建立CSU大鼠模型
通过OVA致敏建立慢性自发性荨麻疹大鼠模型,模拟人类CSU的病理特征。
在实验第0、2、4天腹腔注射含1 mg OVA的铝佐剂悬液,第14天注射含2 mg OVA的铝佐剂悬液,对照组注射生理盐水。
Palmatine treats urticaria by reducing inflammation and increasing autophagy.
研究包含OVA诱导的CSU大鼠模型,观察行为学、组织病理、炎症因子、肥大细胞及自噬蛋白等多个指标,但缺少体外及患者样本验证,未明确功能验证。
OVA诱导的CSU大鼠模型
CSU大鼠模型:通过腹腔注射卵清蛋白(OVA)诱导,在第0、2、4天给予1 mg OVA铝佐剂悬液,第14天给予2 mg OVA。 分组:大鼠随机分为Control、OVA、OVA+LOR(氯雷他定0.9 mg/kg)和OVA+PAL(40 mg/kg)组,每组6只。 给药方式:PAL、LOR和生理盐水在第5-14天每天一次灌胃。 检测指标:皮肤瘙痒行为、皮肤组织病理(HE染色)、肥大细胞计数(甲苯胺蓝染色)、炎症因子(IL-4、IL-6、IL-12、IFN-γ、IL-17A、IL-23)水平、血清IgE、LTB4、组胺水平、自噬相关蛋白表达(Western blot和免疫荧光)。 统计分析:数据以平均值±标准差表示,多组比较采用ANOVA(方差不齐时用Welch's ANOVA)或Kruskal-Wallis检验,P<0.05为差异有统计学意义。
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
通过OVA致敏建立慢性自发性荨麻疹大鼠模型,模拟人类CSU的病理特征。
在实验第0、2、4天腹腔注射含1 mg OVA的铝佐剂悬液,第14天注射含2 mg OVA的铝佐剂悬液,对照组注射生理盐水。
评估PAL对CSU大鼠模型的干预效果,并与阳性对照氯雷他定比较。
从第5天到第14天,每天一次通过灌胃给予大鼠生理盐水(OVA组和Control组)、0.9 mg/kg氯雷他定(LOR组)或40 mg/kg PAL(PAL组)。
评估PAL对CSU大鼠瘙痒行为的影响。
在最后一次OVA注射后10分钟,观察大鼠20分钟的抓挠行为,记录抓挠次数。
评估PAL对CSU大鼠皮肤组织病理学改变的影响。
通过HE染色观察皮肤组织形态,甲苯胺蓝染色计数肥大细胞,免疫组织化学检测MCT和EPX表达。
评估PAL对CSU大鼠炎症反应和过敏反应的影响。
采用ELISA检测皮肤组织中IL-4、IL-6、IL-12、IL-17A、IL-23和IFN-γ的浓度,以及血清中IgE、LTB4和组胺的浓度;通过免疫荧光染色检测Ly6G阳性细胞评估中性粒细胞浸润。
评估PAL对CSU大鼠皮肤自噬活性的影响。
使用透射电镜观察自噬囊泡数量,通过免疫荧光和Western blot检测自噬相关蛋白(Beclin-1、LC3、P62、LKB1、p-AMPK、AMPK、p70S6K1、p-p70S6K1、Atg5、Atg12、Atg5-Atg12复合物)的表达。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 动物实验 | 卵清蛋白 | Sigma Aldrich | S7951 |
| 氯雷他定 | MCE | HY-17043 | |
| 黄连素 | ABPHYTO | AFBF2751 | |
| 组织学染色 | HE染色试剂盒 | KeyGEN Biotech | KGA224 |
| 甲苯胺蓝溶液 | Servicebio | G1032 | |
| 免疫组化 | 免疫组化试剂盒 | Maxim | KIT-5001 |
| 抗TPSAB1抗体 | Proteintech | 13343-1-AP | |
| 抗EPX抗体 | Bioss | bs-3881R | |
| ELISA | IL-4 ELISA试剂盒 | Solarbio | SEKR-0004 |
| IL-6 ELISA试剂盒 | Solarbio | SEKR-0005 | |
| IL-12 ELISA试剂盒 | Elabscience | E-EL-R0064c | |
| IL-17A ELISA试剂盒 | Elabscience | E-EL-R0566c | |
| IL-23 ELISA试剂盒 | Elabscience | E-EL-R0569c | |
| IFN-γ ELISA试剂盒 | Elabscience | E-EL-R0009 | |
| IgE ELISA试剂盒 | Solarbio | SEKR-0019 | |
| LTB4 ELISA试剂盒 | Cusabio | CSB-E08035r | |
| 组胺ELISA试剂盒 | Elabscience | E-EL-0032c | |
| Western blot | RIPA裂解液 | Beyotime | P0013B |
| PVDF膜 | Millipore | -- | |
| 免疫荧光 | DAPI | Santa Cruz | sc-24941 |
| Western blot | 抗Beclin-1抗体 | Prointech | 66665-1-Ig |
| 抗LC3A/B抗体 | Prointech | 4108 | |
| 抗P62抗体 | Prointech | 18420-1-AP | |
| 抗LKB1抗体 | Prointech | 3047 | |
| 抗AMPK抗体 | Proteintech | 5831 | |
| 抗磷酸化p70S6K1抗体 | Abcam | ab32529 | |
| Atg5-Atg12复合物抗体 | Bio-Rad | AAM79 | |
| 山羊抗大鼠IgG H&L(HRP) | Abcam | ab150157 | |
| 山羊抗兔IgG H&L(HRP) | Abcam | ab6721 | |
| 增强化学发光试剂盒 | Thermo Fisher Scientific | -- | |
| 天能6600发光成像工作站 | Tanon | -- | |
| 显微观察 | 相差显微镜 | Olympus Corporation | -- |
| 光学显微镜 | Olympus Corporation | -- | |
| 激光共聚焦显微镜 | -- | -- | |
| 荧光显微镜 | -- | -- | |
| 透射电镜 | 透射电子显微镜 | Thermo Fisher Scientific | -- |
| ELISA | 酶标仪 | Berthold Technologies GmbH | -- |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 动物模型建立 | SD大鼠的性别、年龄、体重、来源;OVA剂量和注射时间;麻醉方法未明确说明。 阅读提示:Material and methods, 2.2 Experimental schedule and model replication |
| 药物治疗 | PAL剂量、LOR剂量、给药途径、给药时间;溶解于何种溶媒未明确说明。 阅读提示:Material and methods, 2.2 Experimental schedule and model replication |
| 组织病理学检查 | 组织固定、脱水、包埋方法;HE染色试剂盒;甲苯胺蓝染色浓度和时间;免疫组化抗体稀释度。 阅读提示:Material and methods, 2.4.2, 2.4.4, 2.4.5 |
| 炎症因子检测 | 皮肤组织匀浆制备方法;ELISA试剂盒种类;血清分离方法。 阅读提示:Material and methods, 2.4.3, 2.4.6 |
| 自噬检测 | 电镜制样步骤;Western blot抗体稀释度;免疫荧光抗体浓度。 阅读提示:Material and methods, 2.4.7, 2.4.8, 2.4.9 |