RT-PCR步骤
RT-PCR步骤:一、总RNA提取1. 取200mg组织,放到1.5mlEP管中,加入1mlTrizol剪碎。2. 震荡30s。3. 加0.2ml氯仿,剧烈摇动30s,室温3min。4. 12000×g,4℃离心,15min。5. 吸上层无色水相,移入另一EP管中(约0.5ml)。6. 加等体积异丙醇,-20℃,30min。7. 12000×g,4℃离心,10min。在管底部可 ...
来源:互联网 36952 阅读
RNA 提取策略及RT-PCR技术
第一部分RNA 提取策略一、提取原理1、RNA降解的原因:内源性RNAase是造成RNA降解的最重要原因,因为人体细胞自身就是几十分钟(20min?)mRNA被降解一轮,所以不管是组织还是细胞还是液体状样本在离开其中细胞的最佳生活状态后都应该尽快的被妥善的方法保存起来。外源性RNA酶也是一个需要注意的因素,最常见的就是毛发尤其头发,灰尘,唾液,塑料手套这四个兄弟。针对它们我们应该戴帽子,口罩,橡胶 ...
来源:互联网 35552 阅读
实时荧光定量PCR
聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)可对特定核苷酸片断进行指数级的扩增。在扩增反应结束之后,我们可以通过凝胶电泳的方法对扩增产物进行定性的分析,也可以通过放射性核素掺入标记后的光密度扫描来进行定量的分析。无论定性还是定量分析,分析的都是PCR终产物。但是在许多情况下,我们所感兴趣的是未经PCR信号放大之前的起始模板量。例如我们想知道某一转基因动植物转基因的拷贝数或者某一特定基 ...
来源:互联网 32781 阅读
逆转录-聚合酶链反应实验方法
逆转录-聚合酶链反应 (Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)的原理是:提取组织或细胞中的总RNA,以其中的mRNA作为模板,采用Oligo(dT)或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR扩增,而获得目的基因或检测基因表达。RT-PCR使RNA检测的灵敏性提高了几个数量级,使一些极为微量RNA样品 ...
来源:互联网 21450 阅读