【求助】RT-PCR怎么会有两条带
小鱼鱼小溪溪 条带有两条。一条为目的条带,479bp,另一条不知道是不是非特异性条带,241bp,两种条带都很清晰,如图所示:前三个泳道是样品,后三个泳道为内参。循环条件:94℃5 min;94℃30 S,60℃30 s,72℃30S,34个循环;72℃5 min。退火温度提高至62℃,仍然为两条条带,不知道是条件的问题还是引物特异性的问题,请教各位高手帮我解答。济南基美 如果普通PCR定量,可以不用管它,但从位置看是不是污染了内参的引物wgfki ...
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RT-PCR在基因表达检测中的应用
基因表达的检测有几种方法。经典的方法(仍然重要)是根据在细胞或生物体中 所观察到的生物化学或表型的变化来决定某一特定基因是否表达。随着大分子分离技 术的进步使得特异的基因产物或蛋白分子的识别和分离成为可能。随着重组DNA技术 的运用,现在有可能检测.分析任何基因的转录产物。目前有好几种方法广泛应用于 于研究特定RNA分子。这些方法包括原位杂交.NORTHERN凝胶分析.打点或印迹打 点.S-1核酸酶分析和RNA酶保护研究。这里描述 ...
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【分享】RT-PCR实验方法总结大全
RT-PCR实验有三步:抽提RNA,RT,PCR。要求:1.做RT前必需测RNA浓度,逆转录体系对RNA量还是有一些要求,常用500ng或1ug。2. RT按要求做,一般不会出太大问题。3. PCR,按常规。但如需扩长片段,则对前两步要求较高,需要有完整的cDNA存在,不是单改变Mg2+浓度、退火温度能解决的。1)RT和PCR时的引物设计是不是一定要先知道目的基因的序列?必须在RT时,引物设计有3种方法即a:Random 9mers;b . ...
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单细胞RT-PCR
实验过程中的玻璃塑料制品的处理:灭菌的一次性使用的塑料用品基本上无RNA酶,可以不经预处理直接用于制备和储存RNA。普通玻璃器皿必须在180度干烤8小时或更长。塑料器皿或不宜烘烤的其他器皿可以采用0.1%的DPEC的水溶液浸泡,灌满DPEC的玻璃或塑料器皿在37度放置2小时,然后灭菌水淋洗数次,在100度干烤15分钟,再高压下蒸汽灭菌15min,这样保证将RNase和DPEC都处理掉。
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