pLVML-ECMV-IRX5人源基因质粒

基本信息
名称：pLVML-ECMV-IRX5人源基因质粒
别称: HMMS;IRXB2;IRX-2a
启动子：CMV
复制子: pUC
原核抗性: Amp
筛选标记：G418
克隆菌株: Stbl3
培养条件: 37度

质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Amp
真核抗性：Puro
荧光蛋白：

质粒简介
  pLVML-ECMV-IRX5(NM_005853.5)是一个人ORF基因哺乳表达质粒。

质粒图谱


质粒序列
基因：Homo sapiens iroquois homeobox 5 (IRX5), transcript variant 1, mRNA
NCBI Reference Sequence: NM_005853.5
链接：http://www.ncbi.nlm.nih.gov/nucleotide/NM_005853.5
序列：atgtcctatc cgcagggcta cttgtaccag ccgtccgcct cgctggcgct ctactcgtgc
       61 ccggcgtaca gcaccagcgt catttcgggg ccccgcacgg atgagctcgg ccgctcttct
      121 tcgggctccg cgttctcgcc ctacgctggc tcgactgcct tcacggcgcc ctcgccgggc
      181 tacaactcgc acctccagta cggcgccgac cccgcggccg ccgccgccgc cgccttctcc
      241 tcgtacgtgg gctctcccta cgaccacaca cccggcatgg cgggctcctt ggggtaccat
      301 ccttacgcgg cgcccctggg atcgtaccct tacggggacc cagcgtaccg gaagaacgcc
      361 acaagggacg ccacggctac cctcaaggcc tggctcaacg agcaccgcaa gaacccctac
      421 cccaccaagg gcgagaagat catgctggcc atcatcacca agatgaccct cacccaggtg
      481 tccacctggt tcgccaacgc gcgccggcgc ctcaagaaag agaataaaat gacgtggacg
      541 ccgcggaacc gcagcgagga cgaggaagag gaggagaaca ttgacctgga gaagaacgac
      601 gaggacgagc cccagaagcc cgaggacaag ggcgaccccg agggccccga agcaggagga
      661 gctgagcaga aggcggcttc gggctgcgaa cggcttcagg gaccacccac ccctgcaggc
      721 aaggagacgg agggcagcct cagcgactcg gattttaagg agccgccctc ggagggccgc
      781 ctcgacgcgc tgcagggccc cccccgcacc ggcgggccct ccccggctgg gccagcggcg
      841 gcgcggctgg cggaggaccc ggcccctcac taccccgccg gagcgccggc gcccggcccg
      901 catccagccg cgggcgaggt gcctccgggt cccggcgggc cctcggttat ccattcgccg
      961 cctccgccgc cgcctcctgc ggtgctcgcc aagcccaaac tgtggtcttt ggcagagatc
     1021 gccacatcgt cggacaaggt caaggacggg ggcggcggga acgagggctc tccatgccca
     1081 ccgtgtcccg ggcccatagc cgggcaagcc ctaggaggca gccgggcgtc gccggccccg
     1141 gcgccgtcac gctcgccctc ggcgcagtgt ccttttccag gcgggacggt gctgtcccgg
     1201 cctctctact acaccgcgcc cttctatccc ggctacacga actatggctc cttcggacac
     1261 cttcatggcc acccggggcc cgggccaggc cccacaaccg gtccggggtc tcatttcaat
     1321 ggattaaacc agaccgtgtt gaaccgagcg gacgctttgg ctaaagaccc gaaaatgttg
     1381 cggagccagt ctcagctaga cctgtgcaaa gactctccct atgaattgaa gaaaggtatg
     1441 tccgacattt aa

质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片

P4531/pBeloBAC11质粒菌种

P0649/pGEX-2T大肠表达质粒

P0001/pGEX-4T-1大肠表达质粒

P0002/pGEX-4T-2大肠表达质粒

P0003/pGEX-4T-3大肠表达质粒

P0692/pGEX-5X-1大肠表达质粒

P0004/pGEX-5X-3大肠表达质粒

P0005/pGEX-6P-1大肠表达质粒

P0006/pGEX-6P-2大肠表达质粒

P1317/pGEX-6P-3大肠表达质粒

P0007/pGEX-KG大肠表达质粒