通过本实验掌握大肠杆菌感受态细胞的制备。细菌处于易于吸收外源DNA的状态叫感受态。细菌处于0℃的CaCl2低渗溶液中,菌细胞膨胀成球形。转化混合物中的DNA形成抗DNA酶的羟基-钙磷酸复合物黏附于细胞表面,经42℃段时间短时间热激处理,促进细胞吸收DNA复合物。1.超净工作台2.低温离心机3.恒温摇床4.高压灭菌锅5.恒温水浴锅6.培养皿(二)材料与试剂1.细菌:DH52.100mmol/LCaCl2(灭菌)3.LB培养基 . ...
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我曾经认识一个做博士后的家伙,这哥们竟然研究荒谬的怎么用眼睛“猜”菌液的OD值,我当时很是羡慕嫉妒恨,就在yy如果我能够直接用眼睛检测菌液的OD值,那能节省多少时间用于去把妹啊!可惜俺不是具有超能的人,不像我那哥们整个超太,拥有火眼金睛。但是想想把妹,俺日思夜想,闭门自宫(fuck,自宫了还把个pi啊),终于练就了火眼金睛,并写下《葵花宝典》供世人学习。欲练神功,必先自宫,保证除了春哥、月月之类都可以练就的。且看:Step 1: ...
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将待处理菌液盛于50毫升小烧瓶,先置于冰浴中30分钟,并在超声仪加入一些冰袋(超声仪预冷30分中)。以直径1厘米内插式探头插入菌液中(探头表面最好光滑),最好进行间歇式超声处理,探头距杯底0.5厘米----1.0厘米处不可接触杯底,也不可接触杯壁以防将杯壁超碎。.设置 开15秒 停45秒,12AM超10次左右。(如效果不佳如此反复以效果最佳定次数)(超声能量是100-350瓦.观察指标具体如下:1. 被处理细菌悬液的透明度和温度(完毕后 ...
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转化后在含抗生素的平板上长出的菌落即为转化子,根据此皿中的菌落数可计算出转化子总数和转化频率,公式如下:转化子总数=菌落数×稀释倍数×转化反应原液总体积/涂板菌液体积转化频率(转化子数/每ug质粒DNA)=转化子总数/质粒DNA加入量(ug)下面以大肠杆菌TG1电转感受态为例给你演示一下:第一天,上午取大肠杆菌TG1菌液划线平板(一般要48小时以上才能长出单 ...
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