- ￥700
- 烜雅生物
- XY-ZL0019
- 国产
- 2026年05月07日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
200
- 英文名：
pRSFDuet-1
- 保质期：
２年
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 保存条件：
2-8℃
- 规格：
质粒干粉
英文名称：pRSFDuet-1
形式：质粒干粉
参考用途：大肠系列质粒；大肠其它质粒；大肠双框质粒 蛋白表达
培养基：酵母膏：5.0，蛋白胨：10.0，NaCl：10.0，pH：7.0(25℃)
生长条件：LB +卡那霉素，37℃（克隆菌株DH5a，3829bp）
存储条件：2-8℃
安全等级：1
操作步骤：
1.溶解： 收到质粒干粉后，请加入 20μl 无菌水至管底，溶解质粒，室温静置 1min；
2.混合（吸附质粒）： 200μl 感受态细胞 + 质粒 DNA 5~10µl 混匀，冰上放置 30min；
3.热激导入： 42℃静置 90s；
4.收缩膜孔： 冰浴 2min；
5.修复培养： 毎管加 800µl LB 液体培养基，37 ℃培养 1h 150 r/min；
6.筛选培养： 将适当体积（100 µl）的复苏细胞，涂布在相应抗性的 LB 平板上，正置平皿 30min（琼脂面务必干燥后）， 倒置培养 12-16h，出现菌落。
7.提取： 挑取单克隆菌落至相应抗性 LB 液体培养基中，震荡培养 12-16h，根据试验需要提取质粒。
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文献和实验3 mg/mL 体系内置优化核糖体、全套翻译因子与能量再生系统，底物氨基酸、核苷酸配比精准，普通蛋白表达量远超常规 pET 菌体诱导体系，微量反应也能收获足量蛋白用于 SDS-PAGE、活性检测。 3. 体系灵活开放，适配多元实验需求 无需繁琐菌体操作，50 μL、100 μL 微型体系即可反应，兼容离心管、96 孔板，轻松实现高通量平行筛选；支持质粒、PCR 线性产物、RCA 滚环扩增产物三类模板，无需纯化的 PCR 片段可直接上样，大幅简化模板制备流程。 二、一站式预制体系，新手也能零门槛上手
不含DE3片段的菌株中进行克隆筛选，之后再把阳性克隆转化进入表达菌株，如BL21（DE3）中，通过IPTG诱导进行表达。而pETcoco载体它引入了低拷贝控制元件，F附加体上的oriS和repE元件与parABC共同作用下使质粒在细菌中保持单拷贝，这样即可以使质粒在细菌内稳定存在又可以减少外源蛋白对细胞的毒害作用。当我们需要大量表达时加入树胶醛醣诱导trfA基因表达，质粒在细胞内的拷贝数就可以增加到25-50。pETcoco载体同时兼容了DE3调控模型，在加入IPTG后诱导表达量达升高2500倍
。而pETcoco载体它引入了低拷贝控制元件，F附加体上的oriS和repE元件与parABC共同作用下使质粒在细菌中保持单拷贝，这样即可以使质粒在细菌内稳定存在又可以减少外源蛋白对细胞的毒害作用。当我们需要大量表达时加入树胶醛醣诱导trfA基因表达，质粒在细胞内的拷贝数就可以增加到25-50。pETcoco载体同时兼容了DE3调控模型，在加入IPTG后诱导表达量达升高2500倍。 在保证质粒稳定性这一点上除了pETcoco的方法还有另一种方法就是将重组质粒转化进入含有T7 RNA聚合酶抑制剂的T7溶菌
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