生物信息学分析巨噬细胞在HT中的变化
评估HT患者外周血中巨噬细胞比例和M1型极化状态
分析GEO数据集GSE153434中的RNA测序数据,使用xCell估计巨噬细胞相关评分和基因特征,比较HT患者和健康对照的差异。
Puerarin Alleviates Experimental Autoimmune Thyroiditis by Regulating Macrophages.
结合了生物信息学分析、临床样本、小鼠模型、细胞实验和巨噬细胞清除实验等多个证据层,并进行功能验证和机制研究。
桥本甲状腺炎患者甲状腺组织 实验性自身免疫性甲状腺炎小鼠模型 RAW264.7小鼠巨噬细胞 人巨噬细胞
HT患者甲状腺组织中CD68+CD14+巨噬细胞增加 EAT小鼠模型中甲状腺组织炎症细胞浸润评分 IFN-γ刺激RAW264.7细胞诱导M1极化 通过氯膦酸盐脂质体清除巨噬细胞验证葛根素的依赖性
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
评估HT患者外周血中巨噬细胞比例和M1型极化状态
分析GEO数据集GSE153434中的RNA测序数据,使用xCell估计巨噬细胞相关评分和基因特征,比较HT患者和健康对照的差异。
验证葛根素对HT小鼠模型的治疗作用
C57BL/6雌性小鼠通过皮下注射猪甲状腺球蛋白和完全/不完全弗氏佐剂免疫建立EAT模型,并给予葛根素腹腔注射。通过H&E染色、免疫组化、ELISA等方法评估甲状腺炎症、自身抗体和巨噬细胞浸润。
明确葛根素对巨噬细胞极化的影响
通过qPCR、流式细胞术和免疫荧光检测甲状腺组织和淋巴结中M1和M2型巨噬细胞标志物的表达。
验证葛根素对IFN-γ诱导的巨噬细胞炎症和极化的直接影响及机制
RAW264.7细胞和人巨噬细胞用IFN-γ刺激,并用葛根素处理,通过CCK-8、ELISA、qPCR和Western blot检测细胞活力、炎症因子分泌、M1/M2标志物和焦亡相关蛋白表达。
验证葛根素治疗HT的机制依赖于巨噬细胞
使用氯膦酸盐脂质体清除EAT小鼠体内的巨噬细胞,比较葛根素单独或与氯膦酸盐脂质体联合使用的治疗效果,通过H&E染色和ELISA评估。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 流式细胞术 | 抗小鼠F4/80抗体 | BioLegend | 123113 |
| 抗小鼠诱导型一氧化氮合酶抗体 | BioLegend | 696803 | |
| 免疫组织化学 | 抗CD45抗体 | Cell Signaling Technology | 70275 |
| 免疫荧光 | 抗CD14抗体 | Abcam | ab221678 |
| 抗CD68抗体 | Abcam | ab283654 | |
| Alexa Fluor 594 | Abcam | ab150116 | |
| Alexa Fluor 488 | Abcam | ab150113 | |
| 共聚焦显微镜 | Olympus | -- | |
| ELISA | TG抗体ELISA试剂盒 | Cusabio | CSB-E08241m |
| TPO抗体ELISA试剂盒 | Cusabio | CSB-E08353m | |
| IL-10 ELISA试剂盒 | Elabscience | E-MSEL-M0031 | |
| IL-17A ELISA试剂盒 | Elabscience | E-MSEL-M0006 | |
| CCL2 ELISA试剂盒 | Elabscience | E-EL-M3001 | |
| TNF-α ELISA试剂盒 | Elabscience | E-MSEL-M0002 | |
| IL-6 ELISA试剂盒 | Elabscience | E-MSEL-M0001 | |
| IL-1β ELISA试剂盒 | Elabscience | E-MSEL-M0003 | |
| 酶标仪 | BioTek Instruments | -- | |
| RNA提取和RT-PCR | TRIzol试剂 | Vazyme Biotech | -- |
| PrimeScript RT试剂盒 | Vazyme Biotech | -- | |
| SYBR Green 混合液 | Vazyme Biotech | -- | |
| ViiA 7实时荧光定量PCR系统 | Applied Biosystems | -- | |
| 细胞培养 | DMEM培养基 | Life Technologies | -- |
| 青霉素/链霉素 | Life Technologies | -- | |
| 恒温培养箱 | Thermo Fisher Scientific | -- | |
| 干扰素-γ | Sigma-Aldrich | -- | |
| 细胞活力检测 | 细胞计数试剂盒-8 | Beyotime Technology | -- |
| 细胞培养 | 酶标仪 | Thermo Fisher Scientific | -- |
| 巨噬细胞分离培养 | 组织解离试剂盒 | Miltenyi Biotec | -- |
| CD11b磁珠试剂盒 | Miltenyi Biotec | -- | |
| 人巨噬细胞培养 | RPMI 1640培养基 | Life Technologies | -- |
| 巨噬细胞集落刺激因子 | -- | -- | |
| Western blot | BCA蛋白定量试剂盒 | Thermo Fisher Scientific | -- |
| 抗IL-1β抗体 | Cell Signaling Technology | 2022 | |
| 抗cleaved caspase-1抗体 | Cell Signaling Technology | 4199 | |
| 抗caspase-1抗体 | Cell Signaling Technology | 2225 | |
| 抗p65抗体 | Cell Signaling Technology | 8242S | |
| 抗磷酸化p65抗体 | Cell Signaling Technology | 3033S | |
| 抗磷酸化STAT3抗体 | Cell Signaling Technology | 9145P | |
| 抗STAT3抗体 | Cell Signaling Technology | 9132 | |
| 抗GAPDH抗体 | Bioword Technology | 110603 | |
| HRP标记的山羊抗兔二抗 | Bioworld | AB65151 | |
| ECL Plus化学发光试剂 | -- | -- | |
| Quality One成像系统 | Bio-Rad Laboratories | -- | |
| 动物模型 | 猪甲状腺球蛋白 | -- | -- |
| 完全弗氏佐剂 | -- | -- | |
| 不完全弗氏佐剂 | -- | -- | |
| 葛根素注射液 | Shandong Fangming Pharmaceutical Group | H20033292 |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| EAT小鼠模型构建 | 动物品系、性别、年龄、免疫原剂量(猪甲状腺球蛋白)、佐剂类型、免疫途径、免疫时间、葛根素剂量、给药方式、给药频率 阅读提示:Materials and Methods - Construction of an experimental autoimmune thyroiditis mouse model |
| 体外巨噬细胞实验 | 细胞系、培养条件、刺激物(IFN-γ)浓度、处理时间、葛根素浓度、细胞密度、分组设置 阅读提示:Materials and Methods - Cell culture, figure 5 legend |
| 人巨噬细胞培养 | PBMC来源、分离方法、M-CSF浓度及诱导时间、培养条件、IFN-γ和葛根素处理浓度及时间 阅读提示:Materials and Methods - Extraction and culture of human macrophages |
| 巨噬细胞清除实验 | 氯膦酸盐脂质体剂量、给药时间、给药途径、对照组设置、模型构建方法 阅读提示:Materials and Methods - Macrophage clearance assay |