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APC 5'末端的扩增
8.9kb APC mRNA的5'末端序列获自由HeLa RNA得到的5.8kb长的cDNA第一链,对初步PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳分析显示,在所期望的APC 5'末端位置没有条带(数据没有显示),图2显示巢式PCR分别得到1.6kb和1.2kb长的APC 5'末端序列,巢式扩增显著地增加了产物产量。
图2 APC 5'末端的扩增。用对应APC mRNA的位置5846的GSP反转录1mg Hela总RNA得到APC mRNA。cDNA被纯化、加尾,和用对应位置1797(A带)和位置1632(B带)的引物和AAP一起,用ELONGASE酶混合物来扩增(94℃ 30s,接着35个循环的94℃ 15 s,55℃ 30 s,68℃ 5 min)。初步PCR用TE缓冲液稀释100倍,取1ml用引物APC-1632(A带)或引物APC-1242(B带)和AUAP分别重新扩增(30个循环),每个PCR产物取10ml在0.8%琼脂糖上,0.5倍TBE凝胶电泳和溴化乙锭染色
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RNA抽提后出现奇怪情况
按步骤用50mg的小鼠肝脏提取总RNA,用预冷的研钵和-70度保存的trizol共研磨组织,氯仿分层,异丙醇沉淀,75%乙醇洗一遍,风干后depc水溶解沉淀,1.5%的琼脂糖电泳220V,20min,结果图如下,各位大神能帮我看看是什么情况吗?
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siRNA转染后目的蛋白没有减低是为什么?
我想用siRNA抑制DMT1,在吉马公司买了三个siRNA,我用的是lipo2000转染,转染前饥饿2h,转染6小时,后换成完全培养基48小时,对照使用转染GAPDH做的,接下来WB检测DMT1,却没有观察到目的蛋白的下降,请问有人遇到过相似的情况吗?应该怎么解决。
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最后溶解样品用DEOC水的量
师兄师姐好,我第一次做提取RNA的实验,不知道最后用DEPC水溶解样品时,用多少的DEPC水呢?
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