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2年
- 英文名：
pEGFP-LC3b(mouse)
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pEGFP-LC3b-m哺乳自噬质粒
别称: pEGFP-LC3b(mouse)
质粒属性
质粒简介
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 5073 bp ds-DNA circular SYN 05-SEP-2016
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS Untitled 7
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 5073)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Monday, September 5, 2016 from SnapGene Viewer 3.1.4
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..5073
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
rep_origin complement(115..703)
/direction=LEFT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
polyA_signal 1032..1079
/note="HSV TK poly(A) signal"
/note="herpes simplex virus thymidine kinase
polyadenylation signal (Cole and Stacy, 1985)"
CDS complement(1311..2105)
/codon_start=1
/gene="aph(3')-II (or nptII)"
/product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
/note="NeoR/KanR"
/note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418
(Geneticin(R))"
/translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPATC-PFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
GLAPAELFARLKASMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
promoter complement(2140..2497)
/note="SV40 promoter"
/note="SV40 enhancer and early promoter"
rep_origin 2154..2289
/note="SV40 ori"
/note="SV40 origin of replication"
promoter complement(2499..2603)
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
rep_origin 2630..3085
/direction=RIGHT
/note="f1 ori"
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
polyA_signal 3092..3213
/note="SV40 poly(A) signal"
/note="SV40 polyadenylation signal"
CDS complement(3745..4461)
/codon_start=1
/product="enhanced GFP"
/note="EGFP"
/note="mammalian codon-optimized"
/translation="MVSKGEELFTGVVPILVELDGDVNGHKFSVSGEGEGDATYGKLTL
KFICTTGKLPVPWPTLVTTLTYGVQCFSRYPDHMKQHDFFKSAMPEGYVQERTIFFKDD
GNYKTRAEVKFEGDTLVNRIELKGIDFKEDGNILGHKLEYNYNSHNVYIMADKQKNGIK
VNFKIRHNIEDGSVQLADHYQQNTPIGDGPVLLPDNHYLSTQSALSKDPNEKRDHMVLL
EFVTAAGITLGMDELYK"
promoter complement(4506..4709)
/note="CMV promoter"
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
enhancer 4710..5013
/note="CMV enhancer"
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
ORIGIN
1 atgcatggcg gtaatacggt tatccacaga atcaggggat aacgcaggaa agaacatgtg
61 agcaaaaggc cagcaaaagg ccaggaaccg taaaaaggcc gcgttgctgg cgtttttcca
121 taggctccgc ccccctgacg agcatcacaa aaatcgacgc tcaagtcaga ggtggcgaaa
181 cccgacagga ctataaagat accaggcgtt tccccctgga agctccctcg tgcgctctcc
241 tgttccgacc ctgccgctta ccggatacct gtccgccttt ctcccttcgg gaagcgtggc
301 gctttctcat agctcacgct gtaggtatct cagttcggtg taggtcgttc gctccaagct
361 gggctgtgtg cacgaacccc ccgttcagcc cgaccgctgc gccttatccg gtaactatcg
421 tcttgagtcc aacccggtaa gacacgactt atcgccactg gcagcagcca ctggtaacag
481 gattagcaga gcgaggtatg taggcggtgc tacagagttc ttgaagtggt ggcctaacta
541 cggctacact agaaggacag tatttggtat ctgcgctctg ctgaagccag ttaccttcgg
601 aaaaagagtt ggtagctctt gatccggcaa acaaaccacc gctggtagcg gtggtttttt
661 tgtttgcaag cagcagatta cgcgcagaaa aaaaggatct caagaagatc ctttgatctt
721 ttctacgggg tctgacgctc agtggaacga aaactcacgt taagggattt tggtcatgag
781 attatcaaaa aggatcttca cctagatcct tttaaattaa aaatgaagtt ttaaatcaat
841 ctaaagtata tatgagtaac ctgaggctat ggcagggcct gccgccccga cgttggctgc
901 gagccctggg ccttcacccg aacttggggg gtggggtggg gaaaaggaag aaacgcgggc
961 gtattggccc caatggggtc tcggtggggt atcgacagag tgccagccct gggaccgaac
1021 cccgcgttta tgaacaaacg acccaacacc gtgcgtttta ttctgtcttt ttattgccgt
1081 catagcgcgg gttccttccg gtattgtctc cttccgtgtt tcagttagcc tccccctagg
1141 gtgggcgaag aactccagca tgagatcccc gcgctggagg atcatccagc cggcgtcccg
1201 gaaaacgatt ccgaagccca acctttcata gaaggcggcg gtggaatcga aatctcgtga
1261 tggcaggttg ggcgtcgctt ggtcggtcat ttcgaacccc agagtcccgc tcagaagaac
1321 tcgtcaagaa ggcgatagaa ggcgatgcgc tgcgaatcgg gagcggcgat accgtaaagc
1381 acgaggaagc ggtcagccca ttcgccgcca agctcttcag caatatcacg ggtagccaac
1441 gctatgtcct gatagcggtc cgccacaccc agccggccac agtcgatgaa tccagaaaag
1501 cggccatttt ccaccatgat attcggcaag caggcatcgc catgggtcac gacgagatcc
1561 tcgccgtcgg gcatgctcgc cttgagcctg gcgaacagtt cggctggcgc gagcccctga
1621 tgctcttcgt ccagatcatc ctgatcgaca agaccggctt ccatccgagt acgtgctcgc
1681 tcgatgcgat gtttcgcttg gtggtcgaat gggcaggtag ccggatcaag cgtatgcagc
1741 cgccgcattg catcagccat gatggatact ttctcggcag gagcaaggtg agatgacagg
1801 agatcctgcc ccggcacttc gcccaatagc agccagtccc ttcccgcttc agtgacaacg
1861 tcgagcacag ctgcgcaagg aacgcccgtc gtggccagcc acgatagccg cgctgcctcg
1921 tcttgcagtt cattcagggc accggacagg tcggtcttga caaaaagaac cgggcgcccc
1981 tgcgctgaca gccggaacac ggcggcatca gagcagccga ttgtctgttg tgcccagtca
2041 tagccgaata gcctctccac ccaagcggcc ggagaacctg cgtgcaatcc atcttgttca
2101 atcatgcgaa acgatcctca tcctgtctct tgatcgatct ttgcaaaagc ctaggcctcc
2161 aaaaaagcct cctcactact tctggaatag ctcagaggcc gaggcggcct cggcctctgc
2221 ataaataaaa aaaattagtc agccatgggg cggagaatgg gcggaactgg gcggagttag
2281 gggcgggatg ggcggagtta ggggcgggac tatggttgct gactaattga gatgcatgct
2341 ttgcatactt ctgcctgctg gggagcctgg ggactttcca cacctggttg ctgactaatt
2401 gagatgcatg ctttgcatac ttctgcctgc tggggagcct ggggactttc cacaccctaa
2461 ctgacacaca ttccacagct ggttctttcc gcctcaggac tcttcctttt tcaatattat
2521 tgaagcattt atcagggtta ttgtctcatg agcggataca tatttgaatg tatttagaaa
2581 aataaacaaa taggggttcc gcgcacattt ccccgaaaag tgccacctga cgcgccctgt
2641 agcggcgcat taagcgcggc gggtgtggtg gttacgcgca gcgtgaccgc tacacttgcc
2701 agcgccctag cgcccgctcc tttcgctttc ttcccttcct ttctcgccac gttcgccggc
2761 tttccccgtc aagctctaaa tcgggggctc cctttagggt tccgatttag tgctttacgg
2821 cacctcgacc ccaaaaaact tgattagggt gatggttcac gtagtgggcc atcgccctga
2881 tagacggttt ttcgcccttt gacgttggag tccacgttct ttaatagtgg actcttgttc
2941 caaactggaa caacactcaa ccctatctcg gtctattctt ttgatttata agggattttg
3001 ccgatttcgg cctattggtt aaaaaatgag ctgatttaac aaaaatttaa cgcgaatttt
3061 aacaaaatat taacgcttac aatttacgcg ttaagataca ttgatgagtt tggacaaacc
3121 acaactagaa tgcagtgaaa aaaatgcttt atttgtgaaa tttgtgatgc tattgcttta
3181 tttgtaacca ttataagctg caataaacaa gttaacaaca acaattgcat tcattttatg
3241 tttcaggttc agggggaggt gtgggaggtt ttttaaagca agtaaaacct ctacaaatgt
3301 ggtatggctg attatgatca gttatctaga tccggtggat ccctacacag ccattgctgt
3361 cccgaatgtc tcctgcgagg cataaaccat gtacaggaag ccgtcttcat ctctctcact
3421 ctcgtacact tcggagatgg gagtggacac actcaccatg ctgtgcccat tcaccaggag
3481 gaagaaggct tggttagcat tgagctgcaa gcgccgtctg attatcttga tgagctcgct
3541 catgttcacg tggtcaggca ccaggaactt ggtcttgtcc aggacgggca gctgcttctc
3601 ccccttgtat cgctctataa tcactgggat cttggtgggg tgctgctccc ggatgagccg
3661 gacatcttcc actctttgtt caaagctccg gcgctgcttg aaggtcttct cggacggcat
3721 aagcttgagc tcgagatctg agtacttgta cagctcgtcc atgccgagag tgatcccggc
3781 ggcggtcacg aactccagca ggaccatgtg atcgcgcttc tcgttggggt ctttgctcag
3841 ggcggactgg gtgctcaggt agtggttgtc gggcagcagc acggggccgt cgccgatggg
3901 ggtgttctgc tggtagtggt cggcgagctg cacgctgccg tcctcgatgt tgtggcggat
3961 cttgaagttc accttgatgc cgttcttctg cttgtcggcc atgatataga cgttgtggct
4021 gttgtagttg tactccagct tgtgccccag gatgttgccg tcctccttga agtcgatgcc
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4141 gtagttgccg tcgtccttga agaagatggt gcgctcctgg acgtagcctt cgggcatggc
4201 ggacttgaag aagtcgtgct gcttcatgtg gtcggggtag cggctgaagc actgcacgcc
4261 gtaggtcagg gtggtcacga gggtgggcca gggcacgggc agcttgccgg tggtgcagat
4321 gaacttcagg gtcagcttgc cgtaggtggc atcgccctcg ccctcgccgg acacgctgaa
4381 cttgtggccg tttacgtcgc cgtccagctc gaccaggatg ggcaccaccc cggtgaacag
4441 ctcctcgccc ttgctcacca tggtggcgac cggtagcgct agcggatctg acggttcact
4501 aaaccagctc tgcttatata gacctcccac cgtacacgcc taccgcccat ttgcgtcaat
4561 ggggcggagt tgttacgaca ttttggaaag tcccgttgat tttggtgcca aaacaaactc
4621 ccattgacgt caatggggtg gagacttgga aatccccgtg agtcaaaccg ctatccacgc
4681 ccattgatgt actgccaaaa ccgcatcacc atggtaatag cgatgactaa tacgtagatg
4741 tactgccaag taggaaagtc ccataaggtc atgtactggg cataatgcca ggcgggccat
4801 ttaccgtcat tgacgtcaat agggggcgta cttggcatat gatacacttg atgtactgcc
4861 aagtgggcag tttaccgtaa atactccacc cattgacgtc aatggaaagt ccctattggc
4921 gttactatgg gaacatacgt cattattgac gtcaatgggc gggggtcgtt gggcggtcag
4981 ccaggcgggc catttaccgt aagttatgta acgcggaact ccatatatgg gctatgaact
5041 aatgaccccg taattgatta ctattaataa cta
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pEGFP-LC3b-m哺乳自噬质粒
别称: pEGFP-LC3b(mouse)
| 启动子: | CMV |
|---|---|
| 复制子: | pUC |
| 终止子: | SV40 poly(A) signal |
| 质粒分类: | 哺乳细胞，自噬表达载体 |
| 质粒大小: | 5073bp |
| 原核抗性: | Kan |
| 筛选标记: | G418 |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
| 表达宿主: | 哺乳细胞 |
| 诱导方式: | 无须诱导，瞬时表达 |
| 5'测序引物: | pEGFP-C-5:CATGGTCCTGCTGGAGTTCGTG |
| 3'测序引物: | 根据序列设计引物 |
质粒属性
| 载体宿主： | 哺乳细胞 |
|---|---|
| 载体用途： | 蛋白表达,自噬 |
| 基因种属： | 小鼠 |
| 基因类型： | ORF |
| 原核抗性： | Kan |
| 真核抗性： | Neo/G418 |
| 荧光蛋白： | 绿色 |
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 5073 bp ds-DNA circular SYN 05-SEP-2016
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS Untitled 7
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 5073)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Monday, September 5, 2016 from SnapGene Viewer 3.1.4
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..5073
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
rep_origin complement(115..703)
/direction=LEFT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
polyA_signal 1032..1079
/note="HSV TK poly(A) signal"
/note="herpes simplex virus thymidine kinase
polyadenylation signal (Cole and Stacy, 1985)"
CDS complement(1311..2105)
/codon_start=1
/gene="aph(3')-II (or nptII)"
/product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
/note="NeoR/KanR"
/note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418
(Geneticin(R))"
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SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPATC-PFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
GLAPAELFARLKASMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
promoter complement(2140..2497)
/note="SV40 promoter"
/note="SV40 enhancer and early promoter"
rep_origin 2154..2289
/note="SV40 ori"
/note="SV40 origin of replication"
promoter complement(2499..2603)
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
rep_origin 2630..3085
/direction=RIGHT
/note="f1 ori"
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
polyA_signal 3092..3213
/note="SV40 poly(A) signal"
/note="SV40 polyadenylation signal"
CDS complement(3745..4461)
/codon_start=1
/product="enhanced GFP"
/note="EGFP"
/note="mammalian codon-optimized"
/translation="MVSKGEELFTGVVPILVELDGDVNGHKFSVSGEGEGDATYGKLTL
KFICTTGKLPVPWPTLVTTLTYGVQCFSRYPDHMKQHDFFKSAMPEGYVQERTIFFKDD
GNYKTRAEVKFEGDTLVNRIELKGIDFKEDGNILGHKLEYNYNSHNVYIMADKQKNGIK
VNFKIRHNIEDGSVQLADHYQQNTPIGDGPVLLPDNHYLSTQSALSKDPNEKRDHMVLL
EFVTAAGITLGMDELYK"
promoter complement(4506..4709)
/note="CMV promoter"
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
enhancer 4710..5013
/note="CMV enhancer"
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
ORIGIN
1 atgcatggcg gtaatacggt tatccacaga atcaggggat aacgcaggaa agaacatgtg
61 agcaaaaggc cagcaaaagg ccaggaaccg taaaaaggcc gcgttgctgg cgtttttcca
121 taggctccgc ccccctgacg agcatcacaa aaatcgacgc tcaagtcaga ggtggcgaaa
181 cccgacagga ctataaagat accaggcgtt tccccctgga agctccctcg tgcgctctcc
241 tgttccgacc ctgccgctta ccggatacct gtccgccttt ctcccttcgg gaagcgtggc
301 gctttctcat agctcacgct gtaggtatct cagttcggtg taggtcgttc gctccaagct
361 gggctgtgtg cacgaacccc ccgttcagcc cgaccgctgc gccttatccg gtaactatcg
421 tcttgagtcc aacccggtaa gacacgactt atcgccactg gcagcagcca ctggtaacag
481 gattagcaga gcgaggtatg taggcggtgc tacagagttc ttgaagtggt ggcctaacta
541 cggctacact agaaggacag tatttggtat ctgcgctctg ctgaagccag ttaccttcgg
601 aaaaagagtt ggtagctctt gatccggcaa acaaaccacc gctggtagcg gtggtttttt
661 tgtttgcaag cagcagatta cgcgcagaaa aaaaggatct caagaagatc ctttgatctt
721 ttctacgggg tctgacgctc agtggaacga aaactcacgt taagggattt tggtcatgag
781 attatcaaaa aggatcttca cctagatcct tttaaattaa aaatgaagtt ttaaatcaat
841 ctaaagtata tatgagtaac ctgaggctat ggcagggcct gccgccccga cgttggctgc
901 gagccctggg ccttcacccg aacttggggg gtggggtggg gaaaaggaag aaacgcgggc
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1021 cccgcgttta tgaacaaacg acccaacacc gtgcgtttta ttctgtcttt ttattgccgt
1081 catagcgcgg gttccttccg gtattgtctc cttccgtgtt tcagttagcc tccccctagg
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1201 gaaaacgatt ccgaagccca acctttcata gaaggcggcg gtggaatcga aatctcgtga
1261 tggcaggttg ggcgtcgctt ggtcggtcat ttcgaacccc agagtcccgc tcagaagaac
1321 tcgtcaagaa ggcgatagaa ggcgatgcgc tgcgaatcgg gagcggcgat accgtaaagc
1381 acgaggaagc ggtcagccca ttcgccgcca agctcttcag caatatcacg ggtagccaac
1441 gctatgtcct gatagcggtc cgccacaccc agccggccac agtcgatgaa tccagaaaag
1501 cggccatttt ccaccatgat attcggcaag caggcatcgc catgggtcac gacgagatcc
1561 tcgccgtcgg gcatgctcgc cttgagcctg gcgaacagtt cggctggcgc gagcccctga
1621 tgctcttcgt ccagatcatc ctgatcgaca agaccggctt ccatccgagt acgtgctcgc
1681 tcgatgcgat gtttcgcttg gtggtcgaat gggcaggtag ccggatcaag cgtatgcagc
1741 cgccgcattg catcagccat gatggatact ttctcggcag gagcaaggtg agatgacagg
1801 agatcctgcc ccggcacttc gcccaatagc agccagtccc ttcccgcttc agtgacaacg
1861 tcgagcacag ctgcgcaagg aacgcccgtc gtggccagcc acgatagccg cgctgcctcg
1921 tcttgcagtt cattcagggc accggacagg tcggtcttga caaaaagaac cgggcgcccc
1981 tgcgctgaca gccggaacac ggcggcatca gagcagccga ttgtctgttg tgcccagtca
2041 tagccgaata gcctctccac ccaagcggcc ggagaacctg cgtgcaatcc atcttgttca
2101 atcatgcgaa acgatcctca tcctgtctct tgatcgatct ttgcaaaagc ctaggcctcc
2161 aaaaaagcct cctcactact tctggaatag ctcagaggcc gaggcggcct cggcctctgc
2221 ataaataaaa aaaattagtc agccatgggg cggagaatgg gcggaactgg gcggagttag
2281 gggcgggatg ggcggagtta ggggcgggac tatggttgct gactaattga gatgcatgct
2341 ttgcatactt ctgcctgctg gggagcctgg ggactttcca cacctggttg ctgactaatt
2401 gagatgcatg ctttgcatac ttctgcctgc tggggagcct ggggactttc cacaccctaa
2461 ctgacacaca ttccacagct ggttctttcc gcctcaggac tcttcctttt tcaatattat
2521 tgaagcattt atcagggtta ttgtctcatg agcggataca tatttgaatg tatttagaaa
2581 aataaacaaa taggggttcc gcgcacattt ccccgaaaag tgccacctga cgcgccctgt
2641 agcggcgcat taagcgcggc gggtgtggtg gttacgcgca gcgtgaccgc tacacttgcc
2701 agcgccctag cgcccgctcc tttcgctttc ttcccttcct ttctcgccac gttcgccggc
2761 tttccccgtc aagctctaaa tcgggggctc cctttagggt tccgatttag tgctttacgg
2821 cacctcgacc ccaaaaaact tgattagggt gatggttcac gtagtgggcc atcgccctga
2881 tagacggttt ttcgcccttt gacgttggag tccacgttct ttaatagtgg actcttgttc
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3241 tttcaggttc agggggaggt gtgggaggtt ttttaaagca agtaaaacct ctacaaatgt
3301 ggtatggctg attatgatca gttatctaga tccggtggat ccctacacag ccattgctgt
3361 cccgaatgtc tcctgcgagg cataaaccat gtacaggaag ccgtcttcat ctctctcact
3421 ctcgtacact tcggagatgg gagtggacac actcaccatg ctgtgcccat tcaccaggag
3481 gaagaaggct tggttagcat tgagctgcaa gcgccgtctg attatcttga tgagctcgct
3541 catgttcacg tggtcaggca ccaggaactt ggtcttgtcc aggacgggca gctgcttctc
3601 ccccttgtat cgctctataa tcactgggat cttggtgggg tgctgctccc ggatgagccg
3661 gacatcttcc actctttgtt caaagctccg gcgctgcttg aaggtcttct cggacggcat
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3901 ggtgttctgc tggtagtggt cggcgagctg cacgctgccg tcctcgatgt tgtggcggat
3961 cttgaagttc accttgatgc cgttcttctg cttgtcggcc atgatataga cgttgtggct
4021 gttgtagttg tactccagct tgtgccccag gatgttgccg tcctccttga agtcgatgcc
4081 cttcagctcg atgcggttca ccagggtgtc gccctcgaac ttcacctcgg cgcgggtctt
4141 gtagttgccg tcgtccttga agaagatggt gcgctcctgg acgtagcctt cgggcatggc
4201 ggacttgaag aagtcgtgct gcttcatgtg gtcggggtag cggctgaagc actgcacgcc
4261 gtaggtcagg gtggtcacga gggtgggcca gggcacgggc agcttgccgg tggtgcagat
4321 gaacttcagg gtcagcttgc cgtaggtggc atcgccctcg ccctcgccgg acacgctgaa
4381 cttgtggccg tttacgtcgc cgtccagctc gaccaggatg ggcaccaccc cggtgaacag
4441 ctcctcgccc ttgctcacca tggtggcgac cggtagcgct agcggatctg acggttcact
4501 aaaccagctc tgcttatata gacctcccac cgtacacgcc taccgcccat ttgcgtcaat
4561 ggggcggagt tgttacgaca ttttggaaag tcccgttgat tttggtgcca aaacaaactc
4621 ccattgacgt caatggggtg gagacttgga aatccccgtg agtcaaaccg ctatccacgc
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4981 ccaggcgggc catttaccgt aagttatgta acgcggaact ccatatatgg gctatgaact
5041 aatgaccccg taattgatta ctattaataa cta
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
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文献和实验相关实验
的。ATG5 在死亡肿瘤细胞中高表达，因此成为抗肿瘤治疗成功与否的重要指标，而 ATG12-ATG5-ATG16L 复合物的形成对自噬隔离膜的延伸是至关重要的。LC3 是 Atg8 在哺乳动物细胞中的同源物，LC3B-I(定位于胞浆) 与磷脂酰乙醇胺（PE）共价连接并插入到自噬体的双层膜中形成 LC3B II。LC3 偶联到自噬体上以及 LC3-I 转换成 LC3-II，已被用来作为自噬评价和测定的公认指标。自噬溶酶体形成自噬体与溶酶体的直接融合形成自噬溶酶体，形成过程中主要是 LAMP1、Rab
水平的高低。LC3 这一转变过程可被 Western Blot 和荧光显微镜检测到，现已成为监测自噬体形成的推荐方法。在哺乳动物中，LC3 包含 3 种亚型：LC3A、LC3B、LC3C，分布在不同的组织中，因此需要用不同的抗体去鉴定这3种亚型。 和元生物能够提供成熟的细胞自噬相关的技术服务 GFP-LC3 单荧光自噬指示体系： 利用 LC3 在自噬形成过程中发生聚集的现象构建了 GFP-LC3 指示体系，无自噬时，GFP-LC3 融合蛋白弥散在胞浆中；自噬形成时，GFP-LC3 融合
tianlang126 wrote: :(:(新手最近想做细胞自噬，想知道beclin1在自噬中起个什么样的作用？是不是表达beclin1就可以认为细胞发生了自噬？它和凋亡、坏死、炎症等有什么关系？它是通过什么信号通路起作用？ 希望各位大虾解解惑:8):8) 他是个明星分子 但是不是自噬的标志性分子 自噬的标志性分子是LC3 准确说是MAP1LC3B baker099 Beclin1在自噬的早期组装
pEGFP-LC3b-m哺乳自噬质粒
￥100 - 1000
