巨噬细胞的分离和纯化
本文介绍从小鼠、豚鼠或家兔腹腔中分离巨噬细胞,家兔肺泡巨噬细胞的分离和纯化,从小鼠脾脏、胸腺和骨髓中分离巨噬细胞.
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软骨细胞培养
软骨细胞的原代培养龄新西兰乳兔(雌雄不限,共18只,分6次处理)溺死,置于75%酒精溶液中10分钟,拿入超净工作台,自眼外眦至耳屏前剪开皮肤暴露皮下组织,再次严格消毒,自外眦外将颧弓由根部剪断,暴露髁状突,去净髁状突表面软组织及软骨膜,以眼科剪剪取髁状突表面的透明软骨,以磷酸缓冲液(PBS含青霉素、链霉素各100U/L)冲洗2遍,将软骨剪切成1-3mm3 左右碎块,0.25%胰蛋白酶先消化30- ...
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细胞分离密度梯度离心原理
自从1977 年推出以来,二氧化硅胶体PercollTM已经成为全世界数以千计的研究人员对密度梯度介质的选择。其近乎完美的物理特征方便它在细胞、细胞器、病毒和其他亚细胞颗粒分离中的使用。Percoll做为第一步在进行更高分辨率分离或核酸抽提前富集细胞是非常有用的。人们会认识到在进行其他的这些方法前使用Percoll 做为第一步可以节省大量的时间和资源。对于生物学颗粒,理想的 ...
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加多了细胞裂解液是否有补救措施
问:我提取的是贴壁细胞蛋白,过程是1、PBS洗2遍后,细胞刮刮下后离心(没有消化,这样可以吗?)2、去上清,每管加入了加了188微升的裂解液和12微升的PMSF(是不是太多了?)。3、离心后,吸取140微升上清到新EP管中。4、加入5×sds上样缓冲和DTT(请问,这一步的我的比例应该是多少?我是上清:SDS:DTT=7:2:1。)今天跑胶后,考马斯亮蓝染色发现,条带淡到要靠想像才能看 ...
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