关键词: 免疫共沉淀
来源: 丁香园
6958 阅读
小弟是新手,刚开始做实验,向诸位请教一个问题。我要做一个蛋白的 IP,520个AA,58/55kDa,查文献都是用标签FLAG的抗体做的,但现在没有这个标签的真核表达载体,想直接转染后用目的蛋白的抗体做,不知 道可不可以?
还有就是,什么时候用标签,什么时候可以不用?标签的选择有没有要求?请大家不吝指教,**!ps:小弟新虫,金币不多,大家见谅啊!问题:看的文献上都是用含标签的目的蛋白基因的载体转染细胞,然后做IP,我想,是不是目的蛋白的抗体不适合做IP,所以转染时需要加个标签,以便用标签蛋白抗体将目的蛋白沉淀下来?如果能直接用目的蛋白的抗体,那正是我所期望的,试验简单啊。回答:
1、做Co-IP时是否选用Tag的抗体不是主要的,重要的是你用的抗体是否可以做IP以及IP的效果如何。所以说,如果你目标蛋白的抗体可以用于IP,且效 果好,就不需要顾及Tag的问题。
单就Co-IP或IP而言,goat抗体最好,mouse次之,rabbit不是太好,这里好坏的重要标准之一是 Western blot时重轻链信号的干扰问题.2、抗体能用就不需要标签。3、这个没有标准答案,只有做了才知道。理论上都是可行的,实际上也都是可做的,但有时候因为有些内源性蛋白质表达水平很低,做起来比较困难。而transfection则可以根据意愿是蛋白浓度尽可能高些,这样做起来容易。还有,不知道你做IP的目的是什么,如果是研究蛋白间的相互作用,也可以考虑其他手段,如GST-pulldown assay等。
更有优质直播、研选好物、福利活动等你来!
微球菌核酸酶实验DNA 电泳一直观察不到200bp
有人做过么?想交流一下
1 评论
请教各位大佬
具体研磨液配制的比例是多少?
楼主,那么多注释没有写明白哦,谢谢分享
本网站所有注明“来源:丁香园”的文字、图片和音视频资料,版权均属于丁香园所有,非经授权,任何媒体、网站或个人不得转载,授权转载时须注明“来源:丁香园”。本网所有转载文章系出于传递更多信息之目的,且明确注明来源和作者,不希望被转载的媒体或个人可与我们联系,我们将立即进行删除处理。
课题实验整体外包(单细胞测序、western blot、免疫共沉淀、免疫组化、免疫荧光、动物实验、细胞实验、ChIP实验)
上海吉凯基因医学科技股份有限公司
金牌会员 入驻 17 年
染色质免疫共沉淀(ChIP)实验
北京信生元生物医学科技有限公司
钻石会员 入驻 9 年
免疫共沉淀实验
北京百泰派克生物科技有限公司
钻石会员 入驻 8 年
安诺伦(北京)生物科技有限公司
免疫共沉淀 CO-IP实验
上海研匠生物科技有限公司
钻石会员 入驻 5 年
免疫共沉淀(CHIRP)实验
上海研谨生物科技有限公司
我的询价
询价列表
暂时没有已询价产品
手机验证
科研好物关注研选号