pLVML-ECMV-DDIT3人源基因质粒

基本信息
名称：pLVML-ECMV-DDIT3人源基因质粒
别称: CHOP;CEBPZ;CHOP10;CHOP-10;GADD153
启动子：CMV
复制子: pUC
原核抗性: Amp
筛选标记：绿色荧光蛋白ZsGreen1
克隆菌株: Stbl3
培养条件: 37度

质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Amp
真核抗性：
荧光蛋白：绿色

质粒简介
     pLVML-ECMV-DDIT3(NM_001195053.1) 是一个人源ORF基因哺乳细胞表达质粒。

质粒图谱


质粒序列
LOCUS       Exported                8758 bp ds-DNA     circular SYN 20-JAN-2018
DEFINITION  synthetic circular DNA
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..8758
                     /organism="synthetic DNA construct"
                     /mol_type="other DNA"
     LTR             1..634
                     /label=3' LTR
                     /note="3' long terminal repeat (LTR) from HIV-1"
     misc_feature    681..806
                     /label=HIV-1 Psi
                     /note="packaging signal of human immunodeficiency virus 
                     type 1"
     misc_feature    1303..1536
                     /label=RRE
                     /note="The Rev response element (RRE) of HIV-1 allows for 
                     Rev-dependent mRNA export from the nucleus to the 
                     cytoplasm."
     misc_feature    2028..2143
                     /label=cPPT/CTS
                     /note="central polypurine tract and central termination 
                     sequence of HIV-1 (lacking the first T)"
     enhancer        2201..2504
                     /label=CMV enhancer
                     /note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
     promoter        2505..2708
                     /label=CMV promoter
                     /note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early 
                     promoter"
     CDS             2809..3387
                     /codon_start=1
                     /label=DDIT3
                     /translation="MELVPATPHYPADVLFQTDPTAEMAAESLPFSFGTLSSWELEAWY
                     EDLQEVLSSDENGGTYVSPPGNEEEESKIFTTLDPASLAWLTEEEPEPAEVTSTSQSPH
                     SPDSSQSSLAQEEEEEDQGRTRKRKQSGHSPARAGKQRMKEKEQENERKVAQLAEENER
                     LKQEIERLTREVEATRRALIDRMVNLHQA"
     misc_feature    3396..3969
                     /label=IRES
                     /note="internal ribosome entry site (IRES) of the 
                     encephalomyocarditis virus (EMCV)"
     CDS             3971..4666
                     /codon_start=1
                     /product="Zoanthus green fluorescent protein"
                     /label=ZsGreen1
                     /note="mammalian codon-optimized"
                     /translation="MAQSKHGLTKEMTMKYRMEGCVDGHKFVITGEGIGYPFKGKQAIN
                     LCVVEGGPLPFAEDILSAAFMYGNRVFTEYPQDIVDYFKNSCPAGYTWDRSFLFEDGAV
                     CICNADITVSVEENCMYHESKFYGVNFPADGPVMKKMTDNWEPSCEKIIPVPKQGILKG
                     DVSMYLLLKDGGRLRCQFDTVYKAKSVPRKMPDWHFIQHKLTREDRSDAKNQKWHLTEH
                     AIASGSALP"
     misc_feature    4680..5268
                     /label=WPRE
                     /note="woodchuck hepatitis virus posttranscriptional 
                     regulatory element"
     LTR             5475..6108
                     /label=3' LTR
                     /note="3' long terminal repeat (LTR) from HIV-1"
     rep_origin      complement(6638..7226)
                     /direction=LEFT
                     /label=ori
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                     replication"
     CDS             complement(7397..8257)
                     /codon_start=1
                     /gene="bla"
                     /product="beta-lactamase"
                     /label=AmpR
                     /note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
                     related antibiotics"
                     /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
                     ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
                     PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
                     EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
                     LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
                     LIKHW"
     promoter        complement(8258..8362)
                     /gene="bla"
                     /label=AmpR promoter
     polyA_signal    8410..8544
                     /label=SV40 poly(A) signal
                     /note="SV40 polyadenylation signal"
ORIGIN
        1 tggaagggct aattcactcc caaagaagac aagatatcct tgatctgtgg atctaccaca
       61 cacaaggcta cttccctgat tagcagaact acacaccagg gccaggggtc agatatccac
      121 tgacctttgg atggtgctac aagctagtac cagttgagcc agataaggta gaagaggcca
      181 ataaaggaga gaacaccagc ttgttacacc ctgtgagcct gcatgggatg gatgacccgg
      241 agagagaagt gttagagtgg aggtttgaca gccgcctagc atttcatcac gtggcccgag
      301 agctgcatcc ggagtacttc aagaactgct gatatcgagc ttgctacaag ggactttccg
      361 ctggggactt tccagggagg cgtggcctgg gcgggactgg ggagtggcga gccctcagat
      421 cctgcatata agcagctgct ttttgcctgt actgggtctc tctggttaga ccagatctga
      481 gcctgggagc tctctggcta actagggaac ccactgctta agcctcaata aagcttgcct
      541 tgagtgcttc aagtagtgtg tgcccgtctg ttgtgtgact ctggtaacta gagatccctc
      601 agaccctttt agtcagtgtg gaaaatctct agcagtggcg cccgaacagg gacttgaaag
      661 cgaaagggaa accagaggag ctctctcgac gcaggactcg gcttgctgaa gcgcgcacgg
      721 caagaggcga ggggcggcga ctggtgagta cgccaaaaat tttgactagc ggaggctaga
      781 aggagagaga tgggtgcgag agcgtcagta ttaagcgggg gagaattaga tcgcgatggg
      841 aaaaaattcg gttaaggcca gggggaaaga aaaaatataa attaaaacat atagtatggg
      901 caagcaggga gctagaacga ttcgcagtta atcctggcct gttagaaaca tcagaaggct
      961 gtagacaaat actgggacag ctacaaccat cccttcagac aggatcagaa gaacttagat
     1021 cattatataa tacagtagca accctctatt gtgtgcatca aaggatagag ataaaagaca
     1081 ccaaggaagc tttagacaag atagaggaag agcaaaacaa aagtaagacc accgcacagc
     1141 aagcggccgg ccgctgatct tcagacctgg aggaggagat atgagggaca attggagaag
     1201 tgaattatat aaatataaag tagtaaaaat tgaaccatta ggagtagcac ccaccaaggc
     1261 aaagagaaga gtggtgcaga gagaaaaaag agcagtggga ataggagctt tgttccttgg
     1321 gttcttggga gcagcaggaa gcactatggg cgcagcgtca atgacgctga cggtacaggc
     1381 cagacaatta ttgtctggta tagtgcagca gcagaacaat ttgctgaggg ctattgaggc
     1441 gcaacagcat ctgttgcaac tcacagtctg gggcatcaag cagctccagg caagaatcct
     1501 ggctgtggaa agatacctaa aggatcaaca gctcctgggg atttggggtt gctctggaaa
     1561 actcatttgc accactgctg tgccttggaa tgctagttgg agtaataaat ctctggaaca
     1621 gatttggaat cacacgacct ggatggagtg ggacagagaa attaacaatt acacaagctt
     1681 aatacactcc ttaattgaag aatcgcaaaa ccagcaagaa aagaatgaac aagaattatt
     1741 ggaattagat aaatgggcaa gtttgtggaa ttggtttaac ataacaaatt ggctgtggta
     1801 tataaaatta ttcataatga tagtaggagg cttggtaggt ttaagaatag tttttgctgt
     1861 actttctata gtgaatagag ttaggcaggg atattcacca ttatcgtttc agacccacct
     1921 cccaaccccg aggggacccg acaggcccga aggaatagaa gaagaaggtg gagagagaga
     1981 cagagacaga tccattcgat tagtgaacgg atctcgacgg tatcgccttt aaaagaaaag
     2041 gggggattgg ggggtacagt gcaggggaaa gaatagtaga cataatagca acagacatac
     2101 aaactaaaga attacaaaaa caaattacaa aaattcaaaa ttttcgggtt tattacaggg
     2161 acagcagaga tccagtttat cgataagctt gggagttccg cgttacataa cttacggtaa
     2221 atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc cccgcccatt gacgtcaata atgacgtatg
     2281 ttcccatagt aacgccaata gggactttcc attgacgtca atgggtggag tatttacggt
     2341 aaactgccca cttggcagta catcaagtgt atcatatgcc aagtacgccc cctattgacg
     2401 tcaatgacgg taaatggccc gcctggcatt atgcccagta catgacctta tgggactttc
     2461 ctacttggca gtacatctac gtattagtca tcgctattac catggtgatg cggttttggc
     2521 agtacatcaa tgggcgtgga tagcggtttg actcacgggg atttccaagt ctccacccca
     2581 ttgacgtcaa tgggagtttg ttttggcacc aaaatcaacg ggactttcca aaatgtcgta
     2641 acaactccgc cccattgacg caaatgggcg gtaggcgtgt acggtgggag gtctatataa
     2701 gcagagctcg tttagtgaac cgtcagatcg cctggagacg ccatccacgc tgttttgacc
     2761 tccatagaag acaccgactc tactagagga tctatttccg gtgaattcat ggagcttgtt
     2821 ccagccactc cccattatcc tgcagatgtg cttttccaga ctgatccaac tgcagagatg
     2881 gcagctgagt cattgccttt ctccttcggg acactgtcca gctgggagct ggaagcctgg
     2941 tatgaggacc tgcaagaggt cctgtcttca gatgaaaatg ggggtaccta tgtttcacct
     3001 cctggaaatg aagaggaaga atcaaaaatc ttcaccactc ttgaccctgc ttctctggct
     3061 tggctgactg aggaggagcc agaaccagca gaggtcacaa gcacctccca gagccctcac
     3121 tctccagatt ccagtcagag ctccctggct caggaggaag aggaggaaga ccaagggaga
     3181 accaggaaac ggaaacagag tggtcattcc ccagcccggg ctggaaagca gcgcatgaag
     3241 gagaaagaac aggagaatga aaggaaagtg gcacagctag ctgaagagaa tgaacggctc
     3301 aagcaggaaa tcgagcgcct gaccagggaa gtagaggcga ctcgccgagc tctgattgac
     3361 cgaatggtga atctgcacca agcatgagga tcccgcccct ctccctcccc cccccctaac
     3421 gttactggcc gaagccgctt ggaataaggc cggtgtgcgt ttgtctatat gttattttcc
     3481 accatattgc cgtcttttgg caatgtgagg gcccggaaac ctggccctgt cttcttgacg
     3541 agcattccta ggggtctttc ccctctcgcc aaaggaatgc aaggtctgtt gaatgtcgtg
     3601 aaggaagcag ttcctctgga agcttcttga agacaaacaa cgtctgtagc gaccctttgc
     3661 aggcagcgga accccccacc tggcgacagg tgcctctgcg gccaaaagcc acgtgtataa
     3721 gatacacctg caaaggcggc acaaccccag ttgccacgtt gtgagttgga tagttgtgga
     3781 aagagtcaaa tggctcacct caagcgtatt caacaagggg ctgaaggatg cccagaaggt
     3841 accccattgt atgggatctg atctggggcc tcggtgcaca tgctttacat gtgtttagtc
     3901 gaggttaaaa aacgtctagg ccccccgaac cacggggacg tggttttcct ttgaaaaaca
     3961 cgatgataat atggcccagt ccaagcacgg cctgaccaag gagatgacca tgaagtaccg
     4021 catggagggc tgcgtggacg gccacaagtt cgtgatcacc ggcgagggca tcggctaccc
     4081 cttcaagggc aagcaggcca tcaacctgtg cgtggtggag ggcggcccct tgcccttcgc
     4141 cgaggacatc ttgtccgccg ccttcatgta cggcaaccgc gtgttcaccg agtaccccca
     4201 ggacatcgtc gactacttca agaactcctg ccccgccggc tacacctggg accgctcctt
     4261 cctgttcgag gacggcgccg tgtgcatctg caacgccgac atcaccgtga gcgtggagga
     4321 gaactgcatg taccacgagt ccaagttcta cggcgtgaac ttccccgccg acggccccgt
     4381 gatgaagaag atgaccgaca actgggagcc ctcctgcgag aagatcatcc ccgtgcccaa
     4441 gcagggcatc ttgaagggcg acgtgagcat gtacctgctg ctgaaggacg gtggccgctt
     4501 gcgctgccag ttcgacaccg tgtacaaggc caagtccgtg ccccgcaaga tgcccgactg
     4561 gcacttcatc cagcacaagc tgacccgcga ggaccgcagc gacgccaaga accagaagtg
     4621 gcacctgacc gagcacgcca tcgcctccgg ctccgccttg ccctgaacgc gtctggaaca
     4681 atcaacctct ggattacaaa atttgtgaaa gattgactgg tattcttaac tatgttgctc
     4741 cttttacgct atgtggatac gctgctttaa tgcctttgta tcatgctatt gcttcccgta
     4801 tggctttcat tttctcctcc ttgtataaat cctggttgct gtctctttat gaggagttgt
     4861 ggcccgttgt caggcaacgt ggcgtggtgt gcactgtgtt tgctgacgca acccccactg
     4921 gttggggcat tgccaccacc tgtcagctcc tttccgggac tttcgctttc cccctcccta
     4981 ttgccacggc ggaactcatc gccgcctgcc ttgcccgctg ctggacaggg gctcggctgt
     5041 tgggcactga caattccgtg gtgttgtcgg ggaagctgac gtcctttcca tggctgctcg
     5101 cctgtgttgc cacctggatt ctgcgcggga cgtccttctg ctacgtccct tcggccctca
     5161 atccagcgga ccttccttcc cgcggcctgc tgccggctct gcggcctctt ccgcgtcttc
     5221 gccttcgccc tcagacgagt cggatctccc tttgggccgc ctccccgcct ggaattaatt
     5281 ctgcagtcga gacctagaaa aacatggagc aatcacaagt agcaatacag cagctaccaa
     5341 tgctgattgt gcctggctag aagcacaaga ggaggaggag gtgggttttc cagtcacacc
     5401 tcaggtacct ttaagaccaa tgacttacaa ggcagctgta gatcttagcc actttttaaa
     5461 agaaaagagg ggactggaag ggctaattca ctcccaacga agacaagata tccttgatct
     5521 gtggatctac cacacacaag gctacttccc tgattagcag aactacacac cagggccagg
     5581 ggtcagatat ccactgacct ttggatggtg ctacaagcta gtaccagttg agccagataa
     5641 ggtagaagag gccaataaag gagagaacac cagcttgtta caccctgtga gcctgcatgg
     5701 gatggatgac ccggagagag aagtgttaga gtggaggttt gacagccgcc tagcatttca
     5761 tcacgtggcc cgagagctgc atccggagta cttcaagaac tgctgatatc gagcttgcta
     5821 caagggactt tccgctgggg actttccagg gaggcgtggc ctgggcggga ctggggagtg
     5881 gcgagccctc agatcctgca tataagcagc tgctttttgc ctgtactggg tctctctggt
     5941 tagaccagat ctgagcctgg gagctctctg gctaactagg gaacccactg cttaagcctc
     6001 aataaagctt gccttgagtg cttcaagtag tgtgtgcccg tctgttgtgt gactctggta
     6061 actagagatc cctcagaccc ttttagtcag tgtggaaaat ctctagcagt agtagttcat
     6121 gtcatcttat tattcagtat ttataacttg caaagaaatg aatatcagag agtgagaggc
     6181 cttgacattg ctagcgttta ccgtcgacct ctagctagag cttggcgtaa tcatggtcat
     6241 agctgtttcc tgtgtgaaat tgttatccgc tcacaattcc acacaacata cgagccggaa
     6301 gcataaagtg taaagcctgg ggtgcctaat gagtgagcta actcacatta attgcgttgc
     6361 gctcactgcc cgctttccag tcgggaaacc tgtcgtgcca gctgcattaa tgaatcggcc
     6421 aacgcgcggg gagaggcggt ttgcgtattg ggcgctcttc cgcttcctcg ctcactgact
     6481 cgctgcgctc ggtcgttcgg ctgcggcgag cggtatcagc tcactcaaag gcggtaatac
     6541 ggttatccac agaatcaggg gataacgcag gaaagaacat gtgagcaaaa ggccagcaaa
     6601 aggccaggaa ccgtaaaaag gccgcgttgc tggcgttttt ccataggctc cgcccccctg
     6661 acgagcatca caaaaatcga cgctcaagtc agaggtggcg aaacccgaca ggactataaa
     6721 gataccaggc gtttccccct ggaagctccc tcgtgcgctc tcctgttccg accctgccgc
     6781 ttaccggata cctgtccgcc tttctccctt cgggaagcgt ggcgctttct catagctcac
     6841 gctgtaggta tctcagttcg gtgtaggtcg ttcgctccaa gctgggctgt gtgcacgaac
     6901 cccccgttca gcccgaccgc tgcgccttat ccggtaacta tcgtcttgag tccaacccgg
     6961 taagacacga cttatcgcca ctggcagcag ccactggtaa caggattagc agagcgaggt
     7021 atgtaggcgg tgctacagag ttcttgaagt ggtggcctaa ctacggctac actagaagaa
     7081 cagtatttgg tatctgcgct ctgctgaagc cagttacctt cggaaaaaga gttggtagct
     7141 cttgatccgg caaacaaacc accgctggta gcggtggttt ttttgtttgc aagcagcaga
     7201 ttacgcgcag aaaaaaagga tctcaagaag atcctttgat cttttctacg gggtctgacg
     7261 ctcagtggaa cgaaaactca cgttaaggga ttttggtcat gagattatca aaaaggatct
     7321 tcacctagat ccttttaaat taaaaatgaa gttttaaatc aatctaaagt atatatgagt
     7381 aaacttggtc tgacagttac caatgcttaa tcagtgaggc acctatctca gcgatctgtc
     7441 tatttcgttc atccatagtt gcctgactcc ccgtcgtgta gataactacg atacgggagg
     7501 gcttaccatc tggccccagt gctgcaatga taccgcgaga cccacgctca ccggctccag
     7561 atttatcagc aataaaccag ccagccggaa gggccgagcg cagaagtggt cctgcaactt
     7621 tatccgcctc catccagtct attaattgtt gccgggaagc tagagtaagt agttcgccag
     7681 ttaatagttt gcgcaacgtt gttgccattg ctacaggcat cgtggtgtca cgctcgtcgt
     7741 ttggtatggc ttcattcagc tccggttccc aacgatcaag gcgagttaca tgatccccca
     7801 tgttgtgcaa aaaagcggtt agctccttcg gtcctccgat cgttgtcaga agtaagttgg
     7861 ccgcagtgtt atcactcatg gttatggcag cactgcataa ttctcttact gtcatgccat
     7921 ccgtaagatg cttttctgtg actggtgagt actcaaccaa gtcattctga gaatagtgta
     7981 tgcggcgacc gagttgctct tgcccggcgt caatacggga taataccgcg ccacatagca
     8041 gaactttaaa agtgctcatc attggaaaac gttcttcggg gcgaaaactc tcaaggatct
     8101 taccgctgtt gagatccagt tcgatgtaac ccactcgtgc acccaactga tcttcagcat
     8161 cttttacttt caccagcgtt tctgggtgag caaaaacagg aaggcaaaat gccgcaaaaa
     8221 agggaataag ggcgacacgg aaatgttgaa tactcatact cttccttttt caatattatt
     8281 gaagcattta tcagggttat tgtctcatga gcggatacat atttgaatgt atttagaaaa
     8341 ataaacaaat aggggttccg cgcacatttc cccgaaaagt gccacctgac gtcgacggat
     8401 cgggagatca acttgtttat tgcagcttat aatggttaca aataaagcaa tagcatcaca
     8461 aatttcacaa ataaagcatt tttttcactg cattctagtt gtggtttgtc caaactcatc
     8521 aatgtatctt atcatgtctg gatcaactgg ataactcaag ctaaccaaaa tcatcccaaa
     8581 cttcccaccc cataccctat taccactgcc aattacctgt ggtttcattt actctaaacc
     8641 tgtgattcct ctgaattatt ttcattttaa agaaattgta tttgttaaat atgtactaca
     8701 aacttagtag tttttaaaga aattgtattt gttaaatatg tactacaaac ttagtagt
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片

P0094/pSP73体外转录质粒

P0791/pSPT18体外转录质粒

P0092/pBluescript II-SK(+)噬菌体展示质粒

P0093/pBluescript II-KS(+)噬菌体展示质粒

P0187/SuperCos I噬菌体展示质粒

P0830/pComb3XLambda噬菌体展示质粒

P0831/pComb3XTT噬菌体展示质粒

P0862/pComb3XSS噬菌体展示质粒

P1099/pCANTAB-5E噬菌体展示质粒(非空载)

P0908/pBeloBAC11细菌人工染色体质粒(单拷贝）