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- 上海
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- 2025年07月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
Plasmid#36035
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：CHOP promoter (-649+136) pmCherry-1人源启动子质粒
别称: Plasmid#36035
启动子：CHOP
复制子: pUC
终止子: SV40 poly(A) signal
质粒大小: 4880bp
原核抗性: Kan
筛选标记：G418
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：启动子检测
基因种属：人
基因类型：Promoter
原核抗性：Kan
真核抗性：Neo/G418
荧光蛋白：红色
质粒简介
CHOP promoter (-649+136) pmCherry-1质粒的CHOP启动子驱动红色荧光蛋白mCherry的表达。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 4880 bp ds-DNA circular SYN 24-OCT-2017
DEFINITION synthetic circular DNA
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 4880)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..4880
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
misc_feature 37..817
/label=CHOP promoter (-649/+136)
regulatory 831..840
/regulatory_class="other"
/note="vertebrate consensus sequence for strong initiation
of translation (Kozak, 1987)"
CDS 837..1547
/codon_start=1
/product="monomeric derivative of DsRed fluorescent protein
(Shaner et al., 2004)"
/label=mCherry
/note="mammalian codon-optimized"
/translation="MVSKGEEDNMAIIKEFMRFKVHMEGSVNGHEFEIEGEGEGRPYEG
TQTAKLKVTKGGPLPFAWDILSPQFMYGSKAYVKHPADIPDYLKLSFPEGFKWERVMNF
EDGGVVTVTQDSSLQDGEFIYKVKLRGTNFPSDGPVMQKKTMGWEASSERMYPEDGALK
GEIKQRLKLKDGGHYDAEVKTTYKAKKPVQLPGAYNVNIKLDITSHNEDYTIVEQYERA
EGRHSTGGMDELYK"
polyA_signal 1668..1789
/label=SV40 poly(A) signal
/note="SV40 polyadenylation signal"
rep_origin complement(1796..2251)
/direction=LEFT
/label=f1 ori
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
promoter 2278..2382
/gene="bla"
/label=AmpR promoter
promoter 2384..2741
/label=SV40 promoter
/note="SV40 enhancer and early promoter"
rep_origin 2592..2727
/label=SV40 ori
/note="SV40 origin of replication"
CDS 2776..3570
/codon_start=1
/gene="aph(3')-II (or nptII)"
/product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
/label=NeoR/KanR
/note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418
(Geneticin(R))"
/translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPAT-CPFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
GLAPAELFARLKASMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
polyA_signal 3802..3849
/label=HSV TK poly(A) signal
/note="herpes simplex virus thymidine kinase
polyadenylation signal (Cole and Stacy, 1985)"
rep_origin 4178..4766
/direction=RIGHT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
ORIGIN
1 tagttattac tagcgctacc ggactcagat ctcgagatgt cgacaatccc agtggatgga
61 taccaacttt aaaaagaaaa gttcaaaagg cctatgtgcc cattagctgg gaggggccaa
121 gaaatatggg agtcccttat agtgggggta aaacggcggg taaagctagg tgggcggaac
181 agcagcttct gggggagaca agcggcaaag aggctcacga ccgactaggg gcgaccaagg
241 ctgatagccg ttggggccgt tgggcgccgg gagctggcgc cccgccctct ctcctctccc
301 ccaccctccg cacctcccac caccctcggt gtcccctgcg cgtgcgcgtg cagacaccgg
361 ttgccaaaca ttgcatcatc cccgcccccc tttcctcccc tccccccccg ctacactccc
421 ctccgcgcgc gcgcatgact cacccacctc ctccgtgaag cctcgtgacc caaagccact
481 tccgggtccg acactacgtc gaccccctag cgagagggag cgacgggggc ggtgccgcgg
541 ggctcctgag tggcggatgc gagggacggg gcgggaccaa tgccggcgtg ccactttctg
601 attggtaggt tttggggtcc cgcccctgag aggagggcaa ggccatggta aaagattaca
661 gccaggcgct cccgaggtca gagacttaag tctaaggcac tgagcgtatc atgttaaaga
721 tgagcgggtg gcagcgacag agccaaaatc agagctggaa cctgaggaga gagtgttcaa
781 gaaggaagtg tatcttcata catcaccaca cctgacggga tccaccggtc gccaccatgg
841 tgagcaaggg cgaggaggat aacatggcca tcatcaagga gttcatgcgc ttcaaggtgc
901 acatggaggg ctccgtgaac ggccacgagt tcgagatcga gggcgagggc gagggccgcc
961 cctacgaggg cacccagacc gccaagctga aggtgaccaa gggtggcccc ctgcccttcg
1021 cctgggacat cctgtcccct cagttcatgt acggctccaa ggcctacgtg aagcaccccg
1081 ccgacatccc cgactacttg aagctgtcct tccccgaggg cttcaagtgg gagcgcgtga
1141 tgaacttcga ggacggcggc gtggtgaccg tgacccagga ctcctccctg caggacggcg
1201 agttcatcta caaggtgaag ctgcgcggca ccaacttccc ctccgacggc cccgtaatgc
1261 agaagaagac catgggctgg gaggcctcct ccgagcggat gtaccccgag gacggcgccc
1321 tgaagggcga gatcaagcag aggctgaagc tgaaggacgg cggccactac gacgctgagg
1381 tcaagaccac ctacaaggcc aagaagcccg tgcagctgcc cggcgcctac aacgtcaaca
1441 tcaagttgga catcacctcc cacaacgagg actacaccat cgtggaacag tacgaacgcg
1501 ccgagggccg ccactccacc ggcggcatgg acgagctgta caagtagcgg ccgcgactct
1561 agatcataat cagccatacc acatttgtag aggttttact tgctttaaaa aacctcccac
1621 acctccccct gaacctgaaa cataaaatga atgcaattgt tgttgttaac ttgtttattg
1681 cagcttataa tggttacaaa taaagcaata gcatcacaaa tttcacaaat aaagcatttt
1741 tttcactgca ttctagttgt ggtttgtcca aactcatcaa tgtatcttaa ggcgtaaatt
1801 gtaagcgtta atattttgtt aaaattcgcg ttaaattttt gttaaatcag ctcatttttt
1861 aaccaatagg ccgaaatcgg caaaatccct tataaatcaa aagaatagac cgagataggg
1921 ttgagtgttg ttccagtttg gaacaagagt ccactattaa agaacgtgga ctccaacgtc
1981 aaagggcgaa aaaccgtcta tcagggcgat ggcccactac gtgaaccatc accctaatca
2041 agttttttgg ggtcgaggtg ccgtaaagca ctaaatcgga accctaaagg gagcccccga
2101 tttagagctt gacggggaaa gccggcgaac gtggcgagaa aggaagggaa gaaagcgaaa
2161 ggagcgggcg ctagggcgct ggcaagtgta gcggtcacgc tgcgcgtaac caccacaccc
2221 gccgcgctta atgcgccgct acagggcgcg tcaggtggca cttttcgggg aaatgtgcgc
2281 ggaaccccta tttgtttatt tttctaaata cattcaaata tgtatccgct catgagacaa
2341 taaccctgat aaatgcttca ataatattga aaaaggaaga gtcctgaggc ggaaagaacc
2401 agctgtggaa tgtgtgtcag ttagggtgtg gaaagtcccc aggctcccca gcaggcagaa
2461 gtatgcaaag catgcatctc aattagtcag caaccaggtg tggaaagtcc ccaggctccc
2521 cagcaggcag aagtatgcaa agcatgcatc tcaattagtc agcaaccata gtcccgcccc
2581 taactccgcc catcccgccc ctaactccgc ccagttccgc ccattctccg ccccatggct
2641 gactaatttt ttttatttat gcagaggccg aggccgcctc ggcctctgag ctattccaga
2701 agtagtgagg aggctttttt ggaggcctag gcttttgcaa agatcgatca agagacagga
2761 tgaggatcgt ttcgcatgat tgaacaagat ggattgcacg caggttctcc ggccgcttgg
2821 gtggagaggc tattcggcta tgactgggca caacagacaa tcggctgctc tgatgccgcc
2881 gtgttccggc tgtcagcgca ggggcgcccg gttctttttg tcaagaccga cctgtccggt
2941 gccctgaatg aactgcaaga cgaggcagcg cggctatcgt ggctggccac gacgggcgtt
3001 ccttgcgcag ctgtgctcga cgttgtcact gaagcgggaa gggactggct gctattgggc
3061 gaagtgccgg ggcaggatct cctgtcatct caccttgctc ctgccgagaa agtatccatc
3121 atggctgatg caatgcggcg gctgcatacg cttgatccgg ctacctgccc attcgaccac
3181 caagcgaaac atcgcatcga gcgagcacgt actcggatgg aagccggtct tgtcgatcag
3241 gatgatctgg acgaagagca tcaggggctc gcgccagccg aactgttcgc caggctcaag
3301 gcgagcatgc ccgacggcga ggatctcgtc gtgacccatg gcgatgcctg cttgccgaat
3361 atcatggtgg aaaatggccg cttttctgga ttcatcgact gtggccggct gggtgtggcg
3421 gaccgctatc aggacatagc gttggctacc cgtgatattg ctgaagagct tggcggcgaa
3481 tgggctgacc gcttcctcgt gctttacggt atcgccgctc ccgattcgca gcgcatcgcc
3541 ttctatcgcc ttcttgacga gttcttctga gcgggactct ggggttcgaa atgaccgacc
3601 aagcgacgcc caacctgcca tcacgagatt tcgattccac cgccgccttc tatgaaaggt
3661 tgggcttcgg aatcgttttc cgggacgccg gctggatgat cctccagcgc ggggatctca
3721 tgctggagtt cttcgcccac cctaggggga ggctaactga aacacggaag gagacaatac
3781 cggaaggaac ccgcgctatg acggcaataa aaagacagaa taaaacgcac ggtgttgggt
3841 cgtttgttca taaacgcggg gttcggtccc agggctggca ctctgtcgat accccaccga
3901 gaccccattg gggccaatac gcccgcgttt cttccttttc cccaccccac cccccaagtt
3961 cgggtgaagg cccagggctc gcagccaacg tcggggcggc aggccctgcc atagcctcag
4021 gttactcata tatactttag attgatttaa aacttcattt ttaatttaaa aggatctagg
4081 tgaagatcct ttttgataat ctcatgacca aaatccctta acgtgagttt tcgttccact
4141 gagcgtcaga ccccgtagaa aagatcaaag gatcttcttg agatcctttt tttctgcgcg
4201 taatctgctg cttgcaaaca aaaaaaccac cgctaccagc ggtggtttgt ttgccggatc
4261 aagagctacc aactcttttt ccgaaggtaa ctggcttcag cagagcgcag ataccaaata
4321 ctgtccttct agtgtagccg tagttaggcc accacttcaa gaactctgta gcaccgccta
4381 catacctcgc tctgctaatc ctgttaccag tggctgctgc cagtggcgat aagtcgtgtc
4441 ttaccgggtt ggactcaaga cgatagttac cggataaggc gcagcggtcg ggctgaacgg
4501 ggggttcgtg cacacagccc agcttggagc gaacgaccta caccgaactg agatacctac
4561 agcgtgagct atgagaaagc gccacgcttc ccgaagggag aaaggcggac aggtatccgg
4621 taagcggcag ggtcggaaca ggagagcgca cgagggagct tccaggggga aacgcctggt
4681 atctttatag tcctgtcggg tttcgccacc tctgacttga gcgtcgattt ttgtgatgct
4741 cgtcaggggg gcggagccta tggaaaaacg ccagcaacgc ggccttttta cggttcctgg
4801 ccttttgctg gccttttgct cacatgttct ttcctgcgtt atcccctgat tctgtggata
4861 accgtattac cgccatgcat
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：CHOP promoter (-649+136) pmCherry-1人源启动子质粒
别称: Plasmid#36035
启动子：CHOP
复制子: pUC
终止子: SV40 poly(A) signal
质粒大小: 4880bp
原核抗性: Kan
筛选标记：G418
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：启动子检测
基因种属：人
基因类型：Promoter
原核抗性：Kan
真核抗性：Neo/G418
荧光蛋白：红色
质粒简介
CHOP promoter (-649+136) pmCherry-1质粒的CHOP启动子驱动红色荧光蛋白mCherry的表达。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 4880 bp ds-DNA circular SYN 24-OCT-2017
DEFINITION synthetic circular DNA
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 4880)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..4880
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
misc_feature 37..817
/label=CHOP promoter (-649/+136)
regulatory 831..840
/regulatory_class="other"
/note="vertebrate consensus sequence for strong initiation
of translation (Kozak, 1987)"
CDS 837..1547
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/product="monomeric derivative of DsRed fluorescent protein
(Shaner et al., 2004)"
/label=mCherry
/note="mammalian codon-optimized"
/translation="MVSKGEEDNMAIIKEFMRFKVHMEGSVNGHEFEIEGEGEGRPYEG
TQTAKLKVTKGGPLPFAWDILSPQFMYGSKAYVKHPADIPDYLKLSFPEGFKWERVMNF
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GEIKQRLKLKDGGHYDAEVKTTYKAKKPVQLPGAYNVNIKLDITSHNEDYTIVEQYERA
EGRHSTGGMDELYK"
polyA_signal 1668..1789
/label=SV40 poly(A) signal
/note="SV40 polyadenylation signal"
rep_origin complement(1796..2251)
/direction=LEFT
/label=f1 ori
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
promoter 2278..2382
/gene="bla"
/label=AmpR promoter
promoter 2384..2741
/label=SV40 promoter
/note="SV40 enhancer and early promoter"
rep_origin 2592..2727
/label=SV40 ori
/note="SV40 origin of replication"
CDS 2776..3570
/codon_start=1
/gene="aph(3')-II (or nptII)"
/product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
/label=NeoR/KanR
/note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418
(Geneticin(R))"
/translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPAT-CPFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
GLAPAELFARLKASMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
polyA_signal 3802..3849
/label=HSV TK poly(A) signal
/note="herpes simplex virus thymidine kinase
polyadenylation signal (Cole and Stacy, 1985)"
rep_origin 4178..4766
/direction=RIGHT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
ORIGIN
1 tagttattac tagcgctacc ggactcagat ctcgagatgt cgacaatccc agtggatgga
61 taccaacttt aaaaagaaaa gttcaaaagg cctatgtgcc cattagctgg gaggggccaa
121 gaaatatggg agtcccttat agtgggggta aaacggcggg taaagctagg tgggcggaac
181 agcagcttct gggggagaca agcggcaaag aggctcacga ccgactaggg gcgaccaagg
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421 ctccgcgcgc gcgcatgact cacccacctc ctccgtgaag cctcgtgacc caaagccact
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721 tgagcgggtg gcagcgacag agccaaaatc agagctggaa cctgaggaga gagtgttcaa
781 gaaggaagtg tatcttcata catcaccaca cctgacggga tccaccggtc gccaccatgg
841 tgagcaaggg cgaggaggat aacatggcca tcatcaagga gttcatgcgc ttcaaggtgc
901 acatggaggg ctccgtgaac ggccacgagt tcgagatcga gggcgagggc gagggccgcc
961 cctacgaggg cacccagacc gccaagctga aggtgaccaa gggtggcccc ctgcccttcg
1021 cctgggacat cctgtcccct cagttcatgt acggctccaa ggcctacgtg aagcaccccg
1081 ccgacatccc cgactacttg aagctgtcct tccccgaggg cttcaagtgg gagcgcgtga
1141 tgaacttcga ggacggcggc gtggtgaccg tgacccagga ctcctccctg caggacggcg
1201 agttcatcta caaggtgaag ctgcgcggca ccaacttccc ctccgacggc cccgtaatgc
1261 agaagaagac catgggctgg gaggcctcct ccgagcggat gtaccccgag gacggcgccc
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1441 tcaagttgga catcacctcc cacaacgagg actacaccat cgtggaacag tacgaacgcg
1501 ccgagggccg ccactccacc ggcggcatgg acgagctgta caagtagcgg ccgcgactct
1561 agatcataat cagccatacc acatttgtag aggttttact tgctttaaaa aacctcccac
1621 acctccccct gaacctgaaa cataaaatga atgcaattgt tgttgttaac ttgtttattg
1681 cagcttataa tggttacaaa taaagcaata gcatcacaaa tttcacaaat aaagcatttt
1741 tttcactgca ttctagttgt ggtttgtcca aactcatcaa tgtatcttaa ggcgtaaatt
1801 gtaagcgtta atattttgtt aaaattcgcg ttaaattttt gttaaatcag ctcatttttt
1861 aaccaatagg ccgaaatcgg caaaatccct tataaatcaa aagaatagac cgagataggg
1921 ttgagtgttg ttccagtttg gaacaagagt ccactattaa agaacgtgga ctccaacgtc
1981 aaagggcgaa aaaccgtcta tcagggcgat ggcccactac gtgaaccatc accctaatca
2041 agttttttgg ggtcgaggtg ccgtaaagca ctaaatcgga accctaaagg gagcccccga
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2221 gccgcgctta atgcgccgct acagggcgcg tcaggtggca cttttcgggg aaatgtgcgc
2281 ggaaccccta tttgtttatt tttctaaata cattcaaata tgtatccgct catgagacaa
2341 taaccctgat aaatgcttca ataatattga aaaaggaaga gtcctgaggc ggaaagaacc
2401 agctgtggaa tgtgtgtcag ttagggtgtg gaaagtcccc aggctcccca gcaggcagaa
2461 gtatgcaaag catgcatctc aattagtcag caaccaggtg tggaaagtcc ccaggctccc
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2581 taactccgcc catcccgccc ctaactccgc ccagttccgc ccattctccg ccccatggct
2641 gactaatttt ttttatttat gcagaggccg aggccgcctc ggcctctgag ctattccaga
2701 agtagtgagg aggctttttt ggaggcctag gcttttgcaa agatcgatca agagacagga
2761 tgaggatcgt ttcgcatgat tgaacaagat ggattgcacg caggttctcc ggccgcttgg
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2881 gtgttccggc tgtcagcgca ggggcgcccg gttctttttg tcaagaccga cctgtccggt
2941 gccctgaatg aactgcaaga cgaggcagcg cggctatcgt ggctggccac gacgggcgtt
3001 ccttgcgcag ctgtgctcga cgttgtcact gaagcgggaa gggactggct gctattgggc
3061 gaagtgccgg ggcaggatct cctgtcatct caccttgctc ctgccgagaa agtatccatc
3121 atggctgatg caatgcggcg gctgcatacg cttgatccgg ctacctgccc attcgaccac
3181 caagcgaaac atcgcatcga gcgagcacgt actcggatgg aagccggtct tgtcgatcag
3241 gatgatctgg acgaagagca tcaggggctc gcgccagccg aactgttcgc caggctcaag
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3541 ttctatcgcc ttcttgacga gttcttctga gcgggactct ggggttcgaa atgaccgacc
3601 aagcgacgcc caacctgcca tcacgagatt tcgattccac cgccgccttc tatgaaaggt
3661 tgggcttcgg aatcgttttc cgggacgccg gctggatgat cctccagcgc ggggatctca
3721 tgctggagtt cttcgcccac cctaggggga ggctaactga aacacggaag gagacaatac
3781 cggaaggaac ccgcgctatg acggcaataa aaagacagaa taaaacgcac ggtgttgggt
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P3870/pCMV-SPORT6-SF3A3（1同义突变）人源基因质粒 |
| P3871/pCMV-SPORT6-NCAPD3人源基因质粒 |
| P3872/pCMV-SPORT6-ORC1人源基因质粒 |
| P3873/pCMV-SPORT6-PTPN4人源基因质粒 |
| P3874/pCMV-SPORT6-MAP3K11（1同义突变）人源基因质粒 |
| P3875/pCMV-SPORT6-MED24（2同义突变）人源基因质粒 |
| P3876/pCMV-SPORT6-GPT人源基因质粒 |
| P3877/pCMV-SPORT6-PHYHIPL(1点突变）人源基因质粒 |
| P3878/pCMV-SPORT6-DVL2人源基因质粒 |
| P3879/pCMV-SPORT6-GAS2L1（1同义突变）人源基因质粒 |
| P3880/pCMV-SPORT6-LYAR人源基因质粒 |
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文献和实验相关实验
DNA模板上专一地与 RNA聚合酶结合并决定转录从何处起始的部位，也决定基因的转录效率。生物中有许多启动子，如大肠杆菌约有 2000个启动子。各启动子的效率可不相同，大肠杆菌的强启动子每 2秒钟启动一次转录，而弱启动子每 10分钟才启动一次，从百多个大肠杆菌启动子结构的分析，得知两个强启动子的同源序列的中心在转录起始部位（基因编码链上第一个核苷酸） 5'侧约 10和 35个核苷酸处，弱启动子序列中往往有多处核苷酸被置换。许多原核生物都含有这两个重要的启动子
. To each tube with the tail piece, add 0.5 ml of the following tail chop digestion buffer: 2.5 ml 1M Tris, pH 8 10.0 ml 0.5M EDTA 5.0 ml 10% SDS 31.5 ml ddI H2 O The final volume is 50 ml. To the amount needed
. for the duration of the harvesting process, after which we think these tails can be kept at 4℃ overnight without much trouble. To each tube with the tail piece, add 0.5 ml of the following tail chop digestion buffer: 2.5 ml 1M Tris, pH 8 10.0 ml 0.5M EDTA
CHOP promoter (-649+136) pmCherry-1人源启动子质粒
￥100 - 1000
