右美托咪定通过激活AMPK/SIRT1信号通路增强自噬保护脓毒症肝损伤

背景：肝损伤是脓毒症的严重并发症之一。既往研究表明右美托咪定（DEX）可减轻盲肠结扎穿刺（CLP）诱导的肝损伤。然而，DEX对脓毒症诱导的肝损伤的保护作用是否与自噬相关尚不清楚。方法：小鼠（n=105）被随机分为以下各组：（i）CON组（假手术）；（ii）CLP组（CLP诱导的肝损伤+生理盐水）；（iii）CLP+DEX组（CLP诱导的肝损伤+DEX）。采用CLP建立脓毒症肝损伤小鼠模型。在CLP术后0、2、4小时腹腔注射DEX或生理盐水。计算120小时内的死亡率。在每组6、12、24小时测定丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）和炎性细胞因子水平。采用苏木精-伊红染色检测各组小鼠肝细胞形态学变化。使用蛋白质印迹法检测三组小鼠中自噬相关蛋白LC3II、Beclin-1、p62和LAMP-2的水平。使用免疫荧光检测LC3II的表达。使用透射电子显微镜（TEM）观察肝组织中的自噬体和自噬体-溶酶体。最后，使用蛋白质印迹法检测DEX对AMPK/SIRT1通路相关蛋白水平的影响。同时，我们使用感染mRFP-GFP-LC3腺病毒的L0-2细胞进一步分析SIRT1在DEX诱导的肝损伤模型自噬中的作用。结果：DEX显著提高了脓毒症小鼠早期的存活率，并改善了脓毒症肝损伤的病理。CLP诱导的脓毒症小鼠肝脏中自噬相关蛋白、磷酸化（p）-AMPK/AMPK和SIRT1的水平在CLP后12小时达到峰值，并在24小时显著下降。在CLP+DEX组中，自噬相关蛋白、p-AMPK/AMPK和SIRT1的水平升高，而炎性细胞因子在24小时下降。在CLP+DEX组的不同时间点清楚观察到自噬体结构。在体外肝细胞损伤模型中，SIRT1抑制剂显著增加了细胞内ROS水平，并逆转了DEX对自噬流的作用。结论：我们证明了一种新机制，其中DEX通过调节SIRT1/AMPK通路增强自噬，从而减轻CLP诱导的肝损伤中的炎症反应，保护CLP诱导的肝损伤。