P2335/pCT74-HygR真菌表达质粒 |
| P1918/PL99链霉菌表达质粒 |
| P0900/pSET152①链霉菌表达质粒 |
| P4545/pSET152①质粒菌种 |
| P0899/pSET152②链霉菌表达质粒 |
| P4546/pSET152②质粒菌种 |
| P0383/pSilent-1真菌干扰质粒 |
| P0384/pSilent-Dual1真菌干扰质粒 |
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- 作者
- 内容
- 询问日期
文献和实验mnidr 请问最早的质粒是在哪发现的?原始的野生型大肠杆菌是不是没有质粒?我做实验用试剂盒提质粒有的大肠杆菌就提不出。 多谢 freecell 1946年,莱德伯格(Lederburg)和塔特姆(Tatum)发现的F因子是最早发现的质粒,1952年,由Lederburg正式命名为质粒。 确切地讲,质粒是细菌内的共生遗传因子,它能在细菌中垂直遗传并赋予宿主细胞一些表型,例如对抗
摘要: 转化是将外源DNA分子通过物理或化学的方法导入基因工程细菌中的过程,是基因工程等研究领域的基本实验技术之一. 外源质粒 DNA 转化 大肠杆菌 1 实验简介 转化是将外源DNA分子通过物理或化学的方法导入基因工程 细菌 中的过程,是基因工程等研究领域的基本实验技术之一.现演示利用化学的方法(热击法):使用
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