有关提取细胞蛋白做western blot的若干问题
DXY网友sunyuxiaoxi提问:细胞状态很好,想尽快做western blot。但是存在以下问题:我要在培养的细胞中注射一种药物,观察此药物作用不同时间下我要检测的指标的变化。我取的时间点是:注射药物后10 min,30 min,1 h,2 h,3 h,4 h。能否待我把各时间点的细胞都收集好了,再统一加细胞裂解液,然后测蛋白?但我所在实验室的有些同学说:不可以,必须是收集完细胞后马上加裂 ...
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细胞破碎的方法
问:我要分离细胞器,先要破碎细胞。查文章是用Polytron匀浆器或Dounce匀浆器或者Potter-Elvehjem匀浆器。请问它们有什么区别吗?价格是多少呢?细胞破碎能用玻璃的普通匀浆器代替吗?答:不同的细胞器分离的方法是不同的,因此随之而然的破碎细胞的方法也是有差异的。具体如下:一、细胞器的分离:制备某种生物大分子时,往往需要采用细胞中某一部分为材料;或者为了纯化某一特定细胞器上的生物 ...
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细胞裂解做western blot的相关问题
DXY网友mavisw提问:我用六孔板做细胞转染,转后要做western blot检测,今天裂解转染后的细胞时直接往六孔板的每个孔中加入了400微升的细胞裂解液,收集离心后未见沉淀,不知道用裂解产物做western blot蛋白含量够不够?DXY网友Pureflat回复:六孔板中加入400微升裂解液太多,这样会使你得到的蛋白浓度过低,满足不了Western blot上样的需要,我第一次做这个实验时 ...
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细胞培养液中蛋白的浓缩收集方法
问:我要用上清液做Elisa,但是上清液中的蛋白浓度不够,请问有什么方法可以把蛋白浓缩一下?答:蛋白质浓缩技术是免疫学中常用的手段,现介绍几种常用的浓缩技术。1、透析袋浓缩法利用透析袋浓缩蛋白质溶液是应用最广的一种。将要浓缩的蛋白溶液放入透析袋(无透析袋可用玻璃纸代替),结扎,把高分子(6 000-12 000)聚合物如聚乙二醇(碳蜡)、聚乙烯吡咯、烷酮等或蔗糖撒在透析袋外即可。也可将吸水剂 ...
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