细胞增殖和活力评估
评估VMW-FC对CRC细胞生长和活力的影响
使用HT-29、SW480和SW620细胞系,进行细胞计数、MTT和集落形成实验,处理浓度为0、2、4 mg/ml,处理48小时(集落形成实验为2周)。
Anti-Colorectal Cancer Effects of Fucoidan Complex-Based Functional Beverage Through Retarding Proliferation, Cell Cycle and Epithelial-Mesenchymal Transition Signaling Pathways.
包含体外细胞实验(增殖、迁移、凋亡)、体内小鼠模型及安全性评估,并进行了基因和蛋白水平的机制验证。
人结直肠癌细胞系HT-29、SW480、SW620 NOD/SCID小鼠皮下移植瘤模型(HT-29细胞)
VMW-FC处理浓度:0、2、4 mg/ml 细胞处理时间:48小时 动物模型:NOD/SCID小鼠皮下接种HT-29细胞(1×10^6) 动物给药剂量:960 mg/kg/day,口服灌胃 统计方法:单因素方差分析、双因素方差分析、学生t检验
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
评估VMW-FC对CRC细胞生长和活力的影响
使用HT-29、SW480和SW620细胞系,进行细胞计数、MTT和集落形成实验,处理浓度为0、2、4 mg/ml,处理48小时(集落形成实验为2周)。
评估VMW-FC对CRC细胞迁移能力的影响
通过伤口愈合和transwell迁移实验检测处理后的细胞迁移能力。
评估VMW-FC对CRC细胞周期分布和凋亡的影响
通过流式细胞术进行细胞周期分析和Annexin V-PE/7-AAD双染凋亡检测。
阐明VMW-FC调控的增殖、细胞周期、凋亡和EMT相关基因和蛋白表达
通过qPCR检测基因表达,Western blot检测蛋白表达。
评估VMW-FC对体内肿瘤生长的抑制作用及其安全性
使用NOD/SCID小鼠皮下接种HT-29细胞,待肿瘤体积达100±30 mm³后,每日口服灌胃VMW-FC(500 µl,浓度对应960 mg/kg/day),测量肿瘤体积,并进行肝肾组织的H&E染色。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 细胞培养 | RPMI-1640培养基 | Gibco | 23400-021 |
| 胎牛血清 | Corning | 35-010-CV | |
| 抗生素-抗真菌溶液 | Corning | 30-004-CI | |
| 细胞活力检测 | 甲基噻唑基二苯基四唑溴化物 | Sigma-Aldrich | M5655 |
| 二甲基亚砜 | Sigma-Aldrich | D5879 | |
| 集落形成实验 | 福尔马林 | Macron | H121-08 |
| 结晶紫 | Fisher Scientific | C581-25 | |
| Transwell迁移实验 | 乙酸 | Merck | 695092 |
| 细胞周期分析 | 乙醇 | Honeywell | 32221 |
| 核糖核酸酶A | Sigma-Aldrich | 10109142001 | |
| 碘化丙啶 | Sigma-Aldrich | 11348639001 | |
| 细胞过滤器 | Falcon | 352340 | |
| 凋亡检测 | Annexin V-PE/7-AAD凋亡检测试剂盒 | Elabscience | E-CK-A216 |
| qPCR | 总RNA小量提取试剂盒 | Geneaid | RB050 |
| RevertAid H minus第一链cDNA合成试剂盒 | Thermo scientific | K1632 | |
| Western blot | RIPA裂解液 | Millipore | CA92590 |
| PVDF膜 | Merck Millipore | IPVH00010 | |
| 牛血清白蛋白 | Cytiva | SH30574.02 | |
| 细胞周期蛋白A2抗体 | Cell Signaling Technology | 4656 | |
| 细胞周期蛋白B1抗体 | Cell Signaling Technology | 12231 | |
| 细胞周期蛋白D1抗体 | Cell Signaling Technology | 2978 | |
| CDK2抗体 | Cell Signaling Technology | 2546 | |
| CDK4抗体 | Cell Signaling Technology | 2546 | |
| CDK6抗体 | Cell Signaling Technology | 13331 | |
| 波形蛋白抗体 | Cell Signaling Technology | 3932 | |
| N-钙黏蛋白抗体 | Cell Signaling Technology | 13116 | |
| E-钙黏蛋白抗体 | Cell Signaling Technology | 4065 | |
| β-连环蛋白抗体 | Cell Signaling Technology | 8480 | |
| β-肌动蛋白抗体 | Millipore | MAB1501 | |
| 抗兔IgG二抗 | Cell Signaling Technology | 7074 | |
| 抗小鼠IgG二抗 | Cell Signaling Technology | 7076 | |
| 增强化学发光试剂盒 | Bionovas | FL0010-0170 |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 细胞培养 | 细胞系来源、培养基、血清和抗生素浓度 阅读提示:Materials and Methods - Cell Culture |
| 细胞活力检测 | 细胞接种密度、VMW-FC浓度、处理时间、MTT孵育时间、测量波长 阅读提示:Materials and Methods - Cell Viability |
| 集落形成实验 | 细胞接种密度、VMW-FC浓度、处理时间、培养基更换频率、染色和计数方法 阅读提示:Materials and Methods - Colony Formation Assay |
| 迁移实验 | 细胞接种密度、VMW-FC浓度、处理时间、伤口愈合实验的观察时间点、transwell实验的孵育时间 阅读提示:Materials and Methods - Wound-Healing Assay 和 Transwell Migration Assays |
| 细胞周期和凋亡分析 | VMW-FC浓度、处理时间、染色步骤、流式细胞仪设置 阅读提示:Materials and Methods - Cell Cycle Analysis 和 Apoptosis Detection |
| qPCR | RNA提取方法、cDNA合成、引物序列、定量方法 阅读提示:Materials and Methods - Real-Time Polymerase Chain Reaction (qPCR) |
| Western blot | 裂解液、蛋白上样量、抗体稀释度、检测方法 阅读提示:Materials and Methods - Western Blot |
| 动物实验 | 小鼠品系、性别、年龄、接种细胞数和部位、给药剂量和方式、肿瘤测量方法、伦理批准号 阅读提示:Materials and Methods - Animal Studies |