MLZD成分鉴定
鉴定MLZD中的潜在活性成分。
通过网络药理学和LC-MS分析,从10味中药中筛选出7个活性成分。
Modified Linggui Zhugan Decoction protects against ventricular remodeling through ameliorating mitochondrial damage in post-myocardial infarction rats.
包含SD大鼠MI模型和H9c2细胞OGD模型,通过超声心动图、组织学染色、TUNEL、Western blot、透射电镜等,进行功能验证和机制验证(SIRT3抑制剂3-TYP阻断实验)。
SD大鼠MI模型(LAD结扎) H9c2心肌细胞OGD模型
MI模型建立:SD大鼠LAD结扎 MLZD给药剂量:19.95 g/(kg·day),术后第1天开始,连续4周 OGD处理:无糖无血清DMEM,低氧(1% O2)4小时,复氧24小时 SIRT3抑制:3-TYP浓度1 μM 分组:大鼠分为Sham、MI、MLZD;细胞分为CON、OGD、3-TYP、OGD+3-TYP、MLZD、OGD+MLZD、OGD+MLZD+3-TYP
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
鉴定MLZD中的潜在活性成分。
通过网络药理学和LC-MS分析,从10味中药中筛选出7个活性成分。
评估MLZD对MI后心室重构的影响。
SD大鼠LAD结扎建立MI模型,术后给予MLZD灌胃4周,通过超声心动图、HE染色、Masson染色评估心脏结构和功能。
检测MLZD对MI后心肌凋亡的影响。
通过TUNEL染色、Western blot和免疫组化检测凋亡相关蛋白表达。
检测MLZD对MI后心肌炎症的影响。
通过Western blot检测炎症相关蛋白表达。
评估MLZD对MI后线粒体结构、动力学和功能的影响。
通过透射电镜观察线粒体超微结构,Western blot和免疫组化检测线粒体动力学和功能相关蛋白,检测MMP和SOD2水平。
探究MLZD对SIRT3表达的影响。
通过Western blot和免疫组化检测心肌组织和H9c2细胞中SIRT3表达。
验证MLZD的保护作用是否依赖SIRT3。
使用SIRT3抑制剂3-TYP处理H9c2细胞,检测细胞活力、SIRT3表达、线粒体功能等。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 成分鉴定 | 沃特世Acquity超高效液相色谱 | Waters | -- |
| 免疫组化 | SIRT3抗体 | Cell Signaling | 2627S |
| 抗线粒体融合蛋白2抗体 | Abcam | ab101055 | |
| 磷酸化Drp1抗体 | Cell Signaling | 4867S | |
| 抗Bax抗体 | BOSTER | BM3964 | |
| 抗Bcl-2抗体 | Proteintech | 26593-1-AP | |
| DAB检测试剂盒 | ZSGB-BIO | ZLI-9017 | |
| 凋亡检测 | TUNEL试剂盒 | Roche | -- |
| 细胞培养 | H9c2细胞 | Procell | CL-0089 |
| DMEM培养基 | Solarbio | 11995 | |
| 胎牛血清 | Gibco | 16000044 | |
| 链霉素-青霉素 | Solarbio | P1400 | |
| 无糖无血清DMEM | Gibco | 11966025 | |
| 药物处理 | 3-TYP | Solarbio | IT1960 |
| 细胞活力检测 | CCK-8试剂盒 | Dojindo | CK04 |
| 线粒体功能检测 | 大鼠细胞色素C氧化酶ELISA试剂盒 | RENJIEBIO | RJ16349 |
| 线粒体复合物I活性检测试剂盒 | Solarbio | BC0515 | |
| ATP化学发光检测试剂盒 | Elabscience | E-BC-F002 | |
| 线粒体膜电位检测 | 四甲基罗丹明甲酯 | -- | -- |
| Western blot | Omni-easy™一步法PAGE凝胶快速制备试剂盒 | Epizyme | PG212 |
| PVDF膜 | Solarbio | YA1700/YA1701 | |
| 脱脂奶粉 | Cell Signaling | 9999S | |
| 抗SIRT3抗体 | Cell Signaling | 2627S | |
| 抗SOD2/MnSOD抗体 | Abcam | ab16956 | |
| 抗线粒体融合蛋白2抗体 | Abcam | ab101055 | |
| 抗线粒体融合蛋白2抗体 | Bioss | bs-2988R | |
| Drp1抗体 | Proteintech | 12957-1-AP | |
| COX IV抗体 | Cell Signaling | 4850S | |
| PGC-1α抗体 | Abcam | ab54481 | |
| PPAR-γ抗体 | Wanleibio | WL01800 | |
| 细胞色素c抗体 | Cell Signaling | 11940S | |
| cleaved caspase-3抗体 | Cell Signaling | 9664S | |
| 抗Bax抗体 | Wanleibio | WL01637 | |
| 抗Bcl-2抗体 | Wanleibio | WL01556 | |
| NLRP3抗体 | NSJBIO | R30750 | |
| ASC抗体 | Affinity Biosciences | DF6304 | |
| caspase-1抗体 | Santa Cruz | sc-392736 | |
| NFκB p50抗体 | Abcam | ab32360 | |
| NFκB p65抗体 | Abcam | ab194726 | |
| IL-1β抗体 | Affinity Biosciences | AF5103 | |
| HRP标记的山羊抗兔IgG (H&L) | Bioss | bs-40295G-HRP | |
| 山羊抗小鼠IgG (H&L) | Beyotime | A0216 | |
| Gel Doc™ XR+凝胶成像系统 | Bio-Rad | -- | |
| Clarity max Western ECL底物 | Bio-Rad | 1705062 | |
| 统计分析 | GraphPad Prism软件(8.0版) | -- | -- |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| MI模型建立 | LAD结扎位置、大鼠品系、性别、体重、麻醉剂量、术后分组 阅读提示:见2.2 Model induction of MI in rats |
| MLZD给药 | 给药剂量、给药方式、给药时间、药物制备 阅读提示:见2.3 Preparation of MLZD and interventions |
| 超声心动图检测 | 麻醉剂量、检测参数、心动周期平均 阅读提示:见2.4 Echocardiography and specimen collection |
| OGD模型建立 | 细胞系、OGD时间、低氧条件、复氧时间 阅读提示:见2.7 Cell culture and treatments |
| SIRT3抑制实验 | 3-TYP浓度、处理时间 阅读提示:见2.7 Cell culture and treatments |
| 线粒体功能检测 | 检测试剂盒、检测步骤、计算方式 阅读提示:见2.9 Measurement of mitochondrial electron transport chain complex I and IV, and ATP content |