利用分子对接和网络药理学探讨麻黄附子细辛汤治疗阿尔茨海默病的机制

目的：利用网络药理学、分子对接方法探讨麻黄附子细辛汤（MFXD）治疗阿尔茨海默病（AD）的潜在机制，并通过体外实验验证其疗效。方法：从TCMSP、BATMAN-TCM和TCMID中筛选MFXD的活性成分，相应的靶点从SwissTargetPrediction和TCMSP中获得。从GEO中检索AD相关的差异基因。通过维恩图识别交集靶点，随后进行GO/KEGG富集分析、PPI网络构建和分子对接。使用Aβ25–35诱导的PC12细胞进行体外验证实验，以模拟AD的病理状态。对于细胞活力的检测，采用CCK-8法评估MFXD及其活性成分对受损PC12细胞的保护作用。使用Western blot分析测定AD相关信号通路中关键分子的蛋白表达水平，包括磷酸化p-NF-κB p65、NF-κB p65、p-GSK-3β、GSK-3β、MMP-9、p-Tau和Tau。此外，利用ELISA检测Aβ25–35诱导的PC12细胞上清液中TNF-α的分泌水平，以评估MFXD的抗炎作用。结果：共鉴定出MFXD的37种活性成分和230个靶点，以及来自GEO数据集GSE122063的4913个AD相关差异表达基因，产生47个交集靶点。GO注释将这些靶点富集在活性氧代谢等生物过程、细胞外基质等细胞组分以及神经递质结合等功能；KEGG分析富集了多个通路，如TNF信号通路、钙信号通路和NF-κB信号通路。交集靶点PPI网络确定MMP9、EGFR、FOS为核心靶点。分子对接结果显示，槲皮素与三个核心靶点（MMP9、EGFR、FOS）结合，而木犀草素优先结合EGFR和MMP9。体外实验表明，经槲皮素/木犀草素处理的Aβ25–35诱导的PC12细胞活力呈浓度依赖性增加（均P < 0.001）；含15% MFXD血清将细胞活力恢复至≥95%（与AD模型相比P < 0.001，与DHCL相当）。Western blot显示，AD模型组p-NF-κB p65/NF-κB p65、MMP9/β-actin、p-Tau/Tau升高，p-GSK-3β/GSK-3β降低（均P < 0.05）；MFXD逆转了这些变化（均P < 0.05），而DHCL仅抑制p-NF-κB p65/NF-κB p65。ELISA显示MFXD和DHCL均降低了AD模型的TNF-α（均P < 0.001）。结论：MFXD可能通过多组分、多靶点、多通路的方式发挥抗AD作用。其关键活性成分（槲皮素、木犀草素）可能通过调节核心靶点MMP9发挥作用。此外，MFXD可同时调节多个通路，如TNF信号通路、钙信号通路和NF-κB信号通路，并通过恢复GSK-3β的磷酸化水平来抑制Tau的异常过度磷酸化，从而靶向Tau蛋白相关病理，减轻AD的病理损伤。