动脉粥样硬化相关的lnc_000048激活PKR以增强STAT1介导的THP-1巨噬细胞M1表型极化

我们之前的研究已证明，lnc_000048在大动脉粥样硬化性卒中中上调，并促进ApoE–/–小鼠的动脉粥样硬化。然而，关于lnc_000048在经典活化巨噬细胞（M1）极化中的作用知之甚少。在本研究中，我们建立了THP-1衍生的静息状态巨噬细胞（M0）、M1巨噬细胞和交替活化巨噬细胞（M2）。采用实时荧光定量PCR验证巨噬细胞中标记基因的表达和lnc_000048的表达。流式细胞术检测表型蛋白（CD11b、CD38、CD80）。我们通过慢病毒介导的lnc_000048上调或下调建立了细胞系。流式细胞术、western blot和实时荧光定量PCR结果表明，下调lnc_000048可减少M1巨噬细胞极化和炎症反应，而过表达lnc_000048则产生相反的效果。Western blot结果表明，lnc_000048增强了STAT1通路的激活并介导M1巨噬细胞极化。此外，使用catRAPID预测、RNA pull-down和质谱法鉴定并筛选RNA激活的蛋白激酶（PKR），然后使用catRAPID和RPIseq预测lnc_000048与PKR的结合能力。采用免疫荧光（IF）-RNA荧光原位杂交（FISH）双标记验证lnc_000048和PKR在M1巨噬细胞胞质中的亚细胞共定位。我们推测lnc_000048可能形成茎环结构特异性结合并通过诱导其磷酸化激活PKR，导致STAT1磷酸化激活，从而增强STAT1通路介导的THP-1巨噬细胞向M1极化及炎症因子表达。综上所述，这些结果揭示lnc_000048/PKR/STAT1轴在M1巨噬细胞极化中发挥关键作用，可能成为减轻卒中动脉粥样硬化的新治疗靶点。