原核表达

原核表达

标签: 原核表达 原理 实验方案

原核表达可以用于检测(1)发生在原核生物内的基因表达。(2)通过基因克隆技术,将外源目的基因,通过构建表达载体并导入表达菌株的方法,使其在特定原核生物或细胞内表达。

26 收藏 6948 阅读

详情

经验交流(2

  • PTWIN1做表达载体表达蛋白的问题

    我的表达载体是pTwin1,目的片段和载体均用BamHI 和NruI双酶切,连接,转化入T克隆菌,菌液验证,测序,测序正确;从该菌中提取重组质粒,转化表达菌BL21,菌液验证,然后1:100接种摇菌至OD600为0.6左右,加入IPTG 0.5mM,37度诱导,分别1小时,2小时,3小时,4小时,过夜取样,跑SDS-PAGE,看是否有目的条带。 pTwin1带有两个标签,但我用酶已经切掉了一个,所以他自身只带有一个大约24KD的标签,加上我的目的片段一3KD,大小应该为27KD左右;目的片段二25KD,大小应该为49KD。 我想问 :我的目的蛋白测序正确但好像没表达,怎么回事呢?我已经做了2个月了,很急,请大家帮忙看看,谢谢了。  目的片段一:1为PTWIN1未诱导,2为PTWIN1诱导,3为目的片段未诱导,4-8分别是1h目的片段取诱导样,2h目的片段取诱导样,3h目的片段取诱导样,4h目的片段取诱导样,目的片段过夜诱导取样。MARKER是(最上面那根不算,由上到下116,66.2,45,35,25,18.4,14.14)该目的蛋白应在27KD处表达,但仔细看好像没有表达。

      3 评论

  • 构建的原核表达载体不表达我的目的蛋白

    换了不同浓度的IPTG,用不同温度,不同诱导时间都做了,但都没有我的蛋白,菌落PCR,双酶切,测序都是对的,为什么不表达呢?

      3 评论

  • 发表经验交流

    版权声明

    我的询价

    询价列表

    暂时没有已询价产品

    inquiry icon 快捷询价
      当你希望让更多商家联系你时,可以勾选后发送询价,平台会将你的询价消息推荐给更多商家。
      个人名片

      编辑个人名片

      编辑
      yanxuan

      关注「丁香通研选」

      微信及时获得商家回复,

      获得更多交易信息和保障。

      丁香实验小程序

      微信关注
      丁香实验

      意见反馈