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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
NM_001134.2;AFPD;FETA;HPAFP
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pET28a-AFP人源基因质粒
别称: NM_001134.2;AFPD;FETA;HPAFP
复制子: pBR322
原核抗性: Kan
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：大肠杆菌
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Kan
真核抗性：
荧光蛋白：
质粒简介
pET28a-AFP是一个人源基因大肠表达质粒。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 7238 bp ds-DNA circular SYN 08-MAY-2017
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..7238
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
terminator 26..73
/label=T7 terminator
/note="transcription terminator for bacteriophage T7 RNA
polymerase"
CDS complement(140..157)
/codon_start=1
/product="6xHis affinity tag"
/label=6xHis
/translation="HHHHHH"
misc_feature complement(213..2042)
/label=AFP
/note="Homo sapiens alpha fetoprotein (AFP), mRNA
NCBI Reference Sequence: NM_001134.2"
CDS complement(2076..2108)
/codon_start=1
/product="leader peptide from bacteriophage T7 gene 10"
/label=T7 tag (gene 10 leader)
/note="promotes efficient translation in E. coli"
/translation="MASMTGGQQMG"
CDS complement(2112..2129)
/codon_start=1
/product="thrombin recognition and cleavage site"
/label=thrombin site
/translation="LVPRGS"
CDS complement(2139..2156)
/codon_start=1
/product="6xHis affinity tag"
/label=6xHis
/translation="HHHHHH"
RBS 2175..2197
/note="efficient ribosome binding site from bacteriophage
T7 gene 10 (Olins and Rangwala, 1989)"
protein_bind 2212..2236
/label=lac operator
/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
promoter complement(2237..2255)
/label=T7 promoter
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
promoter 2564..2641
/gene="lacI"
/label=lacI promoter
CDS 2642..3724
/codon_start=1
/gene="lacI"
/product="lac repressor"
/label=lacI
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
/translation="MKPVTLYDVAEYAGVSYQTVSRVVNQASHVSAKTREKVEAAMAEL
NYIPNRVAQQLAGKQSLLIGVATSSLALHAPSQIVAAIKSRADQLGASVVVSMVERSGV
EACKAAVHNLLAQRVSGLIINYPLDDQDAIAVEAACTNVPALFLDVSDQTPINSIIFSH
EDGTRLGVEHLVALGHQQIALLAGPLSSVSARLRLAGWHKYLTRNQIQPIAEREGDWSA
MSGFQQTMQMLNEGIVPTAMLVANDQMALGAMRAITESGLRVGADISVVGYDDTEDSSC
YIPPLTTIKQDFRLLGQTSVDRLLQLSQGQAVKGNQLLPVSLVKRKTTLAPNTQTASPR
ALADSLMQLARQVSRLESGQ"
CDS 4533..4724
/codon_start=1
/gene="rop"
/product="Rop protein, which maintains plasmids at low copy
number"
/label=rop
/translation="MTKQEKTALNMARFIRSQTLTLLEKLNELDADEQADICESLHDHA
DELYRSCLARFGDDGENL"
misc_feature 4826..4968
/label=bom
/note="basis of mobility region from pBR322"
rep_origin complement(5154..5742)
/direction=LEFT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS 5864..6679
/codon_start=1
/gene="aph(3')-Ia"
/product="aminoglycoside phosphotransferase"
/label=KanR
/note="confers resistance to kanamycin in bacteria or G418
(Geneticin(R)) in eukaryotes"
/translation="MSHIQRETSCSRPRLNSNMDADLYGYKWARDNVGQSGATIYRLYG
KPDAPELFLKHGKGSVANDVTDEMVRLNWLTEFMPLPTIKHFIRTPDDAWLLTTAIPGK
TAFQVLEEYPDSGENIVDALAVFLRRLHSIPVCNCPFNSDRVFRLAQAQSRMNNGLVDA
SDFDDERNGWPVEQVWKEMHKLLPFSPDSVVTHGDFSLDNLIFDEGKLIGCIDVGRVGI
ADRYQDLAILWNCLGEFSPSLQKRLFQKYGIDNPDMNKLQFHLMLDEFF"
rep_origin complement(6772..7227)
/direction=LEFT
/label=f1 ori
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
ORIGIN
1 atccggatat agttcctcct ttcagcaaaa aacccctcaa gacccgttta gaggccccaa
61 ggggttatgc tagttattgc tcagcggtgg cagcagccaa ctcagcttcc tttcgggctt
121 tgttagcagc cggatctcag tggtggtggt ggtggtgctc gagcggccgc cagtgtgatg
181 gatatctgca gaattgccct tcccgaagta atttaaactc ccaaagcagc acgagttttt
241 gaaatcagtt tttgtccctc ttcagcaaag cagacttcct gttcctggcc ttggcagcat
301 ttctccaaca ggcctgagaa atctgcaatg acagcctcaa gttgttcctc tgttatttgt
361 ggcttttgct tcacaaggtt aatgagaaac tcttgcttca tcgtttgcag cgctacaccc
421 tgagcttggc acagatcctt atggaaaatg aacttgtcat cagagaatgc aggagggaca
481 tatgtttcat ccaccaccaa gctgctgaag catggcctcc tgttggcata tgaagaagtg
541 cagcactggc caacaccagg gtttactgga gtcatttcat gtctgataca taagtgtccg
601 ataataatgt cagccgctcc ctcgccacag gccaatagtt tgtcctcact gagttggcaa
661 caagtggctg ctgtggctgc catttttctg gtgatggcca tcagctccga cgaggtcagc
721 tggggggctt tctttgtgta agcaacgaga aacgcatttt gtaagtaata ttctcctagt
781 ttctggaaga ggccgcagct tcgctttgcc aatgcttggc tctcctggat gtatttctgt
841 aattcttctt ctcctttatc ttggcattca agagggtttt cagtctggaa acacttctcc
901 aataactcct ggtatccttt agcaactctt agaattactg agacagcaag ctgaggatgt
961 cttcttgaat attcatgaac aaaacttgcc aagaagatat ttttttcccc tgaagaaaat
1021 tggttaaaat ctctatctcc taaaaacctg tttagatttg gagatagacc ttcaggtttt
1081 tcatcatttt ctgcatgaat tatacattga ccacgttcca gcgtggtcag tttgcagcat
1141 tctgttattt tgtttgacag agtgtcttgt tgagaacata tgtaggacat gattttttcc
1201 ccatcctgca gacaatccag cacatctcct ctgcaacagt gctcatgtac atgggccaca
1261 tccaggacta gtttctggat ttcagtaaaa ttaactttgg taaacttctg actcagttta
1321 gtaacagtta tggcttggaa agttcgggtc ccaaaatttt tcattactgc acatgcatgt
1381 tgatttaaca agctgctttc tcttaattct tttgtaactg ttgctgcctt tgtttggaag
1441 cattcaactg cattttcagc tttgcagcaa gatggaatta ttttgtcata gcgagcagcc
1501 caaagaagaa ttgtaggtgc atacaggaag ggatgccttc ttgctatctc ataaatgaat
1561 ttgttcatga atgtctccct gtcttcttca tatgcttcac agcttgtgac aggttctgga
1621 acttggaaaa gtgggatcga tgctggagtg ggctttttgt gtgcaagaaa acagttatgt
1681 cttccctctt cactttggct gcagcagtct gaatgtccgt acttctccaa aatttctttc
1741 tcatggcaaa gttcttccag aaaggcaggt agctggtttt ctaaacaccc tgaagactgt
1801 tcatctccag tgggtttctc aattgcagtc aatgcatctt tcaccatttt gcttacttcc
1861 ttgtaagtgg cttcttgaac aaactgggca aaaaatatgg tagccaggtc agctaaactt
1921 atctctgcag tacattggta agaatccaat atggaagcta ttccatattc atttctatgc
1981 agtgttctgg attcagtaaa atttagtagg aaaattaaaa aaattgattc cacccacttc
2041 atggttggtc gacggagctc gaattcggat ccgcgaccca tttgctgtcc accagtcatg
2101 ctagccatat ggctgccgcg cggcaccagg ccgctgctgt gatgatgatg atgatggctg
2161 ctgcccatgg tatatctcct tcttaaagtt aaacaaaatt atttctagag gggaattgtt
2221 atccgctcac aattccccta tagtgagtcg tattaatttc gcgggatcga gatctcgatc
2281 ctctacgccg gacgcatcgt ggccggcatc accggcgcca caggtgcggt tgctggcgcc
2341 tatatcgccg acatcaccga tggggaagat cgggctcgcc acttcgggct catgagcgct
2401 tgtttcggcg tgggtatggt ggcaggcccc gtggccgggg gactgttggg cgccatctcc
2461 ttgcatgcac cattccttgc ggcggcggtg ctcaacggcc tcaacctact actgggctgc
2521 ttcctaatgc aggagtcgca taagggagag cgtcgagatc ccggacacca tcgaatggcg
2581 caaaaccttt cgcggtatgg catgatagcg cccggaagag agtcaattca gggtggtgaa
2641 tgtgaaacca gtaacgttat acgatgtcgc agagtatgcc ggtgtctctt atcagaccgt
2701 ttcccgcgtg gtgaaccagg ccagccacgt ttctgcgaaa acgcgggaaa aagtggaagc
2761 ggcgatggcg gagctgaatt acattcccaa ccgcgtggca caacaactgg cgggcaaaca
2821 gtcgttgctg attggcgttg ccacctccag tctggccctg cacgcgccgt cgcaaattgt
2881 cgcggcgatt aaatctcgcg ccgatcaact gggtgccagc gtggtggtgt cgatggtaga
2941 acgaagcggc gtcgaagcct gtaaagcggc ggtgcacaat cttctcgcgc aacgcgtcag
3001 tgggctgatc attaactatc cgctggatga ccaggatgcc attgctgtgg aagctgcctg
3061 cactaatgtt ccggcgttat ttcttgatgt ctctgaccag acacccatca acagtattat
3121 tttctcccat gaagacggta cgcgactggg cgtggagcat ctggtcgcat tgggtcacca
3181 gcaaatcgcg ctgttagcgg gcccattaag ttctgtctcg gcgcgtctgc gtctggctgg
3241 ctggcataaa tatctcactc gcaatcaaat tcagccgata gcggaacggg aaggcgactg
3301 gagtgccatg tccggttttc aacaaaccat gcaaatgctg aatgagggca tcgttcccac
3361 tgcgatgctg gttgccaacg atcagatggc gctgggcgca atgcgcgcca ttaccgagtc
3421 cgggctgcgc gttggtgcgg atatctcggt agtgggatac gacgataccg aagacagctc
3481 atgttatatc ccgccgttaa ccaccatcaa acaggatttt cgcctgctgg ggcaaaccag
3541 cgtggaccgc ttgctgcaac tctctcaggg ccaggcggtg aagggcaatc agctgttgcc
3601 cgtctcactg gtgaaaagaa aaaccaccct ggcgcccaat acgcaaaccg cctctccccg
3661 cgcgttggcc gattcattaa tgcagctggc acgacaggtt tcccgactgg aaagcgggca
3721 gtgagcgcaa cgcaattaat gtaagttagc tcactcatta ggcaccggga tctcgaccga
3781 tgcccttgag agccttcaac ccagtcagct ccttccggtg ggcgcggggc atgactatcg
3841 tcgccgcact tatgactgtc ttctttatca tgcaactcgt aggacaggtg ccggcagcgc
3901 tctgggtcat tttcggcgag gaccgctttc gctggagcgc gacgatgatc ggcctgtcgc
3961 ttgcggtatt cggaatcttg cacgccctcg ctcaagcctt cgtcactggt cccgccacca
4021 aacgtttcgg cgagaagcag gccattatcg ccggcatggc ggccccacgg gtgcgcatga
4081 tcgtgctcct gtcgttgagg acccggctag gctggcgggg ttgccttact ggttagcaga
4141 atgaatcacc gatacgcgag cgaacgtgaa gcgactgctg ctgcaaaacg tctgcgacct
4201 gagcaacaac atgaatggtc ttcggtttcc gtgtttcgta aagtctggaa acgcggaagt
4261 cagcgccctg caccattatg ttccggatct gcatcgcagg atgctgctgg ctaccctgtg
4321 gaacacctac atctgtatta acgaagcgct ggcattgacc ctgagtgatt tttctctggt
4381 cccgccgcat ccataccgcc agttgtttac cctcacaacg ttccagtaac cgggcatgtt
4441 catcatcagt aacccgtatc gtgagcatcc tctctcgttt catcggtatc attaccccca
4501 tgaacagaaa tcccccttac acggaggcat cagtgaccaa acaggaaaaa accgccctta
4561 acatggcccg ctttatcaga agccagacat taacgcttct ggagaaactc aacgagctgg
4621 acgcggatga acaggcagac atctgtgaat cgcttcacga ccacgctgat gagctttacc
4681 gcagctgcct cgcgcgtttc ggtgatgacg gtgaaaacct ctgacacatg cagctcccgg
4741 agacggtcac agcttgtctg taagcggatg ccgggagcag acaagcccgt cagggcgcgt
4801 cagcgggtgt tggcgggtgt cggggcgcag ccatgaccca gtcacgtagc gatagcggag
4861 tgtatactgg cttaactatg cggcatcaga gcagattgta ctgagagtgc accatatatg
4921 cggtgtgaaa taccgcacag atgcgtaagg agaaaatacc gcatcaggcg ctcttccgct
4981 tcctcgctca ctgactcgct gcgctcggtc gttcggctgc ggcgagcggt atcagctcac
5041 tcaaaggcgg taatacggtt atccacagaa tcaggggata acgcaggaaa gaacatgtga
5101 gcaaaaggcc agcaaaaggc caggaaccgt aaaaaggccg cgttgctggc gtttttccat
5161 aggctccgcc cccctgacga gcatcacaaa aatcgacgct caagtcagag gtggcgaaac
5221 ccgacaggac tataaagata ccaggcgttt ccccctggaa gctccctcgt gcgctctcct
5281 gttccgaccc tgccgcttac cggatacctg tccgcctttc tcccttcggg aagcgtggcg
5341 ctttctcata gctcacgctg taggtatctc agttcggtgt aggtcgttcg ctccaagctg
5401 ggctgtgtgc acgaaccccc cgttcagccc gaccgctgcg ccttatccgg taactatcgt
5461 cttgagtcca acccggtaag acacgactta tcgccactgg cagcagccac tggtaacagg
5521 attagcagag cgaggtatgt aggcggtgct acagagttct tgaagtggtg gcctaactac
5581 ggctacacta gaaggacagt atttggtatc tgcgctctgc tgaagccagt taccttcgga
5641 aaaagagttg gtagctcttg atccggcaaa caaaccaccg ctggtagcgg tggttttttt
5701 gtttgcaagc agcagattac gcgcagaaaa aaaggatctc aagaagatcc tttgatcttt
5761 tctacggggt ctgacgctca gtggaacgaa aactcacgtt aagggatttt ggtcatgaac
5821 aataaaactg tctgcttaca taaacagtaa tacaaggggt gttatgagcc atattcaacg
5881 ggaaacgtct tgctctaggc cgcgattaaa ttccaacatg gatgctgatt tatatgggta
5941 taaatgggct cgcgataatg tcgggcaatc aggtgcgaca atctatcgat tgtatgggaa
6001 gcccgatgcg ccagagttgt ttctgaaaca tggcaaaggt agcgttgcca atgatgttac
6061 agatgagatg gtcagactaa actggctgac ggaatttatg cctcttccga ccatcaagca
6121 ttttatccgt actcctgatg atgcatggtt actcaccact gcgatccccg ggaaaacagc
6181 attccaggta ttagaagaat atcctgattc aggtgaaaat attgttgatg cgctggcagt
6241 gttcctgcgc cggttgcatt cgattcctgt ttgtaattgt ccttttaaca gcgatcgcgt
6301 atttcgtctc gctcaggcgc aatcacgaat gaataacggt ttggttgatg cgagtgattt
6361 tgatgacgag cgtaatggct ggcctgttga acaagtctgg aaagaaatgc ataaactttt
6421 gccattctca ccggattcag tcgtcactca tggtgatttc tcacttgata accttatttt
6481 tgacgagggg aaattaatag gttgtattga tgttggacga gtcggaatcg cagaccgata
6541 ccaggatctt gccatcctat ggaactgcct cggtgagttt tctccttcat tacagaaacg
6601 gctttttcaa aaatatggta ttgataatcc tgatatgaat aaattgcagt ttcatttgat
6661 gctcgatgag tttttctaag aattaattca tgagcggata catatttgaa tgtatttaga
6721 aaaataaaca aataggggtt ccgcgcacat ttccccgaaa agtgccacct gaaattgtaa
6781 acgttaatat tttgttaaaa ttcgcgttaa atttttgtta aatcagctca ttttttaacc
6841 aataggccga aatcggcaaa atcccttata aatcaaaaga atagaccgag atagggttga
6901 gtgttgttcc agtttggaac aagagtccac tattaaagaa cgtggactcc aacgtcaaag
6961 ggcgaaaaac cgtctatcag ggcgatggcc cactacgtga accatcaccc taatcaagtt
7021 ttttggggtc gaggtgccgt aaagcactaa atcggaaccc taaagggagc ccccgattta
7081 gagcttgacg gggaaagccg gcgaacgtgg cgagaaagga agggaagaaa gcgaaaggag
7141 cgggcgctag ggcgctggca agtgtagcgg tcacgctgcg cgtaaccacc acacccgccg
7201 cgcttaatgc gccgctacag ggcgcgtccc attcgcca
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pET28a-AFP人源基因质粒
别称: NM_001134.2;AFPD;FETA;HPAFP
复制子: pBR322
| 质粒分类: | 基因文库质粒 |
|---|
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：大肠杆菌
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Kan
真核抗性：
荧光蛋白：
质粒简介
pET28a-AFP是一个人源基因大肠表达质粒。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 7238 bp ds-DNA circular SYN 08-MAY-2017
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..7238
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
terminator 26..73
/label=T7 terminator
/note="transcription terminator for bacteriophage T7 RNA
polymerase"
CDS complement(140..157)
/codon_start=1
/product="6xHis affinity tag"
/label=6xHis
/translation="HHHHHH"
misc_feature complement(213..2042)
/label=AFP
/note="Homo sapiens alpha fetoprotein (AFP), mRNA
NCBI Reference Sequence: NM_001134.2"
CDS complement(2076..2108)
/codon_start=1
/product="leader peptide from bacteriophage T7 gene 10"
/label=T7 tag (gene 10 leader)
/note="promotes efficient translation in E. coli"
/translation="MASMTGGQQMG"
CDS complement(2112..2129)
/codon_start=1
/product="thrombin recognition and cleavage site"
/label=thrombin site
/translation="LVPRGS"
CDS complement(2139..2156)
/codon_start=1
/product="6xHis affinity tag"
/label=6xHis
/translation="HHHHHH"
RBS 2175..2197
/note="efficient ribosome binding site from bacteriophage
T7 gene 10 (Olins and Rangwala, 1989)"
protein_bind 2212..2236
/label=lac operator
/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
promoter complement(2237..2255)
/label=T7 promoter
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
promoter 2564..2641
/gene="lacI"
/label=lacI promoter
CDS 2642..3724
/codon_start=1
/gene="lacI"
/product="lac repressor"
/label=lacI
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
/translation="MKPVTLYDVAEYAGVSYQTVSRVVNQASHVSAKTREKVEAAMAEL
NYIPNRVAQQLAGKQSLLIGVATSSLALHAPSQIVAAIKSRADQLGASVVVSMVERSGV
EACKAAVHNLLAQRVSGLIINYPLDDQDAIAVEAACTNVPALFLDVSDQTPINSIIFSH
EDGTRLGVEHLVALGHQQIALLAGPLSSVSARLRLAGWHKYLTRNQIQPIAEREGDWSA
MSGFQQTMQMLNEGIVPTAMLVANDQMALGAMRAITESGLRVGADISVVGYDDTEDSSC
YIPPLTTIKQDFRLLGQTSVDRLLQLSQGQAVKGNQLLPVSLVKRKTTLAPNTQTASPR
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/codon_start=1
/gene="rop"
/product="Rop protein, which maintains plasmids at low copy
number"
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DELYRSCLARFGDDGENL"
misc_feature 4826..4968
/label=bom
/note="basis of mobility region from pBR322"
rep_origin complement(5154..5742)
/direction=LEFT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS 5864..6679
/codon_start=1
/gene="aph(3')-Ia"
/product="aminoglycoside phosphotransferase"
/label=KanR
/note="confers resistance to kanamycin in bacteria or G418
(Geneticin(R)) in eukaryotes"
/translation="MSHIQRETSCSRPRLNSNMDADLYGYKWARDNVGQSGATIYRLYG
KPDAPELFLKHGKGSVANDVTDEMVRLNWLTEFMPLPTIKHFIRTPDDAWLLTTAIPGK
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ADRYQDLAILWNCLGEFSPSLQKRLFQKYGIDNPDMNKLQFHLMLDEFF"
rep_origin complement(6772..7227)
/direction=LEFT
/label=f1 ori
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
ORIGIN
1 atccggatat agttcctcct ttcagcaaaa aacccctcaa gacccgttta gaggccccaa
61 ggggttatgc tagttattgc tcagcggtgg cagcagccaa ctcagcttcc tttcgggctt
121 tgttagcagc cggatctcag tggtggtggt ggtggtgctc gagcggccgc cagtgtgatg
181 gatatctgca gaattgccct tcccgaagta atttaaactc ccaaagcagc acgagttttt
241 gaaatcagtt tttgtccctc ttcagcaaag cagacttcct gttcctggcc ttggcagcat
301 ttctccaaca ggcctgagaa atctgcaatg acagcctcaa gttgttcctc tgttatttgt
361 ggcttttgct tcacaaggtt aatgagaaac tcttgcttca tcgtttgcag cgctacaccc
421 tgagcttggc acagatcctt atggaaaatg aacttgtcat cagagaatgc aggagggaca
481 tatgtttcat ccaccaccaa gctgctgaag catggcctcc tgttggcata tgaagaagtg
541 cagcactggc caacaccagg gtttactgga gtcatttcat gtctgataca taagtgtccg
601 ataataatgt cagccgctcc ctcgccacag gccaatagtt tgtcctcact gagttggcaa
661 caagtggctg ctgtggctgc catttttctg gtgatggcca tcagctccga cgaggtcagc
721 tggggggctt tctttgtgta agcaacgaga aacgcatttt gtaagtaata ttctcctagt
781 ttctggaaga ggccgcagct tcgctttgcc aatgcttggc tctcctggat gtatttctgt
841 aattcttctt ctcctttatc ttggcattca agagggtttt cagtctggaa acacttctcc
901 aataactcct ggtatccttt agcaactctt agaattactg agacagcaag ctgaggatgt
961 cttcttgaat attcatgaac aaaacttgcc aagaagatat ttttttcccc tgaagaaaat
1021 tggttaaaat ctctatctcc taaaaacctg tttagatttg gagatagacc ttcaggtttt
1081 tcatcatttt ctgcatgaat tatacattga ccacgttcca gcgtggtcag tttgcagcat
1141 tctgttattt tgtttgacag agtgtcttgt tgagaacata tgtaggacat gattttttcc
1201 ccatcctgca gacaatccag cacatctcct ctgcaacagt gctcatgtac atgggccaca
1261 tccaggacta gtttctggat ttcagtaaaa ttaactttgg taaacttctg actcagttta
1321 gtaacagtta tggcttggaa agttcgggtc ccaaaatttt tcattactgc acatgcatgt
1381 tgatttaaca agctgctttc tcttaattct tttgtaactg ttgctgcctt tgtttggaag
1441 cattcaactg cattttcagc tttgcagcaa gatggaatta ttttgtcata gcgagcagcc
1501 caaagaagaa ttgtaggtgc atacaggaag ggatgccttc ttgctatctc ataaatgaat
1561 ttgttcatga atgtctccct gtcttcttca tatgcttcac agcttgtgac aggttctgga
1621 acttggaaaa gtgggatcga tgctggagtg ggctttttgt gtgcaagaaa acagttatgt
1681 cttccctctt cactttggct gcagcagtct gaatgtccgt acttctccaa aatttctttc
1741 tcatggcaaa gttcttccag aaaggcaggt agctggtttt ctaaacaccc tgaagactgt
1801 tcatctccag tgggtttctc aattgcagtc aatgcatctt tcaccatttt gcttacttcc
1861 ttgtaagtgg cttcttgaac aaactgggca aaaaatatgg tagccaggtc agctaaactt
1921 atctctgcag tacattggta agaatccaat atggaagcta ttccatattc atttctatgc
1981 agtgttctgg attcagtaaa atttagtagg aaaattaaaa aaattgattc cacccacttc
2041 atggttggtc gacggagctc gaattcggat ccgcgaccca tttgctgtcc accagtcatg
2101 ctagccatat ggctgccgcg cggcaccagg ccgctgctgt gatgatgatg atgatggctg
2161 ctgcccatgg tatatctcct tcttaaagtt aaacaaaatt atttctagag gggaattgtt
2221 atccgctcac aattccccta tagtgagtcg tattaatttc gcgggatcga gatctcgatc
2281 ctctacgccg gacgcatcgt ggccggcatc accggcgcca caggtgcggt tgctggcgcc
2341 tatatcgccg acatcaccga tggggaagat cgggctcgcc acttcgggct catgagcgct
2401 tgtttcggcg tgggtatggt ggcaggcccc gtggccgggg gactgttggg cgccatctcc
2461 ttgcatgcac cattccttgc ggcggcggtg ctcaacggcc tcaacctact actgggctgc
2521 ttcctaatgc aggagtcgca taagggagag cgtcgagatc ccggacacca tcgaatggcg
2581 caaaaccttt cgcggtatgg catgatagcg cccggaagag agtcaattca gggtggtgaa
2641 tgtgaaacca gtaacgttat acgatgtcgc agagtatgcc ggtgtctctt atcagaccgt
2701 ttcccgcgtg gtgaaccagg ccagccacgt ttctgcgaaa acgcgggaaa aagtggaagc
2761 ggcgatggcg gagctgaatt acattcccaa ccgcgtggca caacaactgg cgggcaaaca
2821 gtcgttgctg attggcgttg ccacctccag tctggccctg cacgcgccgt cgcaaattgt
2881 cgcggcgatt aaatctcgcg ccgatcaact gggtgccagc gtggtggtgt cgatggtaga
2941 acgaagcggc gtcgaagcct gtaaagcggc ggtgcacaat cttctcgcgc aacgcgtcag
3001 tgggctgatc attaactatc cgctggatga ccaggatgcc attgctgtgg aagctgcctg
3061 cactaatgtt ccggcgttat ttcttgatgt ctctgaccag acacccatca acagtattat
3121 tttctcccat gaagacggta cgcgactggg cgtggagcat ctggtcgcat tgggtcacca
3181 gcaaatcgcg ctgttagcgg gcccattaag ttctgtctcg gcgcgtctgc gtctggctgg
3241 ctggcataaa tatctcactc gcaatcaaat tcagccgata gcggaacggg aaggcgactg
3301 gagtgccatg tccggttttc aacaaaccat gcaaatgctg aatgagggca tcgttcccac
3361 tgcgatgctg gttgccaacg atcagatggc gctgggcgca atgcgcgcca ttaccgagtc
3421 cgggctgcgc gttggtgcgg atatctcggt agtgggatac gacgataccg aagacagctc
3481 atgttatatc ccgccgttaa ccaccatcaa acaggatttt cgcctgctgg ggcaaaccag
3541 cgtggaccgc ttgctgcaac tctctcaggg ccaggcggtg aagggcaatc agctgttgcc
3601 cgtctcactg gtgaaaagaa aaaccaccct ggcgcccaat acgcaaaccg cctctccccg
3661 cgcgttggcc gattcattaa tgcagctggc acgacaggtt tcccgactgg aaagcgggca
3721 gtgagcgcaa cgcaattaat gtaagttagc tcactcatta ggcaccggga tctcgaccga
3781 tgcccttgag agccttcaac ccagtcagct ccttccggtg ggcgcggggc atgactatcg
3841 tcgccgcact tatgactgtc ttctttatca tgcaactcgt aggacaggtg ccggcagcgc
3901 tctgggtcat tttcggcgag gaccgctttc gctggagcgc gacgatgatc ggcctgtcgc
3961 ttgcggtatt cggaatcttg cacgccctcg ctcaagcctt cgtcactggt cccgccacca
4021 aacgtttcgg cgagaagcag gccattatcg ccggcatggc ggccccacgg gtgcgcatga
4081 tcgtgctcct gtcgttgagg acccggctag gctggcgggg ttgccttact ggttagcaga
4141 atgaatcacc gatacgcgag cgaacgtgaa gcgactgctg ctgcaaaacg tctgcgacct
4201 gagcaacaac atgaatggtc ttcggtttcc gtgtttcgta aagtctggaa acgcggaagt
4261 cagcgccctg caccattatg ttccggatct gcatcgcagg atgctgctgg ctaccctgtg
4321 gaacacctac atctgtatta acgaagcgct ggcattgacc ctgagtgatt tttctctggt
4381 cccgccgcat ccataccgcc agttgtttac cctcacaacg ttccagtaac cgggcatgtt
4441 catcatcagt aacccgtatc gtgagcatcc tctctcgttt catcggtatc attaccccca
4501 tgaacagaaa tcccccttac acggaggcat cagtgaccaa acaggaaaaa accgccctta
4561 acatggcccg ctttatcaga agccagacat taacgcttct ggagaaactc aacgagctgg
4621 acgcggatga acaggcagac atctgtgaat cgcttcacga ccacgctgat gagctttacc
4681 gcagctgcct cgcgcgtttc ggtgatgacg gtgaaaacct ctgacacatg cagctcccgg
4741 agacggtcac agcttgtctg taagcggatg ccgggagcag acaagcccgt cagggcgcgt
4801 cagcgggtgt tggcgggtgt cggggcgcag ccatgaccca gtcacgtagc gatagcggag
4861 tgtatactgg cttaactatg cggcatcaga gcagattgta ctgagagtgc accatatatg
4921 cggtgtgaaa taccgcacag atgcgtaagg agaaaatacc gcatcaggcg ctcttccgct
4981 tcctcgctca ctgactcgct gcgctcggtc gttcggctgc ggcgagcggt atcagctcac
5041 tcaaaggcgg taatacggtt atccacagaa tcaggggata acgcaggaaa gaacatgtga
5101 gcaaaaggcc agcaaaaggc caggaaccgt aaaaaggccg cgttgctggc gtttttccat
5161 aggctccgcc cccctgacga gcatcacaaa aatcgacgct caagtcagag gtggcgaaac
5221 ccgacaggac tataaagata ccaggcgttt ccccctggaa gctccctcgt gcgctctcct
5281 gttccgaccc tgccgcttac cggatacctg tccgcctttc tcccttcggg aagcgtggcg
5341 ctttctcata gctcacgctg taggtatctc agttcggtgt aggtcgttcg ctccaagctg
5401 ggctgtgtgc acgaaccccc cgttcagccc gaccgctgcg ccttatccgg taactatcgt
5461 cttgagtcca acccggtaag acacgactta tcgccactgg cagcagccac tggtaacagg
5521 attagcagag cgaggtatgt aggcggtgct acagagttct tgaagtggtg gcctaactac
5581 ggctacacta gaaggacagt atttggtatc tgcgctctgc tgaagccagt taccttcgga
5641 aaaagagttg gtagctcttg atccggcaaa caaaccaccg ctggtagcgg tggttttttt
5701 gtttgcaagc agcagattac gcgcagaaaa aaaggatctc aagaagatcc tttgatcttt
5761 tctacggggt ctgacgctca gtggaacgaa aactcacgtt aagggatttt ggtcatgaac
5821 aataaaactg tctgcttaca taaacagtaa tacaaggggt gttatgagcc atattcaacg
5881 ggaaacgtct tgctctaggc cgcgattaaa ttccaacatg gatgctgatt tatatgggta
5941 taaatgggct cgcgataatg tcgggcaatc aggtgcgaca atctatcgat tgtatgggaa
6001 gcccgatgcg ccagagttgt ttctgaaaca tggcaaaggt agcgttgcca atgatgttac
6061 agatgagatg gtcagactaa actggctgac ggaatttatg cctcttccga ccatcaagca
6121 ttttatccgt actcctgatg atgcatggtt actcaccact gcgatccccg ggaaaacagc
6181 attccaggta ttagaagaat atcctgattc aggtgaaaat attgttgatg cgctggcagt
6241 gttcctgcgc cggttgcatt cgattcctgt ttgtaattgt ccttttaaca gcgatcgcgt
6301 atttcgtctc gctcaggcgc aatcacgaat gaataacggt ttggttgatg cgagtgattt
6361 tgatgacgag cgtaatggct ggcctgttga acaagtctgg aaagaaatgc ataaactttt
6421 gccattctca ccggattcag tcgtcactca tggtgatttc tcacttgata accttatttt
6481 tgacgagggg aaattaatag gttgtattga tgttggacga gtcggaatcg cagaccgata
6541 ccaggatctt gccatcctat ggaactgcct cggtgagttt tctccttcat tacagaaacg
6601 gctttttcaa aaatatggta ttgataatcc tgatatgaat aaattgcagt ttcatttgat
6661 gctcgatgag tttttctaag aattaattca tgagcggata catatttgaa tgtatttaga
6721 aaaataaaca aataggggtt ccgcgcacat ttccccgaaa agtgccacct gaaattgtaa
6781 acgttaatat tttgttaaaa ttcgcgttaa atttttgtta aatcagctca ttttttaacc
6841 aataggccga aatcggcaaa atcccttata aatcaaaaga atagaccgag atagggttga
6901 gtgttgttcc agtttggaac aagagtccac tattaaagaa cgtggactcc aacgtcaaag
6961 ggcgaaaaac cgtctatcag ggcgatggcc cactacgtga accatcaccc taatcaagtt
7021 ttttggggtc gaggtgccgt aaagcactaa atcggaaccc taaagggagc ccccgattta
7081 gagcttgacg gggaaagccg gcgaacgtgg cgagaaagga agggaagaaa gcgaaaggag
7141 cgggcgctag ggcgctggca agtgtagcgg tcacgctgcg cgtaaccacc acacccgccg
7201 cgcttaatgc gccgctacag ggcgcgtccc attcgcca
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P0503/pCXWB-EBNA1人源基因质粒 |
| P0504/pCXLE-EGFP人源基因质粒 |
| P0496/pEGFP-Rnd1人源基因质粒 |
| P0497/pEGFP-Rnd2人源基因质粒 |
| P1768/pEGFP-KIF3b人源基因质粒 |
| P0544/pCDNA3-HA-p53人源基因质粒 |
| P2919/pCDNA3.1-P53-N-GST人源基因质粒 |
| P2938/pCDNA3.1-P53-DB-GST人源基因质粒 |
| P0545/pCDNA3-mTOR人源基因质粒 |
| P0546/pCMV-FLAG-TRAF3人源基因质粒 |
| P0547/pCDEF-FLAG-β-catenin人源基因质粒 |
| P2671/pCDEF-FLAG-β-catenin-S675A人源基因质粒 |
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文献和实验相关实验
查、基因筛选及图位克隆有益基因的最好材料，也是永久保存基因资源的最好方法之一。 至于作用就太多了，你自己google一下，发现的是你好多做不了，而不是不知道怎么做？ huangyuan62 楼主,请问能交换你的BAC质粒吗？pBACe3.6,pBeloBAC11等都可以。 本人有以下质粒和菌种,可全部用于交换 pET28a,pET32a,pETDsb,pETGST,pETTrx，pTrc—CKS, pGEX4T
shinesnowing 想构建一个能通过接合作用进入野生型弧菌并在其中表达外源基因的质粒，现在找到一个名为pBOR8的质粒，只有质粒简图，没找到全序列，质粒上的元件为ori R6K、mob RP4、Ap、lacIq，如下图: 现有两个问题想请教各位高人 （1）该质粒能否直接作为表达载体，将外源基因克隆到该质粒上，如果可以通常外源基因应该克隆到哪个位点？ （2）如果不能直接进行外源基因克隆和表达，那么应该
分，一是未稳定整合的，一是稳定整合的，所以开始时亮度要高。 2.为什么筛选后单克隆无荧光：首先，经过G418筛选，外源质粒不能整合入染色体的细胞死亡；其次，稳定整合的细胞外源质粒整合的位置存在位置效应，即整合于不利于外源基因表达的位置，从而使外源基因沉默；第三，我不知道你的质粒中是否加入了核糖体进入位点序列，如果有的话，研究显示该位点前后的基因表达水平存在不同，可以查查相关文献 3.有无好的办法：我认为没有，稳定转染筛选时有运气的成分，假如外源质粒恰好整合到了利于表达的染色体部位，这时筛
pET28a-AFP人源基因质粒
￥100 - 1000
